Способ количественного определения витамина д @ в растительных кормах
Изобретение относится к аналитической химии природных соединений, в частности к определению витамина D<SB POS="POST">2</SB> в растительных кормах, и является усовершенствованием способа по авт.св. N 1363060. Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет дополнительного отделения избытка каротиноидов из экстракта неомыляемой фракции. Дополнительное отделение каротиноидов в виде осадка осуществляется путем центрифугирования при (-10) - (-20)°С в течение 30 - 40 мин. Изобретение позволяет в 10 раз снизить содержание каротиноидов в экстракте, дает возможность дополнительно концентрировать витамин D<SB POS="POST">2</SB> в 5 раз по сравнению с известным (авт.св. N 1363060) и довести чувствительность определений до 0,1 мкг (4 ИЕ) в 1 кг корма.
СООЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
6ИЯ
ЬПИЮ-1
Е БЛИ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
1 (61) 1363060 (21 ) 4417548/30-15 (22) 09.03.88 (46) 07.05.90. Бюл. Р 17 (71) Научно-исследовательский институт животноводства Лесостепи и Полесья УССР
:(72) Н.А. Романов, В.В. Мирось и Т.Л. Осипова (53) 636.085 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
Р 1363060, кл. G 01 N 30/06, 1987. (54) СПОСОБ ЮЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА Ог В РАСТИТЕЛЬНЫХ KOPMAX
{57) Изобретение относится к аналитической химии природных соединений, в частности к определению витамина
Изобретение относится к аналитической химии природных соединений, в частности к определению витамина
D в растительных кормах, и является
2 усовершенствованием способа по авт. св. СССР Р 1363060.
Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет дополнительного отделения избытка каротиноидов из экстракта неожщяемой фракции.
Пример. Навеску кориа 100 г заливают 400 мл этилового спирта, добавляют 100 мл 507.-ного раствора гидроокиси калия и ведут гидролиз в течение 40 мин при 60 С в атмосфере инертного газа. Витамин D экстрагируют гексаном (дважды .по 20 мл) из гидролизата, разбавленного водой до..Я0„„1562849 д 2 (51)5 G 01 N 30/06
Dg В раститсльных кормах и является усовершенствованием способа по авт. св. Р 1363060. Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет дополнительного отделения избытка каротиноидов из экстракта неомыляемой фракции. Дополнительное отделение каротиноидов в виде осадка осуществляется путем центрифугирования при (-10) — (-20) С в течение
30-40 мин. Изобретение позволяет в
10 раз снизить содержание каротиноидов в экстракте, дает возможность дополнительно концентрировать витамин
D в 5 раз по сравнению с известным (авт.св, Р 1363060) и довести чувстви- Я тельность определений до О,1 мкг (4 ИЕ) в 1 кг корма.
40Х-ной концентрации этанола, отмыва- рщ ют водой от щелочи, сушат сернокис- ф лым натрием, помещают в центрифужние
Ю пробирки и центрифугируют при -15 С в течение 30 мин. Выпавшие кристаллы каротиноидов отделяют фильтрованием и пропускают анализируемый раствор через колонку с окисью алюминия. Колонку промывают 50 мл гексана и витамин D элюируют 1,57-ным раствором изопропанола в гексане. Фракцию, содержащую витамин Dz отбирают по времени выхода витамина D из колонки, досуха упаривают в атмосфере Я инертного газа и растворяют в 4001000 мкл гексана. Затем 200-300 мкл пробы вводят в микроколонку с селикагелем жидкостного хроматографа высокого давления "Милихром и витамин
1562849
Способ определения
Объект анализа
Предлагаемый Без добавки 5,! 2
0,02
Сено люцерновое естественной сушки
То же
6,20
5,09
6,10
0,38
1,00
Без добавки
l,00
Без добавки
То же
Известнъм
То же
Предлагаемый
0,02
0,02
0,03
0,05 и
Сено люцерновое искусственной сушки
То же
0,04
0,20
Без добавки
0,57
Не обнаружено
0,56
0,72
То же
Известный
0,04
0,03
0,20
Без добавки
То же
Предлагаемый
Сено злаковое естественной сушки
То же
0,02
0,04
0,03
0,05
1,01
0,70
0,97
0,14
0,30
Без добавки
0,30
Без добавки
То же
Известный
То же
Предлагаемый
Сено злаковое искусственной сушки
То же
То же
Известный
0,03
0,10
Без добавки
0,10
То же
ll
Предлагаемый
0 05
0,04
0,25
Без добавки
Силос кукурузный
15 мес хранения
То же
0,05
То же
Известный
0,10
Без добавки
0,10
То же
0,05
0,30
D< элюируют 40-607.-ным раствором гексана в хлороформе. Детектирование ведут в УФ-спектре при 266 нм, а содержание витамина D рассчитывают по площади хроматографического пика
За счет дополнительного отделения каротиноидов из неомыпяемой фракции
50, в виде осадка путем центрифугирования при -10-20 С в течение 30-40 мин изобретение позволяет в 10 раз сниsHTb содержание каротиноидов в экстракте неомыляемой фракции при определении витамина D в растительных кормах. Это дает возможность дополнительно концентрировать витамин D в 5 раз по сравнению с известным изобрес учетом степени концентрирования его на хроматографической колонке.
Результаты определения витамина
D в различных растительных кормах приведены в таблице.
Введено Найдено витамина витамина Sr
Dgy MKr/K> Р 1мкг/K<
0,23
Не обнаружено
Не обнаружено
0,49 .
0,)0
0,21
Не обнаружено
Не обнаружено
0,51 тением и довести чувствительность определений до 0,1 мкг (4 ИЕ)/ 1 кг корма.
Достигнутая чувствительность является достаточной для анализа любых растительных кормов, в том числе и с особо малым (менее 0,5 мкг/кг) содержанием витамина D, что дает возможность широко использовать предлагаемое изобретение в сельскохозяйственном производстве для организа 1562849 d шийся тем что с tJBJIH0 поэьюения чувствительности способа за счет дополнительного отделения избытка каротиноидов из экстракта неомыляемой фракции, перед введением в колонну с окисью алюминия экстракт центрифугируют при -10-20 С в течение 30-40 мин и отделяют каротиноиды в виде осадка. ции рационального кормления сельскохозяйственных животных.
Формула изобретения
Способ количественного определения витамина D< в растительных кормах по авт.св. Р 1363060, о т л и ч а юСоставитель N Пономарева
Редактор Л. Гратилло Техред М.Дидык Корректор Л. Бескид
Заказ 1062 Тираж 494 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР !
13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101
