Способ получения лектина
Изобретение относится к медицине и касается способа получения лектина из семян гороха. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Способ осуществляется путем экстракции измельченных семян гороха 0,15 М раствором хлорида натрия при соотношении 1 : 10, центрифугирования, подкисления соляной кислотой, обработки сульфатом аммония, отделения образовавшегося осадка с последующим его диализом, очистки диализата на гидрофильном декстрановом геле ЭД-20, десорбции целевого продукта раствором глюкозы и сушки, выход 800 - 1000 мг из 1 кг сырья.
Изобретение относится к медицине и касается способа получения лектина из природного растительного сырья. Цель изобретения повышение выхода целевого продукта. Пример. 20 г муки из семян гороха экстрагируют 200 мл 0,15 М раствора хлорида натрия в течение 2 ч. при постоянном перемешивании, затем центрифугируют при 5000g в течение 10 мин, осадок отбрасывают. Надосадочную жидкость обрабатывают 0,1N раствором соляной кислоты до pH 2,5, центрифугируют, осадок отбрасывают. Надосадочную жидкость нейтрализуют 0,1N гидрата окиси натрия до pH 5,6, центрифугируют, осадок отбрасывают. В надосадочную жидкость небольшими порциями, при постоянном перемешивании, не допуская местного перенасыщения, добавляют 63 г (60%-ное насыщение) сульфата аммония. Центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, осадок растворяют в минимальном объеме 0,15 М хлорида натрия, достаточном для растворения белка и диализуют против 0,15 М хлорида натрия в течение 12 ч. при 4oC. Дальнейшую очистку производят на декстрановом геле ЭД-20. 200 мг сухого геля замачивают в избытке физиологического раствора на 48 ч. затем помещают в морозильную камеру бытового холодильника на ночь (12 ч), замораживают, оттаивают и заполняют колонку. Колонку уравновешивают 0,15 М хлорида натрия и наносят диализат. Элюат анализируют на активность (реакция гемаглютинации) и на присутствие белка при 280 нм на спектрофотометре. После сорбции колонку промывают физиологическим раствором до тех пор, пока оптическая плотность во фракциях не снизится до 0,05. Десорбцию проводят 0,1 М раствором глюкозы в 1 М хлорида натрия. Активные фракции собирают и диализуют против 0,15 М хлорида натрия в течение 12 ч. при 4oC, затем лиофильно высушивают. Выход лектина в пересчете на 1 кг семян 800 1000 мг. Минимальная концентрация лектина, вызывающая агглютинацию эритроцитов кролика, равна 0,9 мгк на мл. Выход лектина по известному способу 280 650 мг из 1 кг семян гороха. Гидрофильный декстрановый гель ЭД-20 НПО "Биолар" г. Олайне Лат. ССР. Размер частиц в сухом виде 100 250 мкм (III фракция). Удельный объем набухшего геля, мг/г 20 40, водоудерживающая способность, г. воды/г. геля 15 25.
Формула изобретения
Способ получения лектина путем экстракции семян гороха (Pisum sativum) растворителем, центрифугирования, подкисления экстракта соляной кислотой, его обработки сульфатом аммония, отделения образовавшегося осадка с последующим его диализом, очистки диализата на аффинном сорбенте, десорбции целевого продукта раствором глюкозы и сушки, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода, экстракцию ведут 0,15 М раствором хлорида натрия в соотношении сырье растворитель 1 10, а в качестве сорбента применяют декстрановый гель ЭД-20, предварительно подвергнутый замораживанию и оттаиванию.MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Номер и год публикации бюллетеня: 8-2000
Извещение опубликовано: 20.03.2000
