Способ определения антигена в биологических жидкостях

 

Изобретение относится к медицине и, в частности, к серологической диагностике. Цель изобретения - повышение чувствительности индикации антигена и ускорение способа. Для индикации антигена в биологических жидкостях смешивают на предметном стекле одну каплю исследуемой на антиген жидкости или экстракта и одну каплю специфической антимикробной сыворотки и через 2-15 мин добавляют одну каплю окрашенной инактивированной взвеси стафиллококка Кован 1, прогретой при 100°С в течение 2-3 мин. Через 10 мин регистрируют результаты реакции агглютинации. 1 табл.

СОЮЗ СОБЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

119) (П i

А1 (50 4 0 01 И 33/53

ОПИСАНИЕ АЗОБРЕТЕНИЛ

Н AQYQ CHQMV САЙИДЕ Г !:ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

Г О ИЗОБРЕТЕ1 1ИЯМ И ОТИРЫТИЛМ

ПРИ i l(HT СССР (21) 4302568/28-14 (22) 30.06.87 (46) 23.12.89. Бюл. М 47 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней, Среднеазиатский научно-исследовательский противочумный институт и Центральный научно-исследовательский институт эпидем гологии (72) Б.А. Шамардин, 10,П.Солодовников, С. .Ирданов и С.И,Омирбаева (53) 6l3.373 (088.8) (56) Никитин В,Н, и др.Новые ускоренные методы индикации патогенньгх микробов. Кишинев, 1984, с ° 72-80.

Перадэе Т,В., Халонен П, Иммунологическая диагностика вирусных инФс.кций., 1., 1985, с. 144-152.

Изобретение относится к медицине, в частност:г к серологичесKGH диаг

H,с ггпе, 1ель иэс р .тения — повышение чувствительности и|диг dUHH антигена H

; скорение способа.

Споссб ocуществляюT следующим образом, Делаю. как обычно смыв клеток ста4илококка Кован 1 после =-ro роста. в течение 24 ч на косяках (5-10 косяков с пит".ò=åëüíoé средой) 0,85_#_-re< раствором ЛаС1. Затем прогревают 5—

15 мт .н в кипящей вогяной бане и вносят кра"итель Конго-рот до 0,1

1,О/-чо"r концентрации на 1-2 мин,после гего взвесь стафилококка 2-3 разя отмывают 0,85Х-ныл. раст..ором РаС1

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА В

БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к мецицине и, в частности, к серологической диагностике, Пель изобретения — повышение чувствительности индикации антигена и ускорение способа, Для индикации антигена в биологических жид" костях смешивают на предметном стекле одну каплю исследуемой на антиген жидкости или экстракта и одну каплю специфической антимикробной сыворотки и через 2-15 мин добавляют одну каплю окрашенной инактивированной взвеси стафилококка Кован 1, прогретой при 100 С в течение 2-3 мин, Через 10 мин регистрируют результаты реакции агглютинации, 1 табл, доводят до 20-25 млрд, концентрации и исггользуют в течение 4 мес (срок наблюдения).

Для индикации антигена используют экстракт фекалий, приготовленный : М обычным способом, Смешивают на пред-,АР метном сгекле одну каплю исследуемого на антиген экстракта, одну каплю Я)1 антимикробной сыворотки, и добавляют Я) через 2-15 мин одну каплю окрашенной инактивированной взвеси стафилококка, Через 3-10 мин отмечают наличие агглютинации клеток стафилококка, Ис- и пользуют антимикробные сыворотки коммерческие и сооственного приготовления и в разведении 1:10 — 1:200.

Пример, При обследовании больньгх острыми кишечными инфекциями

1530988

Таким образом, чувствительность индикации по предлагаемому способу вьппе, чем по известному, в 2-6 раз при ускорении исследования °

Способ

Средняя арифметическая минимальной выявляемой дозы антигена, мкг/мл, специфичности индик ации

Зонне 026

086

Известный

Предлагаемый

0,04 + 0,004

0,01 + 0,002

Ов06 «+ 0э 005

0,01 + 0,002

0,08+ 0,005 0,04+ 0,005

0,03+ 0,004 0,01+ 0,002

Составитель И,Башкаев

Техред М.Дидык

Редактор А,Коэориэ

Корректор М,Шароши

Заказ 7947/45 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðoä, ул. Гагарина, 101.проведен поиск антигенов шигелл и эшерихий в фекалиях по известному и предлагаемому способом, По известному способу формалинизированную взвесь стафилококка нагружали сыворотками

Зонне, эшерихиоэными 026, 055, 086, труды отмывали, ресуспендировали и вносили в лунки планшет в равных объемах с раститрованным экстрактом исследуемых фекалий.

По предлагаемому способу делали смыв стафилококка Кован 1 с пяти косяков с мясопептонным, агаром после

24 ч роста.при 37 С 0,853-ным раствором NaC1, инактивировали в кипящей водяной бане в течение 5 мин, доводили по стандарту мутности да 20 млрд. концентрации, вносили Конго-рот до концентрации 0,57., выдерживали 2 мин уО и дважды отмывали 0,851 раствором

NaCl, ресуспендировали до 20 млрд.

На предметное стекло наносили одну каплю экстракта исследуемых фекалий, добавляли одну каплю антимикроб- 25 ной сыворотки (Зонне в разведении

1:150, эшерихиозные в разведении

1:10), выдерживали 2 мин и вносили одну каплю окрашенного инактивированного стафилококка. Через 6 мин наблюдали агглютинацию (укрупнение частиц) стафилококка. Чувствительность индикации иллюстрируется таблицей, Формула изобретения

Способ определения антигена в биологических жидкостях путем реакции агглютинации с применением специфической антисыворотки и суспензии стафилококка Cowan 1, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и ускорения способа, в изучаемый материал добавляют равный объем антисыворотки и через 2-15 мин вносят взвесь .интактных клеток стафилококка Сомвп 1, прогрео тую в течение 2-3 мин при 100 С и окрашенную 0 1Ж-ным раствором Конгорот и через 10 мин регистрируют результаты реакции агглютинации.