Способ диагностики активного течения хронического гломерулонефрита
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики активного течения хронического гломерулонефрита. Цель изобретения - повышение точности способа. Из крови больных выделяют лимфоциты с помощью градиента плотности фикол-верографина, инкубируют их в присутствии Т-активина. Через 3 и 6 ч инкубации определяют количество ауто-розеткообразующих клеток (незрелая популяция Т-лимфоцитов) и при увеличении прироста этих клеток свыше 3,5% диагностируют активное течение хронического гломерулонефрита. В сравнении с прототипом предлагаемый способ обеспечивает повышение точности в 1,4 раза.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСИИХ
РЕСГ1УБЛИН ш 1 С 01 N 33/58 Щ963М6
ПАТЕЯТИ- ТЫЫМЧЕСНАЯ
Ь;;ЬЛИО i EHA
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
f (21) 4115364/28-14 (22) 24. 06.86, (46) 15. 1.1.89, бюл. М 42, (71) Институт кли ни чес кой иммунологии СО АМН СССР (72) В.И. Некипелова, Е.P. Черных, Н.Л. Тов и Г.З. Шубинский (53) 615.375(088.8) (56) Мухин H.A. Гареева И.E Êóòûрина И.M., Николаев: A.IO. В кн. Клиническая нефрология. М.: Медицина, 1983, с. 137-184 ° (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОГО
ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФ"
РИТА (57) Изобретение относится к медици-.
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики активного течения хронического гломерулонефрита (ХГН).
Способ осуществляют следующим образом.
Из крови больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) выделяют MOHG нуклеары (ИК) центрифугированием гепаринизированной венозной крови (5 мл, содержащей 500 ЕД гепарина) в градиенте плотности фиколл-верографина (3 мл, плотность 1,077) при
800g. Выделенные МК в концентрации
5 1О кл/мл инкубируют в пробирках в среде 199, дополненной 10 эмбриональной телячьей сыворотки и антибиотиками (100 ЕД пенициллина и
„„SU„„1522105 д1
2 не, а именно к иммунологии, и может быть использовано дпя диагностики активного течения хронического гломерулонефрита . Цель изобретения - повышение точности способа . Из крови больных выделяют лимфоциты с помощью градиента плотности фикол-верографина, инкубируют их в присутствии Т-активина. Через 3 и 6 ч инкубации определяют количество ауто-розеткообразующих клеток (незрелая популяция Т- лимфоцитов) и при увеличении прироста этих клеток, свыше 3,53 диагностируют активное течение хронического гломерулонефрита. В сравнении с прототипом предлагаемый способ обеспечивает повышение точности в 1,4 раза.
100 мкг стрептомицина в 1 мл культуральной взвеси) в присутствии Т-активина (1 ЕД/мл) в течение 6 ч при
37 С. 1 ° 10 клеток инкубируют а 1 мп культуральной смеси в 1 пробирке.
Через 3 и б ч культивирования определяют количество ауто"РОК .и по при" росту их содержания от 3 до 6 часов судят о количественном содержании пре-Т-клеток.
Тест ауторозеткообразоваHHR проводят следующим образом.
