Способ определения аллергических реакций на лекарственный препарат

 

Изобретение относится к медицине и может быть применено для диагностики побочных иммунологических и неиммунологических реакций на нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики. Цель изобретения - повышение точности определения аллергических реакций на нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики за счет дифференциального определения атонических и псевдоаллергических реакций. Цель достигается тем, что у больных в плазме, обогащенной тромбоцитами, определяют содержание цАМФ без действия индуктора агрегации, через 60 - 80 с после воздействия АДФ и через 60 - 80 с после воздействия АДФ на предварительно инкубированную в течение 15 - 20 мин плазму, обогащенную тромбоцитами, с отдельными нестероидными противовоспалительными препаратами или ненаркотическими аналгетиками, и при уменьшении содержания цАМФ более чем на 10% после действия индуктора на преинкубированную с препаратами плазму, богатую тромбоцитами по сравнению с контрольным образцом, диагностируют IGE- зависимые реакции на нестероидные противовоспалительные препараты (НСПП), а при увеличении содержания цАМФ более чем на 10% в плазме, богатой тромбоцитами, в образцах без инкубации с НСПП и инкубированных с НСПП диагностируют псевдоаллергические реакции.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (11) (50 4 G 01 N 33 53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMV СВИД=ТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯИ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4182651 /28-14 (22) 16.01.87 (46) 07. 12. 89. Бюл. Р 45 (71) Саратовский государственный ме— дицинский институт и 2-й Московский государственный медицинский институт им. Н.И.Пирогова (72) А.Г.Чучалин и Н.Г.Астафьева (53) 615,375 (088 .8) (56) Кьелман M. ИГЕ при клинической аллергии. Аллерготест-80: Семинар

ГКНТ СССР и фирмы "Фармация". — Тбилиси, 1980. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛПЕРГИЧЕСКИХ

РЕАКЦИЙ НА ЛЕКАРСТВЕННЬ!Й ПРЕПАРАТ (57) Изобретение относится к медицине и может быть применено для диагностики побочных иммунологических и неиммунологических реакций на нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики.

Цель изобретения — повышение точности определения аллергических реакций на нестероидные противовоспалитель— ные препараты и ненаркотические аналИзобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики атопических и псевдоаллергических реакций на нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики (в дальнейшем НСПП).

Целью изобретения является повышение точности определения аллерги2 гетики за счет дифференциального определения атонических и псевдоаллергических реакций, Цель достигается тем, что у больных в плазме, обогащенной тромбоцитами, определяют содержание ЦАМФ без действия индуктора агрегации, через 60-80 с после воздействия АДФ и через 60-80 с после воздействия АДФ на предварительно инкубированную в течение 15-20 мин плазму, обогащенную тромбоцитами, с отдельными нестероидными противовоспалительными препаратами ипи ненаркотическими аналгетиками, и при уменьшении содержания ЦАМФ более чем на

107. после действия индуктора на преинкубированную с препаратами плазму, богатую тромбоцитами по cpaBHeHNO c контрольным образцом, диагностируют

IgE-зависимые реакции на нестероидные противовоспалительные препараты (!!С!!П), а при увеличении содержания

ЦАМФ более чем на 10% в плазме, богатой тромбоцитами, в образцах без инкубации с НСПП и инкубированных с !!СПП диагностируют псевдоаллергичес- кие реакции. ческих реакций на нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики за счет дифференциального определения атопических и псевдоаллергических реакций.

Цель достигается тем, что у больных в богатой тромбоцитами плазме определяют содержание циклического аденозинмонофосфата (ЦАМФ) до и после действия индуктора агрегации (АДФ), 1527588 при этом одну порцию плазмы инкубируют с физиологическим раствором (контI рольный образец), а другие порции с равным количеством исследуемых ле5 карственных препаратов в конечной концентрации 10 Г! (опытные образцы), и при уменьшении содержания ЦАМФ после действия индуктора по сравнению с исходным содержанием в контрольных и опытных образцах диагностируют IgEзависимые реакции на НСПП, а при увеличении содержания ЦАМФ в контрольных и опытных образцах после действия индуктора диагностируют псевдоаллергические реакции.

