Способ определения концентрации белка

Авторы патента:

G01N33/68 - с использованием протеинов, пептидов или аминокислот

Изобретение относится к биохимии, в частности к способам определения концентрации белка в исследуемых жидкостях. Цель изобретения - повышение точности способа. Для определения концентрации белка готовят водный раствор бромфенольного синего, содержащий 10 - 13,5 об.% этанола, и к нему добавляют 1/5 - 1/20 объемную часть раствора белка. Реакцию проводят в цитратном буфере при PH 3,0 - 3,2 и концентрации красителя 5 - 8<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">-5</SP>М. Содержание белка определяют путем измерения оптического поглощения комплексов белка с красителем при λ 610 нм. Величина поглощения линейно зависит от концентрации белка в диапазоне 10 - 100 мкг/мл (по сывороточному альбумину человека).

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 01 Н 33/68

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А 8ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4445386/28-14 (22) 20.06.88 (46) 30.03.90. Бюп. Р 12 (71) Институт фотобиологии АН БССР (72) В.Б.Гаврилов, В.П.Никольская и С.В.Конев (53) 612.015(088.8) (56) Analyt. Biochem, 1978, v;88, р. 605-611. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ

БЕЛКА (57) Изобретение относится к биохимии, в частности к способам определения концентрации белка в исследуемых жидИзобретение относится к биохимии, в частности к методам определения концентрации белка в исследуемых жидкостях

Цель изобретения вЂ” повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что в реакции используют бромфеноловый синий в концентрации 5-Sx10 М и цитратный буфер с рН 3,0-3,2.

На чертеже изображена зависимость величины оптической плотности от концентрации белка.

Пример 1. К 2,7 мп реактива (5 мг БФС + 11 мл этанола + 89 мл

0,05 М цитрат-буфера, рН 3,0) добав-. ляют 0,3 мп раствора сывороточного альбумина человека. Интенсивно перемешивают и через 1-2 мин измеряют поглощение прн h= 610 нм. D „ 0,475

„„SU„„1553904 А 1

2 костях. Цель изобретения вЂ” повышение точности способа. Для определения концентрации белка готовят водный раст" вор бромфенолового синего, содержащий 10-13,5 об.X зтанола, и к нему добавляют 1/5-1/20 объемную часть раствора белка, Реакцию проводят в цитратном буфере при рН 3,0-3,2 и концентрации красителя 5-8 ° 10 Ì. Содержание белка определяют путем измерения оптического поглощения комплексов белка с красителем при Л 610 нм. Величина поглощения линейно зависит от концентрации белка в диапазоне 10100 мкг/мп (по сывороточному альбумину человека). 1 ил. против контрольной пробы (2,7 мп реактива + 0,3 мл Н О). Затем измеряют поглощение стандартной пробы, к которой быпо добавлено 0,3 мп сывороточного альбумина человека с концентрацией 0,5 мг/мп - стандарт (С,, ). .П

0,264. Определяют концентрацию белка в исследуемом растворе по уравнению С „= DxC/D = 0,475 0,5/0,264 = 0,90 мг/мп.

Пример 2. Процесс ведут аналогично примеру 1, за исключением того, что используют следующие концейтрации сывороточного альбумина человека (САЧ): 10,20,40,60,80,100 мкг/мп.

При увеличении концентрации САЧ от 10 до 100 мкг/мл оптическая плотность D „, линейно возрастает от

0,053 до 0,528.

1553904

О,Ч

N 100 нкд!ги

Мают

Составитель Л.Сабурова

РЕдактор Л.Пчолинская Техред Л.Сердюкова Корректор Н.Ревская

Заказ 454 Тирак 507 Подпис ное

BHHHQH Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,301

Таким образом, линейная зависимость оп ического поглощения от концентраци белка сохраняется в диапазоне

10г100 мкг/мп.В то ие время в спосо5 бе "прототипе линейная зависимость ме)кду D и С . „наблюдается только дл узкого дйапазона концентраций бейка (10-20 мкг/мп) и при С „„„

40 мкг/мл отклонение D от линейной зависимости составляет уае l2X.

Формула изобретения

Способ определения концентрации белка путем добавления к пробе с белком бромфенолового синего, растворенного в 10" 13, 5Х-ном подкисленном этаноле споследующнм спектрофотометрированием при длине волны 610 нм, о тл и ч а ю щ и и с н тем, что, с целью увеличения точности способа, реакцию проводят в цитратном буфере с рК 3,0-3,2, а бромфеноловый синий добавляют в концентрации 5-8х10 М.

Способ диагностики гемолитической болезни новорожденного // 1553902

Изобретение относится к области медицины, в частности педиатрии

Способ определения степени активности воспалительного процесса при хронических бронхитах // 1543345

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения степени активности воспаления при хронических бронхитах

Способ определения содержания средних молекул в крови // 1538128

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения средних молекул в крови

Способ дифференциальной диагностики туберкулеза и неспецифических заболеваний легких // 1538127

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии и пульмонологии

Способ оценки лечения хронического катарального бронхита // 1536316

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии внутренних болезней

Способ диагностики мастита // 1529124

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для диагностики мастита

Способ диагностики стадий течения язвенной болезни // 1529123

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии

Способ определения атакуемости белка пепсином // 1508167

Изобретение относится к медицине , в частности, биологии, и может быть использовано в агропромышленном комплексе, а именно в пищевой промышленности, ветеринарии, зоотехнике и биотехнологии для определения атакуемости белка пепсином

Способ исследования устойчивости организма водных животных к гипоксии // 1508166

Изобретение относится к ветеринарии и зоотехнике

Способ оценки эффективности замещения костного матрикса при трансплантации в ходе оперативного лечения костной опухоли // 2101708

Изобретение относится к медицине, а именно к ортопедии

Способ прогнозирования осложненного течения острого панкреатита // 2102764

Изобретение относится к области медицины, а именно к прогнозированию течения острого панкреатита

Способ дифференциальной диагностики клинических форм бруцеллеза у людей // 2103687

Изобретение относится к медицине, а, именно, к диагностике бруцеллеза цитохимическими методами

Способ оценки состояния больного // 2103692

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для диагностики и прогнозирования состояния больного в послеоперационном периоде и при развитии острого воспалительного процесса

Синтетические олигопептиды, специфически взаимодействующие с антителами к вирусу гепатита с, способы диагностики hcv- инфекции (варианты) // 2104284

Изобретение относится к медицине, молекулярной биологии и вирусологии и представляет собой биологически активные соединения - синтетические олигопептиды, соответствующие аминокислотным остаткам (а

Способ ранней диагностики послеродового эндометрита // 2104529

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для ранней доклинической диагностики послеродового эндометрита, одного из гнойносептических постгестационных заболеваний

Способ прогнозирования развития цилиохориоидальной отслойки после внутриглазной операции // 2104548

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может найти применение после внутриглазных операций для своевременного принятия профилактических мероприятий

Способ диагностики атрофического эндобронхита // 2104549

Способ определения эффективности иммуноцитотерапии у больных с опг-гестозами // 2105311

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и может найти применение в оценке эффективности терапии гестозов

Способ оценки завершенности формирования соединительнотканного рубца у больных, перенесших инфаркт миокарда // 2105983

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для установления завершенности патологического процесса при инфаркте миокарда (ИМ)