Штамм гриба aspergillus fuмigатus-продуцент целлюлазы

 

Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в процессах переработки целлкшазосодержащих материалов для получения глюкозы и микробного белка. Цель изобретения - выявление быстрорастущего штамма, обладающего более высокой активностью целлкхпазы и значительным уровнем целлобиазЫо Активностьштамма A.fumigatus на среде с опилками составляет 2,5 ед/мл целлюлазы по отношению к фильтровальнойбумаге, что равно 5,3 ед/мл по хлопковому волокну (С,), и 0,725 ед/мп целлобиазы против 5,0 ед/мл (С,) и 0,7 ед/мл у A.terrcus АТ-490. Активность достигается на сутки культивирования раньше. SS (Л

ССНОЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (51) у С 12 N 9/42, 1/14

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4094809/31-13 (22) 1 7. 07. 86 (46) 30,. 11.88. Бюл, ga 44 (71) Казанский государственный университет .им.В.И.Ульянова-Ленина (72) О.Н.Ильинская, Н.Г.Захарова, Ф.К.Алимова, P.À.Ñàéìàíîâà и И.Б.Лещинская (53) 577. 15 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 994555, кл. С 12 N 9/42, 1984.

Авторское свидетельство СССР

В 1252336, кл. С 12 N 9/42, 1984.

SU» 1440920 А1 (54) ШТАММ ГРИБА ASPERGILLUS ГПМХ-

GATUS — ПРО/(УЦЕНТ ЦЕЛЛНЦ1АЗЫ (57) Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в процессах переработки целлюлазосодержащих материалов для получения глюкозы и микробного белка. Цель изобретения — выявление быстрорастущего штамма, обладающего более высокой активностью целлюлазы и значительным уровнем целлобиазы. Актив-. ность:штамма А.fumigatus на .среде с опилками составляет 2,5 ед/мл целлюлазы по отношению к фильтровальной бумаге, что равно 5,3 ед/мл по хлопковому волокну (С,), и 0,725 ед/мл целлобиазы против 5,0 ед/мл (С,) и

0,7 ед/мл у А.terrcus AT-490. Активность достигается на сутки культивирования раньше.

1440920

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а-именно к производству ферментативных препаратов — целлюлаз - с помощью высокоактивных штаммов микроорганизмов.

Целлюлазы находят широкое применение в процессах переработки целлюлазосодержащих отходов с целью получения глюкозы и микробного белка, созда- ip ния легкоусвояемых кормов, расщепления целлюлозного компонента клеточных стенок для увеличения выходов соков и лекарственных веществ при их экстракции, осахаривания целлю- 15 лозы в ряде других отраслей народного .хозяйства.

Цель изобретения — выявление быс- трорастущего штамма, обладающего более высокой активностью целлюлазы и 2р значительным уровнем целлобиазы.

Отбор микромицетов но признаку продукции секретируемой целлюлазы

J в процессе широкого скрининга. целлклоэоразрушающих микроорганизмов 25 ряда образцов почв позволил выделить наиболее активный штамм Aspergillus fumigatus BKIIM F-316 (К 84).

Штамм обладает следующими культурально-морфологическими признака- 3р ми. Колонии на сусло-агаре до 1 см в диаметре появляются уже на 2-е сут

0 роста при 28 С. Сначала поверхность их чисто белого цвета, с началом спороношения голубовато-серо-зеленая, обратная сторона светло-оливковая.

На 6-й день диаметр колонии достигает 3 см, окраска темнеет до зеленовато-черной. Запах отсутствует.

Конидиальные головки крупные колон- gp чато-компактные 120-200 мкм на 50100 мкм. Конидиеносцы гладкие толщиной 6-9 мкм с шаровидным вздутием на конце размером 18-25 мкм. Стеригмы одноярусные, конидии в массе темно-зеленые круглые 3-3,5 мкм в диаметре. Афлатоксины (коевую кислоту) на.диагностической среде для токсинообразующих грибов не выделяет.

Колонии на arape Чапека несколько

ЭУ меньших размеров, конидиальные головки не превышают 180 мк в длину.

Колонии на агаризованной среде

Сабуро для дрожжей и грибов до 4 см в диаметре широко растущие баркатистые, затем типично хлопьевицные темно-зеленые до черно-зеленых. Конндиальные головки 300 мкм на 50 мкм плотно прижатые компактные в виде колонки. Конидиеносцы размером 200300 мкм на 5-8 мкм с шаровидным вэдутием 20-30 мкм в диаметре. Конидии до 3,5 мкм в диаметре шаровидные.

Физиолого-биохимические признаки.

Штамм гетеротроф, сапрофит, аэраб.

Оптимальный рН слабокислый 5-6. Однако заметный рост наблюдается в широком диапазоне рН от 3,8 до 7,6.

Оптимальная температура выращивания о

28 С, при крайних значениях от 10 а до 45 С рост очень слабьл, колонии точечные. Штамм не патогенен, не вые зывает микотоксикозов человека и

ы вотных, что подтверждено результатами опытов с мышами и отсутствием выделения токсинов на диагностической среде Харченко.

