Способ определения сенсибилизации организма бактериальными аллергенами

 

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике бактериальной сенсибилизации при острых и хронических заболеваниях. Цель изобретения - повышение точности способа. Сенсибилизируют частицы латекса антигеном. У больного берут кровь, выделяют лейкоциты. Затем к ним добавляют латекс, сенсибилизированный антигеном или несенсибилизированный, и в обе пробы вносят люминол. Пробы инкубируют и проводят замер уровня хемилюминисценции. При повышении уровня свечения в опытной пробе в сравнении с контролем там, где вносят несенсибилизированный латекс, диагносцируют сенсибилизацию организма к исследуемому антигену. В сравнение с прототипом точность увеличивается на 80%.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

COUHAЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (б1) 4 С 01 И 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4357184/28-14 (22) 04.01.88 (46) 30.12.89. Бюл. М 48 (71) Киевский медицинский институт им. акад. А.А.Богомольца (72) Н.И.Якуба (53) 615.2(088.8) (56) Педиатрия, 1983, У 2, с, 12-16.

1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ ОРГАНИЗМА БАКТЕРИАЛЬНЬ!МИ АЛЛЕР-

ГЕНАМИ (57) Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике бактериальной сенсибилиэации при острых и хронических забоИзобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике бактериальной сенсибилизации при острых и хронических заболеваниях.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Сенсибилизацию латекса бактериальными антигенами производят накануне проведения последования. Для этого к

1 мл взвеси частиц латекса в дистиллированной воде в концентрации 10 добавляют 1 мл исследуемого бактериального антигена (бактериальные антигены получены из Казанского института эпидемиологии и микробиологии).

Смесь латекса и бактериальных аллергенов инкубируют в морозильном отде2 .леваниях. Цель изобретения — повышение точности способа. Сенсибилиэируют частицы латекса антигеном. У больного берут кровь, выделяют лейкоциты. Затем к ним добавляют латекс, сенсибилизированный антигеном или несенсибилизированный, и в обе пробы вносят люминол. Пробы инкубируют и проводят замер уровня хемилюминесценции. При повышении уровня свечения в опытной пробе в сравнении с контролем там, где вносят несенсибилизированный латекс, диагностируют сенсибилизацию организма к исследуемому антигену. 8 сравнении с прототипом точность увеличивается на 80Х. ленни холодильника в течение 18 ч.

Затем смесь центрифугируют при

2000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость снимают, а к осадку добавляют физиологический раствор до

1 мл, (концентрация частиц латекса, нагруженных бактериальным антигеном, должна также составлять 10 ).

Для исследования хемилюминесценции сенснбилизированных лейкоцитов у больного из пальца берут кровь в гепаринизированные капилляры, вмещающие 0,1 мл крови (число капилляров зависит от количества исследуемых бактериальных антигенов из расчета

1 капилляр крови на 3 пробы) ° Герметически запаянные капилляры центрифугируют 5 мин при !500 o6/мин. При этом на границе плазма-эритроциты образуется слой лейковзвеси, который

1532875 осторожно отрезают. Лейковзвесь растворяют в среде Хенкса беэ фенолового красного иэ расчета 1 капилляр крови на 1,5 мл среды.

Смесь лейковэвеси и раствора Хенкса разливают по 0,5 мл во флаконы для измерения хемилюминесценции, добавляют в контрольную пробу О,1 мл суспензии латекса без антигена, в опытные пробы — 0,1 мл латекса, нагруженного бактериальными антигенами.

В пробы добавляют также 0,1 мл 2,8 мМ раствора люминола, инкубируют в термостате в течение 30 мин и проводят амер хемилюминесценции в режиме счета фотонов.

Сопоставляют показатели хемилюминесценции в опытных.и контрольной про5е и при повышении свечения в опытной 20

1Пробе диагностируют наличие специфи,Ческой сенсибилизации к бактериаль ому антигену, находящемуся в данной коробе.

Пример 1. Больной В,, 14лет, 2g й1оступил в детское отделение ДБ Р 1

Киева с диагнозом бронхиальная астма, инфекционно-аллергическая форма, средне-тяжелое течение, фаза обостроения, 30 . Из анамнеза известно, что до 7 лет часто болел ОР3 (6 и более раз в год).

