Штамм гриба тriсноdеrма viride - продуцент внеклеточной целлюлазы и ксиланазы

 

Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения целлюлолитических ферментов на основе культуры гриба JRICHODERMA VIRIDE. Целью изобретения является создание штамма гриба JR. VIRIDE 44-11-62/3, на основе которого могут быть получены препараты целлюлозы разной степени очистки, сохраняющих продуктивность штамма. В результате мутагенной обработки исходного штамма и последующей селекции выделен штамм JR. VIRIDE 44-11-62/3, обладающий искомыми свойствами.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) ()1) А1

СЮ4 С 12 N 9/42

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4405929/30-13 (22) 05.03.88 (46) 30.11.89. Бюл. У 44 (71) Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт и Московский технологический институт пищевой промышленности (72) Н.А.Острикова, С.А.Коновалов, M.M.Ïåðåâåäåíöåâà, Н.M.Павлова, Ю.А.Белогорцев, К.A.Калунянц, М.В.Гернет, Л.П.Замотайлова и Ф.Н.Чегодаев (53) 577.15 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 1090713, кл. С 12 N 9/42, 1982.

Авторское свидетельство СССР

У 1073282, кл. С 12 N 9/42, 1982.

Авторское свидетельство СССР

Ф 745933, кл. С 12 N 15/00, 1980.

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и касается нового штамма — продуцента внеклеточных целлюлаз, которые используются при силосовании грубых кормов, в производстве спирта, а также для получения сахаристых растворов из отходов пищевой и деревообрабатывающей промышленности., Цель изобретения — получение нового штамма — продуцента внеклеточной целлюлазы и ксиланаэы, обладающего более высокой активностью.

Штамм был получен путем селекции исходного штамма Trichoderma viride 44.

2 (54) ШТАММ ГРИБА TRICHODERMA VIRIDE

BK1IM F-374 — ПРОДУЦЕНТ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ

ЦЕЛЛЮЛОЗЫ И КСИЛАНАЗЫ (57) Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения целлюлолитических ферментов на основе культуры гриба Trichoderma vi-.

ride ° Целью изобретения является создание штамма гриба Tr. viride 44-1162/3, на основе которого могут быть получены препараты целлюлозы разной степени очистки, сохраняющих продуктивность штамма. В результате мутагенной обработки исходного штамма и последующей селекции выделен штамм

Tr. viride 44-11-62/3, обладающий ис- а комыми свойствами.

Штамм Tr. viride — 44-11-62/3 депоннрован в Центральном музее промышленных микроорганизмов института

"ВНИИгенетика" под номером ВКПИ -374 и от известных продуцентов отличается не только более высокой продуктивностью внеклеточной целлюлазы, но и высокой продуктивностью сопутст вующего фермента — ксиланазы, способствующего более глубокому расщеплению растительных остатков до легко усвояемых веществ.

Штамм Tr. viride 44-11-62/3 — продуцент целлюлолитических ферментов культивируется в глубинных условиях на жидкой питательной среде.

1525208

Активность целлюлаэы характеризуют по гидролизу фильтровальной бумаги с определением образующихся сахаров по методу Шомодьи-Нельсона.

Активность ксиланаэы характеризуют по гидролизу ксилана с последующим определением сахаров по методу Шомодьи.-Нельсона.

Культуральные признаки.

На сусло-агаре на 5-е сутки росо та при 30 С диаметр колоний 5,05,5 см колонии слегка приподнятые, мицелий пушистый, край волнистый, колонии покрыты сплошь спорами лимонно-желтого цвета, за исключением тонкого (1-2 мм) края. В среду выделя— ется желтый пигмент.

На картофельно-декстроэном агаре на 5-е сутки роста диаметр 6,0—

6,5 см, колонии концентрические, приподнятые, край ровный, белый, размер

0,8 см. Среда не пигментирована.

На среде Чапека-Докса с сахарозой на 5-е сутки диаметр колоний 34 см, колонии плоские, мицелий тонкий, колонии желтые, в центре колоний в среде желтый пигмент.

На среде Росдлен-Тома колонии концентрические, выпуклые, центр не приподнят, край волнистый, споры по всей колонии, кроме тонкого края. Среда пигментирована.

На среде с микроцеллюпозой колонии диаметром 5,0 см. Концентрические, плоские, центр слегка приподнят, мицелий тонкий стелющийся, белый. В среде желтый пигмент.

На среде с лактоэой колонии диаметром 5,0 см, плоские, мицелий белый, споры редкие, в центре желтого цвета, среда пигментирована.

На среде Гетчинсона на поверхности жидкой среды светлый мииелий, бумага и среда окрашены в желтый цвет.

Морфологические признаки.

Конидиеносцы слабо дифференцированы, иногда разветвлены.

Конидии овальные, желтого цвета, размер (2,5-2,8) †(3,9-4,2) мкм.

Физиолого-биохимические призкаки.

Усваивает рамнозу, маннит, ксилозу, целлобиоэу, арабинозу, лактоэу, 5

50 галактоэу, глицерин, крахмал, фруктозу, мальтоэу, сахарозу.

Желатину разжижает, молоко не коагулирует. Использует аминную, нитратную и белковую формы азота. Гидролиэует клетчатку до олигосахаров и глюкозы

Штамм интенсивно продуцирует целлюло- и ксиланолитические ферменты на питательных средах, содержащих производные целлюлозы или растительные остатки.

Изобретение поясняется примерами.

Пример 1. Штамм Tr. viride выращивают в пробирках на скошенном сусло-агаре в течение 7 сут при о

30 С и 7 сут при комнатной температуре. Полученным споровым материалом инокулируют 50 мл питательной среды состава,Х: жом свекловичный-3, О, НаЬОз О 4; КНаРО4 О, 2, (NH„) 804О, 4; Hg SO - О, 03, солодовые ростки е

1, 43; картофельная барда 5, вода — ос-, . тальное. рН вЂ” 5,5 до стерилизации. Культивирование микроорганизмов проводят в течение 168 ч в конических колбах емкостью 750 мл на круговой качалке

180 об/мин. Активность целлюлозы

24 ед/мл культуральной жидкости,ксиланазы — 21 ед/мил.

Пример 2. Культивирование гриба Т. viride 44-11-62/3 осуществляют на питательной среде того же состава, что и в примере 1, в ферментере емкостью 10 л с коэффициентом заполнения 0,6, при аэрации 1 л кислорода на 1 л питательной среды, при начальном рН 5,5 в течение 144 ч.

Активность целлюлазы 35 ед/мл, ксиланаэы — 40 ед/мл.

В таблице приведена сравнительная характеристика биосинтетической способности предлагаемого штамма

Т.viride 44-11-62/3 и известного °

Штамм Т. viride 44-11-62/3 обладает большей продуктивностью и его использование может интенсифицировать процесс получения внеклеточной целлюлазы и ксиланазы.

Формула изобретения

Штамм гриба Trichoderma viride

ВКПМ F-374 — продуцент целлюлазы и ксиланазы.

1525208

Штамм целлюлаза ксиланаза

Составитель И.Привалова

Редактор Л.Веселовская Техред М.Ходанич Корректор Л.Бескид

Заказ 7188/20 Тираж 501 Подписное

BHHHIIH Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óêãoðîä, ул. Гагарина, 101

Т. viride

44-11-62/3

Т.viride 44

Ферментативная активность, мг глюкозы на

1 мл культуральной жидкости