Способ осуществляют следующим образом.

У больного из локтевой вены берут кровь в З,SX-ный раствор цитрата нат- 20 рия (10:1), ив которой путем центрифугирования в течение 10 мин при 150g получают богатую тромбоцитами плазму, а путем дальнейшего центрифугирования при 1200g — бестромбоцитарную плазму. 25

После подсчета клеток равные объемы богатой тромбоцитами плазмы (БТП) инкубируют в течение 15-20 мин с 2040 мкл физиологического раствора ипи с 20-40 мкл отдельных НСПП (в конеч—

-Ф ной концентрации 10 M) . В указанном интервале времени достигается инактивация фермента PGH-синтетазы при действии НСПП. После инкубации к тромбоцитам добавляют индуктор агрегации

АДФ в концентрации О, I 0,2 ° 10" М, через 60-80 с (время максимально достигаемой агрегации) осуществляют экстракцию циклических нуклеотидов (этанольная экстракция подкисленным эта- 40 иолом — l мл 1 н, НС1 на 100 мл этанола) и определяют концентраци ЦЛ2№ .

В основу предлагаемого способа диагностики IgE-зависимых реакций на

НСПП легло обнаруженное явление усиления агрегационной способности тромбоцитов у больных атопией. Нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотичесыие аналгетики являются классическими фармакологическими агентами, которые угнетают ак,тивность тромбоцитов, При неиммунологических реакциях НСПП проявляют себя как ингибиторы функции тромбоци- тов, при IgE-зависимых феноменах на55 блюдается парадоксальный эффект,при инкубации с НСПП вЂ” активация функции тромбоцитов. Такой необычный ответ вызван тем, что при наличии атопии

11СПП, как и другие истинные аллерге— ны, активируют IgE-зависимое высвобождение фактора, активирующего тромбоциты.

Повышение уровня ЦАМФ происходит толь ко у больных с пс евдоаллергией, а у здоровых и больных атопией (при любом виде сенсибилизации) определяется уменьшение концентрации циклического нуклеотида после действия индукто ра агре г ации.

Разграничение нормального ответа от атопии и наличие атопии к конкретному НСПП устанавливают при уменьшении ЦАМФ в БТП после действия индуктора агрегации на преинкубированную с НСПП плазму, богатую троибоцитами. У здоровых или больных с атопией, обусловленной сенсибипизацией к другим видам аллергенов (но не к НСПП), отсутствует однонаправленный характер изменений в контрольном и опытном образцах.

Сравнительные исследования по известному и предлагаемому способам проведены у 29 больных с различными клиническими проявлениями непереносимости НСПП. Из 20 больных низкий уровень IgE (ниже 20 кЕ/л) определен у 8 пациентов (27,5/), высокий уровень (выше 1 00 кЕ/л) — у 13 (44,8X), промежуточный, диагностически незначимый (от 20 до 100 кЕ/л) — у S (27,5X) . Число больных с трудно дифференцируемым значением ?дЕ приближается к тем цифрам, которые указаны в литературе, — от 30 до 377..

С помощью предлагаемого способа установлено, что псевдоаллергические реакции имеют место у 17 больных (58,6X), атопические — у 11 (37,9X), не удалось диагностировать тип реакции только у 1 больного (3,4X) . Таким образом, точность предлагаемого способа составипа 96Х, что значительно превышает точность известного спосо-, ба. IlpnaeDKa диагноза проводилась путем постановки провокационных тестов и клиническим наблюдением за больными.

Пример 1. Больной М., 25 лет, обратился в аллергологический центр с жалобами на повышение температуры, головную боль и боль в суставах, появление сыпи на коже кистей, стоп, голеней, предплечий, туловища, В те- чение двух предшествующих дней прини5 152 мал амидопирин, цитрамон. и други» ле— карственные препараты, Диагностирована многоформная экссудативная эритема. Определено содержание Igg

1200 кЕ/л.