Определение видовой принадлежности штамма проведено по Пидопличко. Общую целлюполитическую активность по отношению к фильтровальной бумаге определяли стандартными методами с последующим измерением редуцирующих сахаров по Сомоджи-Нельсону, целлобиазную активность — по расщеплению паранитрофенил- p -D-гликозида. . Применение нового быстрорастущего штамма А.fumigatus- К-84 позволяет добиться высокого уровня целлюлолитической активности в культуральной жидкости при относительно коротком времени культивирования на различных средах для производства целлюлаз.

Пример 1. Штамм А.fumigatusК-84 выращивают на среде, содержащей, мас.l: свекловичный жом 4,0, солодовые ростки 1,4, зернокартофельная барда 5 0 аммоний серно-кислый 0,6, калий фосфорно-кислый однозамещенный 0,2, магний сернокислый 0,06; нитроцеллюлоэа (содержание азота

13,56%) 0,5. Исходный рН среды 6,0.

Инокулятом служит трехсуточная культура, выращенная на жидком сусле, внесенная в среду из расчета 2Х на

250 мл среды в конической колбе объемом 2 л. На 4-е сут роста при 28 С и при принудительной аэрации прокачиванием 120-150 об/мин общая активность целлюлазы достигает 2,6 мг глюкозы/мл.ч, активность Р -глюкозидазы 0,329 мкмоль/мл.мин.

Пример 2. Культивирование штамма А,.fumigatus- К-84 ведут на

Ф о р м у л а и з о б р е-т е н и я

Составитель И.Привалова

Техред А.Кравчук Корректор Н.Король

Редактор М.Недолуженко

Заказ 6143/29

Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

14 среде, описанной в примере 1, в лабораторном ферментере емкостью. 10 л при. барботировании атмосферным воздухом. Инокулят добавляют в количестве 5Х от объема среды. Максимальные значения ферментативных активностей, указанных в примере 1, достигаются на 3-и сут культивирования.

Пример 3. Культивирование штамма А.Кишаgatus-К-84 ведут на среде следующего состава, мас.Е: свекловичный жом 4,0, кукурузный экстракт 0,01, пептон 0,05, аммоний серно-кислый 0,50, калий фосфорно-кислый однозамещенный 0,2, магний серно-кислый 0,06, нитроцеллюлоза (содержание азота 13,56Х) 0,5.

Исходный рН среды 6,0, Инокулят выращивают на глюкозо-пептонной среде, г/л: глюкоза 5, пептон 5, хло-. ристый натрий 3, вода водопроводная в течение 3 сут и вносят в среду в количестве 5/ на 250 мл среды в конической колбе емкостью 2 л. Культивирование проводят при 28 С на качалке 120-150 об/мин в течение 4 сут

Общая активность целлюпазы составляет величину 4,4 мг/мл.ч, глюкозидазы 0,823 мкмоль/мл.мин.

Пример 4. Культивирование штамма А.fumigatus — К-84 проводят, .как в примере 3 но в лабораторном ферментере емкостью 10 л. На 3-и сут роста достигались величины актчвностей, указанные в примере 3.

Пример 5. Культивируют штамм на среде, содержащей, г/л: опилки

2,0, нитрат натрия 2,5, хлорид кальция 0,3, сульфат магния 0,3, дрожжевой экстракт 0,5, в условиях, описанных в примере 1. Величина актив40920 ности по отношению к фильтровальной бумаге на 3-и сут культивирования составляла 1,7 мг гл./мп.ч ° P -глюKo3HpaBbf О, 130 мкмоль/MJI мин.

Культивирование на среде, указанной в примере 1, дает в это время величину активности к фильтру 2,4 мг глюкозы/мл.ч,, -глюкозидазы

1р 0,290 мкмоль/мл.мин, а на среде, описанной в примере 3-4,0 мг глюкозы/мп.ч и 0,725 мкмоль/г<л.мин.

Пример 6. Активность штамма

А.fumigatus — К-84 на среде с опил-!

5 ками, как описано в примере 5, на

4-е сут культивирования составляет

2,4 ед/мп-целлюлазы по отношению к фильтровальной бумаге, что равно

5,3 ед/мл по хлопковому волокну (С< )

2р и 0,725 ед/мл целлобиаза против

5,0 ед/мп.(С,) и 0,7 ед/мл (целлобиаза) у А.terreus AT-490, однако такая активность достигается у А.

fumiganus К-84 на 1 сут культиви25 рования меньше, чем у А.terreus

AT-490.

Штамм А.fumiganus — К-84 в качестве продуцента целлюлаз (P -глюкозидазы) может быть эффективно исЗр пользован в.производстве препаративных форм целлюпалитических ферментов без изменения существующих технологических схем. Применение нового штамма позволяет повысить

35 целлюлазную и - глюкозидазную активность IIQ сравнению с известными штаммами.

4р

Штамм гриба Aspergillus fumigatus ВКПМ F-316 — продуцент целлюлазы.