Способ определения форидона в плазме крови

 

Изобретение относится к медицине, а именно к способу определения форидона в плазме крови. Целью изобретения является упрощение способа определения форидона в плазме крови для использования в клинических исследованиях. Сущность изобретения состоит в том, что препарат экстрагируют из плазмы крови этилацетатом, выпаривают до сухого остатка, растворяют в диметилсульфоксиде, для повышения чувствительности флюоресцентного анализа переводят форидон в анионную форму добавлением гидроксида калия и определяют интенсивность флюоресценции клиническим флюориметром.

СОЮЗ СООЕТСНИХ

Р СПУЬЛ4Н це аи

571 (51)4 G 01 > 33 52

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ и АВТОРСНОМм сюцВП/ЬСТВу

8. Е8ВЫ ".- I, ПАтЕИТКЗ- „„: . . БЫБ Й! О .:..-.-", rocvA me W но итет

ПО ИЭОВ аТКНИЯМ И ОТКЕЫТИЕЮ

ПРИ ГННТ СССР

1 (21) 4364102/28-14 (22) 18.01.88 (46) 30.07.89. Вюл. У 28 (7!) Рижский медицинский институт

Институт органического синтеза

АН ЛатвССР н Латвийский научно-исследовательский институт кардиологии (72) С.А. Берзиня, А.П. О!токмане, А.К. Деме, Г,Я. Дубур, А.П. Скутелис и Т.Н. Андреева

{53) 612.015 (088.8) / (56) Parinov V.I.,Odinee А.G. Gilev А.Р.

et al.Pharmacokinetics and Metabolism

of Ryodipine in Rats. - Arzneim.

Forsch.t Drug. Res ° 1985, v. 35(l), 1! 5, р.,808-813. t Изобретение относится к способам определения лекарственных средств в биологических жидкостях.

Цель изобретения - упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Иэ локтевой вены берут кровь, получают плазму и помещают:.,! мл плазмы в пробирку со шлифом (контроль). После взятия. контрольного образца крови больному наэначаот

20 мг форидона и через 3 ч берут кровь, получают плазму крови (рН

7,"2-7,6), 1 мл плазмы помещают в пробирку со шлифом (опыт). В обе пробирки добавляют по 6 мл этилацетата, 2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОРИДОНА В

ПЛАЗМЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к способу, определения форидона в плазме крови. Целью изобретения является упрощение спосо» ба определения форидона в плазме крови для использования в клинических исследованиях. Сущность изобретения состоит в том, что препарат экстрагируют иэ плазмы крови этилацетатом, выпаривают до сухого остатка, растворяют в диметилсульфоксиде, для повышения чувствительности флюоресцентного анализа переводят форидон в анионную форму добавлением гидроксида калия .и определяют интенсивность флюоресценции клиническим флюориметром. встряхивают 20 мин и отстаивают .

30 мин. Верхний слой экстракта помещают в колбу и получают сухой остаток путем отгонкн с помощью роторного испарителя. Полученный сухой остаток растворяют в 5 мл диметилсульфоксида, прибавляют 0,05 мл н.раствора гидроксида калия, инкубируют смесь в течение 4-6 мин и определяют интенсивность флюоресценции опытного и контрольного образцов клиническим флюориметром при возбуждения 436 нм и М флюоресценции 510 нм. По разнице интенсивности флюоресценции опытного образца и контроля по калибровочной кривой определяют содержание аниона форидона в 1 мл диметилсульфоксида и пере3 !497 считывают содержание форидона в 1 мл пл аз мы.

Построение калибровочной кривой.

В ряд пробирок к 1 мп плазмы мккрошприцем прибавляют стандартный раствор (А кли Б) форидона в этаноле. так, чтобы 1 мп плазмь! содержал от

20 до 1000 нг форидона, встряхивают и прибавляют по 6 мл этилацетата.

Далее проводят анализ, Интенсивность флюоресценции опыт

° ° ° ° ого образца отн. ед. 26,8, интенсивость флюоресценции контрольного об1 азца 24,8 отн. ед., разница составз яет 2,0 отн.ед.

По калибровочной кривой находят

©колько аниона форидона соответств1; ют 2,0 отн.ед. интенсивности флюо/ ресценции. Получ ают 9, 0 нг аниона форкдона в 1 мп диметилсульфоксида.

Для анализа использовано 5 мп диметипсульфоксида 9,0 5 = 45,0 нг.

Следовательно, 1 мп плазмы крдви содержит 45 нг форидона.

Используемые реактивы: этилацетат, дважды перегнанный при 77 С, диметклсульфоксид, сушенный гидроксидом калия, перегнанный в вакууме, 1 н. раствор гидроксида калия, стандартные растворы форидона в этаноле; раствор А — 0,1 г стандартного образца форидона в .100 мл этанола (в мерной колбе), раствор содержит

1000 мкг форидона в 1 мп; раствор Б— в 5 мп раствора А в 100 мл мерной колбе и этанол до метки; раствор содержит 50 мкг форидона в 1 мп,, Пример 1; Больной >, 58 лет, Диагноз: гипертоническая болезнь, 1„I, артериальный кардеосклероз. Прй йоступлении в больницу жалобы на головокружение, артериальное давление (АД) 165/105 MM рт.ст., частота сердечных сокращений (ЧСС) 71.