Полученные данные говорят об атопии, но не представляется возможным судить, чем обуслонлено повышение уровня >8Š— лекарственными препаратами ипи другими причинами. Из вести, что к временному увеличению уровня

IgE приводят вирусные инфекции, а у больного были клинические симптомы, напоминающие респираторную инфекцию.

С целью дифференциальной диагностики проведено исследование уроння

ЦАМФ в БТП. Результаты исследования следующие. Исходное содержание ЦАМФ в БТП 1 7, 1 pmo 1 /1 0 тромбо цито в, пос9 ле действия индуктора на БТП, проинкубированную с физиологическим раствором, содержание НАМФ 6,0 pmol/1О

9 ( тромбоцитов (контрольный образец), в

БТП, проинкубированной с амидопирином, содержание ЦАМФ после действия индуктора 9,4 ршо1/10 клеток (опыт9 ный образец), т. е. произошло уменыпе— ние содержания ЦАМФ после действ ия индуктора в контрольном и опытном об.разцах. Установлен IgE-зависимый вариант непереносимости НСПП. Через год после случайного приема таблетки от головной боли, содержащей пиразолоновые производные, развился рецидив многоформной экссудатинной эритемы с повышением уровня IgE до

10000 кЕ/л, что подтверждается диагнозом ТеЕ-зависимого механизма непереносимости НСПП.

Пример 2. Больной У., 23 года, направлен на консультацию из госпиталя, где находился в связи с развившимся у него после приема ряда лекарств, в том числе аспирина (АЦС1<), синдрома Стивенса — Джонсона. Содержание IgE в сыворотке 33 кЕ/л. Для выявления непереносимого лекарственного препарата проведено исследование ЦАМФ в БТП. Исходный уровень 11АМФ

22,0 pmol/10 тромбоцитон. После ин9 дукции агрегации АДФ содержание НА11Ф в контрольном образце 38,0 pmol/109 тромбо цитов, н опытном (БТП, и ро инкубированная с АЦСК) содержание НАМФ

24 pmol/10 клеток. Таким образом, 9 по увеличению содержания ЦАМФ н контрольном и опытном образцах по сравнению с исходным уровнем диагности7588

40

poHана псевдо аллергическая реакция на АЦС1 (аспирина) . В дальнейшем пос- ле приема пара це тамола, который не является ингибитором PGH-синтетазы и, следовательно, не может вызывать, псевдоаллергических реакций, у больного симптомы непереносимости не развивались. Следовательно, правильность нынода о неиммунологическом характере непереносимости AIICK подтверждена, чем и доказана достоверность предлагаемого способа.

Пример 3. Больная 3.,56 лет, находилась в клинике по поводу болезни оперированного желудка, получала одновременно анальгин и пенициллин в инъекциях. На фоне проводимой терапии развился анафипактический шок. После выведения больной из шока через 2 недели проведено исследование общего IgE, Содержание IgE составило 240 кЕ/л. 1(оличество ЦАМФ н исходном образце БТП 10,6 pmol/10

9 тромбо цитов, после индук ции агрег ации АДФ в БТП, проинкубированной с физиологическим раствором, — 8, 2

pmo1, в опытном образце (БТП, проинкубированная с анальгином) после дейстния индуктора — 7, 1 pmol /109 кле-.. ток. Диагностирована IgE-зависимая реакция на анальгин. Наличие аллергии к пенициллину проведено радиоаллергосорбентным тестом (RAST) с пенициллоилами G и Ч. Результаты RAST отрицательны. Таким образом, диагностика предлагаемым способом позволила дифференцировать непереносимость

НСПП от лекарственной аллергии к пенициллину у больной с высоким уров-, нем неспецифического IgE при одновременном приеме нескольких лекарств.

Пример 4. Больная А.,33 лет, находилась по поводу инфекционно-аллергической бронхиальной астмы 1 сте— пени, поливалентной леКарственной непереносимости. В анамнезе развитие приступов удушья после приема анальгина, цитрамона, пиркофена. В июне

1984 года были получены положительные кожные пробы с аллергеном березы.