Й 10 лет перенес тяжелую форму грипrra осложнившегося бронхопневмонией, вслед за которой появились приступы удушья. До 12 лет приступы повторя35 лись относительно редко. В дальнейШем приступы удушья возобновлялись при острых респираторных заболеваниях.

При поступлении состояние больного средней тяжести: одышка смешанного характера, частота дыхания 28 в минуту, бледность кожных покровов ° При фиэикальном исследовании — коробочный

45 оттенок звука, дыхание ослаблено, большое количество свистящих хрипов на выходе. Границы сердца в норме, тоны приглушены, частота сердечных сокращений 84 в минуту. На рентгенограмме- — усиление и деформация бронхососудистого рисунка с признаками пневмосклероза, сердце правильной конфигурации. Общий анализ крови и мочи— без патологии.

Определение кожной чувствительности к бактериальным аллергенам не проводилось в связи с выраженным обострением заболевания.

Обследование ребенка проводят со- гласно предлагаемому способу. Для этого у больного из пальца в первый же день заболевания, одновременно со взятием общего анализа крови, проводят забор крови в гепаринизированные капилляры (для исследования взято

2 капилляра крови на 6 проб). Герметически запаянные капилляры центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин, слой лейковэвеси, образованный на границе плазма — эритроцит, осторожно отрезают и растворяют в 3,0 мп среды

Хенкса.

Смесь лейковзвеси и раствора Хенкса разливают до 0,5 мл во флаконы для измерения хемилюминесценции и добавляют в 1-й флакон (контрольный)

0,1 мл латекса без антигена, другие флаконы — по 0,1 мл раствора латекса, предварительно нагруженного (как описано) следующими бактериальными антигенами: во 2-й флакон — золотистым стафилококком, в 3-й флакон — гемолитическим стрептококком, в 4-й — кейссерией катарралис, в 5-й — протеем, в 6-й — синегнойной палочкой, После внесения латекса во все пробы добавляют 0,1 мл 2,8 м11 раствора люминола, пробы инкубируют в термостате в течение 30 мин и проводят замер хемилюминесценции в режиме счета фотонов с помощью ФЭУ-39а.

Получены следующие результаты исследования: хемилюминесценция пробы

N 1 (контрольной) 35400 имп/с, пробы

9 2 58723 имп/с, Ф 3 32844 имп/с, Р 4 34200 имп/с, У 5 37552 имп/с, М 6 32675 имп/с.

Следовательно, хемилюминесцентное свечение лейковзвеси в пробе Р 2 (со" держащей латекс, нагруженный антиге-. ном золотистого стафилоккока ) выше, чем в пробе, содержащей латекс беэ антигенов, в то время как внесение в пробы латекса, нагруженного другими бактериальными антигенами, существенно не изменяло значений хемилюминесцентного свечения. На основании полученных данных диагностировано наличие сенсибилизации к золотистому стафилококку °

На основании установленного диагноза в схему лечения больного включены антибиотики, обладающие противостафилококковым действием, в плане реабилитационных мероприятий учтена необходимость специфической иммуниза

10

Составитель В.Литовченко

Техред Л.Олийнык Корректор Т.Малец

Редактор О.Спесивых . Заказ 8094/51

Тираж 789

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

5 15328 ции в отношении золотистого стафилококка.

С помощью предлагаемого способа проведено обследование 158 больных с инфекционно-воспалительными и инфекционно-аллергическими заболеваниями органов дыхания, мочевыделительной системы, желудочно-кишечного тракта (холециститы, колиты, дисбактериоз кишечника), ЛОР-органов (гаймориты, .синуситы, тонзиллиты), связанных с бактериальной сенсибилизацией. Точность диагностики у обследованной группы больных составила 96,8Х (153 больных), в то же время по прототипу было выявлен правильный диаг, ноз только у 26 больных.

Полученные результаты использованы для оптимизации лечения и сокращению сроков пребывания в стационаре.

Формула изобретения

Способ определения сенсибилизации организма бактериальными аллергенами, включающий забор крови, выделение лейкоцитов, ннкубацию их с аллергеном, адсорбированным на носителе, и определение сенсибилизацин осуществляют по увеличению показателей реакции по сравнению с контролем без аллергена, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве носителя аллергена используют латекс и после инкубации с ним лейкоцитов определяют хемилюминесценцию.