По предлагаемой методике больному брали кровь до приема препарата (контроль) и через 3 ч после однора— зового приема 20 мг форидока (опытный образец). Получили плазму крови, рН плазмы крови 7,2. мл контрольНой и опытной плазмы экстрагировали с 6 мл этилацета".а, получили сухой остаток, котогый растворили в 5 мл диметилсульфоксида, прибавилк 0,05 мл

1 н.раствора гидроксида калия, инку3 бировали раствор 5 мин и определили интенсивность Алюоресценпии опытного и контрольного образцов при

571 возбуждения 436 нм к /! флюоресценции

510 нм. По разнице интенсивности фпюоресценцик, используя калибровочную кривую, определилк, что 1 мп плазмы крови больного содержит 92,9Ф

+3,4 нг форидона. Несмотря на то, !

0 !

49

55 что концентрация форидона в крови больного была достаточной для получения гкпотензивного эффекта, эффект отсутствовал, а именно, артериальное давление через 3 ч оставалось

165/105 мм рт.ст., частота сердечных сокращений 78. Следовательно, дальнейшее увеличение дозы форидона нецелесообразно и при проведении терапии рекомендовано форидон заменить другим препаратом, Больному назначена терапия праэозином, который оказал положительный гкпотейзивный эффект, Пример 2. Больная С., 43 лет. о

Жалобы на давление в висках, усталость. Артериальное давление повышено с 1979 года. Последние 3-4 года

АД было повышено до 240/150 мм рт.ст.

Диагноз: артериальная гипертензия.

Сопутствующие заболевания — бронхиальная астма, легочно-сердечная недостаточность I энфизема легких.

АД при поступлении 200/120 мм рт. ст.

ЧСС 80 раз в минуту.

По методике изобретения больной бралк кровь до приема препарата (контроль) и через 3 ч после одноразового приема 20 мг форидона (опытный образец). Получили плазму крови, рН плазмы крови 7,6. 1 мл контрольной и опытной плазмы экстрагировали с 6 мп этилацетата, получилк сухой остаток, который растворили в 5 мп диметилсульфоксида, прибавили 0,05 мт

1 н.раствора гидроксида калия, инкубировали раствор 5 мин и определили интенсивность фпюоресценцки опытного и контрольного образцов при r1 возбуждения 436 нм к 3 флюоресценцик

510 нм, По разнице интенсивности флюоресценции, используя калибровочную кривую, определили, что 1 мл плазмы крови больной содержит 22,5+

13,3 нг форидона.

После приема 20 нг форидона через 3 ч, т.е. в пик максимального гипотензквного действия АД снизилось с !80/!20 íà 163/100 мм рт.ст. Однако гипотензивный эАфект не достиг желаемого уровня к концентрация Аоркдона (22,5 нг) в крови была ниже оптимальной (40 нгlмл концентрации).

Составитель А.В. Скурат

Техред Л.Олийнык

Редактор t1 . Пч олинс к ая

Корректор С. 111екмар

Заказ 4439/47

Тираж 789

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат."Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

5 1497

С целью увеличения эффекта больной в дальнейшем назначили увеличения дозы форидона по 20 нг 4 раза в день, т.е. 80 мг в сутки. После такого увеличения дозы через 8 дней терапии исходное Ajl до приема препарата было 160/105, через 3 ч после приема 20 мг форидона 150/100 мм рт.ст.

Побочные реакции не отмечались. 0

В дальнейшем рекомендовано применение форидона по 20 мг 4 раза в день амбулаторно.

По предлаrаемой методике было обследовано 49 больных артериаль- 15 .Г ной гипертензией. При обычной дозировке 10 или 20 мг форидона у 60,7Х больных через 2-4 ч после приема препарата был получен нормальный гипотензивный эффект,. который коррели- 20 ровал с концентрацией форидона (4090 нг/мл) в плазме крови.

У 30,3Е больных при этой дозе форидона гипотензивный эффект был незначителен или отсутствовал. Опреде- 25 ление форидона в плазме крови показало, что у 8,ir. больных через 3 ч после приема препарата концентрация форидона была недостаточна (ниже

40 нг/мл ). Это явилoñü причиной от- 30 сутствия желаемого терапевтического эффекта. Дозу препарата, следователь571 6 но, надо было увеличить до до r ния оптимальной концентрации { 4090 нг/мл) форидона в плазме крови.

У остальных 22,57. больных с недостаточно выраженным гипотензивным эффектом концентрация форидона в крови была достаточной для получения терапевтического эффекта, им было нецелесообразно далее увеличивать дозу форидона. Для получения терапевтического эффекта необходимо было заменить препарат °

Формул а изобретения

Способ определения форидона в плазме крови путем экстракции, выпаривания и анализа сухого остатка в опытном и контрольном образцах, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, экстракцию проводят этилацетатом при pF. 7,2?,6, сухой остаток растворяют в диметилсульфоксиде, добавляют к раствору

1 н.раствор гидроксида калия при соотношении диметилсульфоксид — гидроксид калия 100 : 1, инкубируют смесь в течение 4-6 мин и определяют разницу интенсивности флюоресценции опытного и контрольного образцов при длине волны возбуждения 436 нм и длине волны флюоресценции 510 нм.