Определено содержание IgE 68 кЕ/л °

Уровень IgE находится в так называемой промежуточной зоне, которая является недиагностической, и не позволяет четко дифференцировать атопии от неатопических феноменов. Больной для уточнения данных анамнеза прове1527588 противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики за счет дифференциального определения атопических и псевдоаллергических реакций, из крови выделяют обогащенную тромбоцитами плазму, вносят в нее лекарcTBpHHbB(препарат и инкубируют, затем вносят индуктор агрегации тромбоцитов и определяют содержание циклического адецозинмонофосфата и при уменьшении содержания его по сравнению с контролем, не содержащим индуктор, определяют атопическую реакцию, а при увеличении содержания - псев— доаллергическую реакцию на лекарственный препарат. с арцев

Корректор А. Обручар

Заказ 7507/51 Тираж 789 Подп исное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Проиэводственно-иэдательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 дено исследование предлагаемым способом. Исходный уровень ЦАМФ в БТП

3,75 pmol/10 тромбоцитов. После действия индуктора содержание ЦАМФ в контрольном образце (БТП» инкубиро5 ванная с физиологическим раствором) повысилось до 28,5 pmol, в опытных образцах (БТП» инкубированная с индометацином и анальгином) после действия индуктора содержание ЦАМФ составило 15,1 и 15,8 pmol/10 клеток, 9 т.е. было повышение по сравнению с исходным в несколько раэ. Диагностирована аспириновая астма с неиммунологическими механизмами непереносимости НСПП. Достоверность диагноза подтверждена провокационным тестом с НСЦП.

Пример 5. Больная Р.,59 лет, 20 наблюдается в аллергическом центре по поводу инфекционно-аллергической бронхиальной астмы 2 степени. В анамнезе отмечался приступ удушья после приема метиндола. Содержание IgE 25

120 кЕ/л, что позволяет предполагать наличие атопии, Для уточнения данных анамнеза проведено обследование предлагаемым способом. Исходное содержание ПАМФ в БТП 4,45 pmol/10 тромбоцитов. После действия индуктора в контрольном и опытном образцах (БТП, инкубированная с физиологическим раствором и индометацином! содержание

ЦАМФ увеличилось до 9, 4 н 11,7 pmo1/10

9 клеток соответственно. Диагностирована непереносимость НСПП,обусловленная неиммунологическими феноменами. Кожные пробы со всеми группами неинфекционных аллергенов отрицательны. Последний пример свидетельствует о том, что само по себе увеличение уровня IgE до 120 кЕ/л не может быть критерием атопии. При высоком уровне IgE» обус» ловленном индивидуальными особенностями, у больной наблюдаются псевдоаллергические ненммунологические реакции на НСПП, которые диагностируются предлагаемым способом.

Как видно из приведенных примеров, использование предлагаемого способа

50 обеспечивает более полное выявление

Составитель А.Бон

Редактор И.Горная Техред М.Дидык псевдоаллергических реакций, как за счет уточнения типов Heèåðåíoñèìoñrè в диапазоне недиагностических, промежуточных значений IgE так и за счет выявления неиммунологических реакций на НСПП у больных с высоким индивидуальным уровнем IgE

Точность предлагаемого способа достигает 90-96Х» точность извест Ьro 63-707.. Важным достоинством способа является почная безопасность больных, возможность одновременного исследования препаратов, относящихся к разным химическим группам.

Предлагаемый способ позволяет распознавать етопическую или неиммунологическую (псевдоаллергическую) реакцию на ЙСПП, а известные способы позволяют распознавать или только непереносимость к группе лекарств без уточнения характера, или только разграничивать атопи»» от псевдоаллергии без определения конкретного лекарственного препарата. Следовательно, для дифференциации атопических и псевдоаллергических реакций на 1!СПП они должны применяться в совокупнос— ти.

Ф о р м у л а и з обретения

Способ определения аллергических реакций на лекарственный препарат путем исследования крови, о т л и— ч ающ ийс я тем, что, с целью повьппения точности определения аллергических реакций на нестероидные