0,05 мл лимфоцитов (5 .l0 /мл) смешивают с равным объемом эмбриональной телячьей сыворотки, инкубируют смесь при 4 С в течение 30 мин и затем добавляют 0,05 мл 1Ф-ой взвеси троекратно отмытых аутологичных эритро цитов. Далее клеточную взвесь центри1522105 фугируат 5 мин при 200g и инкуб((ру!(>т B Te((eH(4e ь(очи пр 1 4 0 пос пе чеГÎ прОи 3 вОдят подсчет процентного содержания ауто-РО1(, ЕСли прирост аута-РО!(в и((тервале от 3- до
6 ч составляет не менее чем 3,5б, диB i ности р уют а кти в((ую «фа Bv XI Н >
П (и м е р 1. Больной В., 42 лет (I1cT0pия болезни А1675), поступил 10 в не(()ропОГичес I 85 г." При i поступх!енин жалоб не Г(редъявлял* Из анамнеза выясненО> То в се>(тябре i ч8"! i „при Г(пп(((>илакти" lec ком . Осмотре случайно выя влено Г(О I вь!шение артериального давления до 190/1(00 мм рт,ст.> в связи с чем был направлен на обследование. При объек" ти вном иссх!вдова ни и OTI4B(4алас ь уме ренная урохроматизацил кожных покро- 20 .. BOB увеличение сердца вххе(10 HB 2см ! Ла врал не;.! Левой сре (1!.(е(<1>ючи>(!40(1 л(!Пи(!.., о стороны других органов, патология не отмечено, При проведеi. ., нии Bнализа крови регистрировалась умеренная I!le!4((JIB эритроциты 3 8» 10 /л> I eh(oãëoáèн 128 г/JI> лейкоцить! 6,8 !0 /л> 003 - 27. мм/ч. Ио-! чевсяна крови 16,6 миоль/л, с-реактив-. ;(ый белок- О, сиаловые кислоты 170 ед,".О фибри ноге -i 550 0 мг/л, холестерин 5,6 ммоль/л> хв пспротеиды 6500 мГ/л, белок крови 68,8 /л, в белковь>х Йрс! к((и ля» ал ь буми ны >04 > Гл обули ны с (" .>«. > > <(.- - О/ > в - "., 5:, ) - 1 7«, > „ нммуноглобух((1(ны: .т - 8>5 мг/мл, д " 2,0 мг/мп, !1 - 1>5 мг/мл, ((реатинин (<рови О. 6 I (((Ох! ь/fi > клубочкОвая фил ь * траци i 12 мп/и! и,, реабсорбция 95>4."!,, Отме (алась умере((нап зритроци.гурия - 10 до 18>5 1О- /мп„ суточная протеинурия «qo 1,8 г. При исследовании поче((е(ого биоптата . > cTBIIOBJIeII AHBA ноз хрони-" ческого мезангиопролифератив,(ого гломерулоиефрита с выраженным тубуло- 4> интерстициальным «омпонентом. По клинико х1г3боратодны(1 данным впечатления GO а Кти БИОСТ И ПРО ЦЕССа НЕ С !Ятадь(ас! лось> на фазе выраженной почечной недостато>л ности Опредех!ялис ь лищь «vBe >:0 личения СОЭ и повышение уровня фибриногена, в то время как мочевой синдром был умеренным,. отсутствовала диспротеинемия, и кроме того, артериальная гипертензия субъективно не ощу55 щались, Проведенное иммунологическое исследование по предложенному спосовыя вих!О прирос T B > To Р01(3 6
6,5ж, в связи с чем было начато лечение хлорбутином 12,5 мг/сут:(:.!> р днизолоном 20 мг/сут> гепарином 20000 ЕД/сут, курантилом 400 мг/сут. На фоне да(!Ной терапии отмечалась выраженная положительная динамика всех показателей, к декабрю 1Ч85 г. суточная протеинурия снизилась до 0,2 г, уровень мочевинь! до 8,6 ммоль/и> креат !нина l 76 мл/мин, канальцевая реаб(-.орбция до 97,Я. Артериальное давление без ГИПОТЕНЗИВНЫХ ПрЕПс(раТОВ СтабИЛ((ЗИ ро(залась на уровне 120/70 мм рт,ст., 00Э нормализовалась. В дальнейшем на фоне поддерживающей терапии акгивность нефритического процесса отсутС ВОВС(ла > Таким образоч. данные обследования пс предложенному способу позволи" ЛИ УСТс>НОВИТ Ь а К I К ВНОСТ Ь ЗаООЛЕВа НИЯ, НЕСМОТРЯ На ТО > Ч O CO BO I Пример 2. Больная Э,, 26 лет (история болезни А ) 56 I), поступила в не((рроло! и лесное отделение 29/ХХ 85 г, При поступления жалоб не ii ieäúÿBJI>IJià. Больна с (".е!.