Способ получения альфа-липопротеина из плаценты человека
Изобретение относится к биохимии и позволяет повысить качество целевого продукта. Дольки плаценты замораживают, растирают, обрабатывают этиловым спиртом, затем фильтруют. После выпадения осадка надосадочную жидкость смешивают с насыщенным раствором бензойной кислоты в 95% этиловом спирте. Отделяют осадок фильтрованием и промывают насыщенным водным раствором бензойной кислоты и ацетоном. Осадок высушивают в вакууме, растворяют в 95%этиловом спирте, фильтруют через сефадекс. Целевой продукт высушивают, перерастворяют этиловом спирте и втирают в поврежденные участки кожи. При лечении препаратом отсутствуют локальные и системные вторичные реакции.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
А3,SU „„1475476 (д1) 4 А 61 К 35/78
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ (21) 3483799/28-14 (22) 27.08.82 (46) 23.04.89. Бюл. Р 15 (71) Эмпреса Кубана Импортадрра э Зкспортадора де Продуктос Медикос-Медикуба (CU) (72) Карлос Мануель Мийярес Као и Мануель Табоас Гонзалес (CV) (53) 612. 015 (088. 8) (56) Gebhardt D.ОЕ, Beintenia А. Evi
dence for the existance of 2 types
of oL, -lipoprotein in amniotic fluid
from pregnancies older thau 20 Meeks.—
Experientia, 1980, v, 36, N - 6, р. 643-644. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЬФА-ЛИПОПРОТЕИНА ИЗ ПЛАЦЕНТЫ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к биохи1
Изобретение относится к области биохимии, а также к фармакологии и дерматологии и касается способов получения веществ, влияющих на синтез меланинового пигмента кожи,.и используемых для лечения витилиго.
Цель изобретения — повьпцение качества целевого продукта за счет его способности стимулировать синтез мелонинового пигмента кожи, Пример 1. 1 кг долек плаценты замораживают,и выдерживают в течение 7-10 сут, затем измельчают в дисковой мельнице, обрабатывают 95%ным этиловым спиртом при соотношении ткани плаценты и этилового спирта
1:1 (масса/объем), фильтруют через плотную марлю и выдерживают фильтрат мии и позволяет повысить качество целевого продукта. Дольки плаценты замораживают, растирают, обрабатывают этиловым спиртом, затем фильтруют, После выпадения осадка надосадочную жидкость смешивают с насьпценным раствором бензойной кислоты в 95%-ном этиловам спирте. Отделяют осадок фильтрованием и промывают насьпценным водным раствором бензойной кислоты и ацетоном. Осадок высушивают в вакууме, растворяют в 95%-ном этиловом спирте, фильтруют после сефадекс.
Целевой продукт высушивают, перерастворяют в этиловом спирте и втирают в поврежденные участки кожи. При лечении препаратом отсутствуют локальные и системные вторичные реакции.
2 в течение 24 ч при комнатной температуре, при этом выпадает осадок, Пигментационную активность надосадочной жидкости определяют на коже сос- ков морских свинок (активность сохраняется в течение 20-50 сут).
Отбирают 200 мл надосадочной жид-. кости и смешивают с 10 мп нааьпценного раствора бензойной кислоты в 95%ном этиловом спирте, раствор перемешивают в течение 20 мин, осадок отделяют фильтрованием, промывают насыщенным водным раствором бензойной кислоты, . 3 раза ацетоном. Осадок высушивают в вакууме при комнатной температуре, перерастворяют в 95%-ном этиловом спирте, фильтруют через сефадекс-30, используя 5 10 M фосфат-
-(1475476
Формула изобретения
Составитель Э.Цыганов
Техред М.Дидык Корректор М.Пожо
Редактор Е.Папп
Заказ 1916/59 Тираж 644 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
1)3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðoä, ул. Гагарина,101 ный буфер при рН 4,0. Получают 2 бел- . ковые фракции. Альфа-липопротеин, обладающий свойством стимулировать синтез меланинового пигмента кожи, содержится во второй белковой фракции. ,Для практического применения продукт, лиофильно высушивают, перерастворяют в этиловом спирте и втирают в поврежденные участки кожи. Выход целевого, продукта составляет 0,5 г/кг ткани плаценты.
Пример 2. Выделение альфалипопротеина из долек плаценты осуще-. ствляют как описано в примере 1, за исключением того, что осадок промывают ацетоном 10 раз, используют серафекс-100 и 5 ° 10 М фосфатный буфер при рН 8,0. Выход целевого продукта
О, 1 r/êã ткани плаценты.
Клинические испытания препарата проведены на 200 пациентов мужского и женского пола в условиях стационара. У всех пациентов были характерные 25 проявления витилиго и они ранее не лечились по поводу витилиго. При втирании спиртового раствора препарата в депигментированные участки полная репигментация достигнута у 63 пациентов (31,5X), частичная репигментация имела место у 105 пациентов (52,57), у. 5 пациентов (2,5X) эффект отсутствовал и 27 пациентов от лечения отказались (13,5%).
При лечении препаратом отсутство35 вали локальные или системные вторичные реакции. Рецидивов после лечения не было. Проводили биопсию базальной мембраны для доказательства того, что предлагаемый препарат способствует синтезу меланинового пигмента кожи.
Способ получения альфа-.липопроте-. ина из плаценты человека путем эк-стракции из сырья и выделения целевого продукта, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения качества. целевого продукта за счет его способности стимулировать синтез меланинового пигмента кожи, экстракцию проводят, растирая дольки плаценты в присутствии 957.-ного этилового спирта, взятых в соотношении 1:1 (масса/
/объем), затем жидкую часть отделяют фильтрацией через марлю, выдерживают до выпадения осадка, надосадочную жидкость смешивают с насыщенным раствором бензойной кислоты в 95Х-ном этиловом спирте в соотношении 20: 1, отделяют осадок фильтрованием, осадок промывают насыщенным водным раствором бензойной кислоты, 3-10 раз ацетоном, сушат в вакууме при комнатной температуре, перерастворяют в 95Х-ном этиловом спирте и фильтруют через сефадекс-30 или сефадекс-100, используя фосфатный буфер, при .этом получают раствор, содержащий целевой про" дукт альфа-липопротеин с мол.м. 15004000 дальтон.