е-85 г., когда на (Ьоне Остpoi о респяраторнОГО BdбОлевания появи JI cь HB (<роГch ат pNJI > отеки на лице, голенях„повьещение артериального давх(ения до 160/100 I,h! рт,сГ, 8 ОкГябре 1985 г, обспедовалась в нефрологическсм отделении ИЗВЕСТНЫМ СПОСОООМ,ПPOTO I И ПО(4) > УС тановх ен диагноз." ХГН„латентная фор = ма > >мезвнГиопрох(и(реративный Bepиdнт активная фаза. При Объективном исследовании патологических изменений не Отмече((0»,цсэнные лабора ОрнОГO иссле дования: а Общем анализе крози эрит-, роцитов - 4,0 10 "/л,гемоглобин125 г/л, лейкоциты 6,3 10"/л, СОЭ20 мм/и, фибриноген 3100 мг/л, С-реактивкь>Й белок - 0, серомукоид 0,16, мочевина крови 4,65 ммоль/л, сиаловые кислоты .190 ед, бех>ок крови 80,4 г/л, бел.<овые фракции: альбуМи НЫ 5<> о > ГХ!О >ух! 1 нь(: с>, — 5«> > О > О "э > в - 133> у- 183 иммуноглобулины: И - 1,8 мг/мл, 1 — 10,0 мг/мл> А9 и! /мл. В,o«BBOH осадке по про бе Нечипоренко: лейкоцить! 4,25 10/мл, эритроциты 23>0 10 /I4JI суточная про1522105 Формула изобретения Составитель В. Литовченко Техред Л.Олийнык Корректор А ОбРУчаР Редактоо Н. Горват Заказ 6953/41, Тираж 789 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при .ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб, д ° 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент"„ г.Ужгород, ул.Гагаринай, 101 теинурия 0,4 г. Функциональная способность почек сохранена. Результаты иммунологического обследования; прироста ауто-POK от 3 до б ч не выяв5 лено. Однако наличие острого нефритического синдрома в августе t985 г,, сохраняющееся увеличение СОЭ, послужили основанием для начала лечения хлорбутином 10 мг/сут, метипредом . 10 16 мг/сут, гепарином 20000 ЕД/сут,, курантилом 400 мг/сут. На фоне данного лечения, продолжавшегося в течение одного месяца, отмечалось усиление эритроцитурии, появилась уратурия. 15 Лечение было отменено, после чего зритроцитурия вернулась к исходному уровню и больная была выписана в относительно удовлетворительном состоя" нии. При контрольном осмотре через один меся ц жалоб не предт я вляла, анализах крови и мочи патологических изменений не отмечено, функциональная способность почек и артериальное давление оставались нормальными. У боль- 25 ной была неактивная Фаза заболевания, Определение гре-Т-клеток по при" ,росту ауто-РОК 3-6 i обусловлено особенностями с руктуры циркулируницего пула лимфоцитсвпри ХГН, в частности, щ отсутствием среди ИК субпопуля ции преауто-РОК и высоким содержа нием самих ауто-РОК. Поскольку исходное количест B0 ауто-РОК превышает их содержание как в 3-часовых так и в 6-часовых культу35 рах, то определить количество пре-Т" клеток удается только по приросту ауто-POK от 3 до 6 ч. Прирост аутоРОК в данном случае обусловлен дифференцировкой лишенных E-Рецепторов предшест ве нни ко в Т- клеток в а ут оÐOK. У больных с активным течением ХГН содержание пре-Т-клеток превышает количество незрелых предшественников в группе больных с неактивным ХГН(Р< <0,01 и критерий Вилкинсона - Ианна" Уитни) . Точ наст ь предла га емог о с пос оба приближается к 1004. Способ-прототип обеспечивает точность не более 70Ф. Таким образом, с помощью предлагаемо= го способа точность определения Фаз активности процесса увеличивается в 1,4 раза. Способ диагностики активного тече-" ния хронического гломерулонефрита путем исследования крови, о т л и ч аю щ и Й с я тем, что, с целью повышения точности способа, из исследуемой крови выделяют лимфоциты„ инкубируют их в течение 3 и 6 ч в присутст вии Т-а ктиви на, далее определяют количество незрелых Т"лимфоцитов и при их приросте свыше 3,53 к б ч диагностируют активное течение хронического гломерулонефрита.
