Способ получения производных 4(3н)-оксо-5,6,7,8- тетрагидропиридо(2,3- @ )пиримидина или их таутомерных форм
Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получение производных пиримидина. Новые соединения проявляют цитотоксичность в клеточных культурах, например к CCRF-CEM человеческим Т-клеткам, образующимся при лейкомии, при низком уровне по отношению к дигидрофлат-редуктазе. 2 табл.
СООЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУД4РСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОП.1РЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4202827/23-04
) (22) 26. 06.87 (31) 879935; 040330 (32) 30.06.86; 20.04.87 (33) US (46) 23.07.90. Бюл. И - 27 (71) Дзе Трастиз оф Принстон
Юниверсити (US) (72) Эдуард К . Тейлор, Джордж Питер Бирдслей (US), Чуан Сих (CN) и Джемс M. Хзмби (US) (53) 547.859.4.07 (088,8) (56) Houben Weij I Metoden der organisebien chemic. Verlag Coorg Tieme.
Stuttgart Banol 15/1,, 1974, s, 114,,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ
4 (ЗН) -ОКСО-5, 6, 7, 8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО
j2,3-с1)ПИРИМИДИНА ИЛИ ИХ ТАУТОМЕРНЫХ
ФОРМ (57) Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения производных пиримидина общей
6-Й- (З.>" -Е2СН -NH, где К = — СН g-NR 4-CgH4Изобретение относится к способу получения новых производных пиридо (2,3-с1)пиримидина, обладающих фармакологической активностью и которые могут найти применение в медицине.
Цель изобретения — способ получения новых производных пиридо(2,3-d ) пиримидина, обладающих более высокой противоопухолевой активностью.
Пример 1. Диэтиловый эфир
N-(4- $N -(2-ацетамидо-4(ЗН)-оксопи„„SU„„158 I 222 (5l)g С 07 D 471/04//А 61 К 31/505
С (0) NH СH f C (oi 0H)- (СН,) -С (О) ОН.
Н вЂ” Н1 R -С(0)-; R<=H; С,-С6 алкил м-L-конфигурация, или их таутомерных форм, обладающих противоопухолевой активностью, что может быть использовано в медицине ° Цель — создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут гидрогенизацией соединения общей ф-лы II О =
C-NH-C(NHR ) =N-C=C-NH-CH CHK -СН
Ф 2
K CH NR 4-С Н,-C (0) NH-CH f C(0) 0R )(СН ) С(О)OR, в котором R2 и К (различны или равны) = С -С -алкил
1 6
У
R = С -С -алканоил, с последующим гидролиэом или при необходимости ацилированием соединения II, где
R,=Í, кислотой R<-C(0)-ОН или ее реакционноспособным производным и дальнейшим гидролизом групп R<, R > и R<. Новые соединения проявляют цитотоксичность в клеточных культурах, например к CCRF-CEM человеческим Т-клеткам, образующимся при лейкомии, при низком уровне по отношению к дигидрофолат-редуктазе. 2 табл.
Ридо р 3-d )1пиримидин-6-илметил) амино1бензоил 1глутаминовой кислоты.
При комнатной температуре в течение 5 ч выдерживают смесь 800 мг
2-ацетамидо-6-формил-4 (ЗН)-оксопиридо(2,3-о 1пиримидина в смеси 55 мл ледяной уксусной кислоты и 1,2 г диэтилового эфира и-аминобензоил-L-глута- миновой кислоты. Затем к смеси добавляют 0,19 мл борогидридно-триэтиламинового комплекса. Смесь геремешивают
1581222
3 в течение 40 мин при комнатной температуре и затем выдерживают при 60 С о в течение 10 мин. Реакционную смесь охлаждают и.концентрируют в вакууме.
Полученный остаток растворяют в
90 мл метанола и раствор фильтруют.
Остаток на фильтре промывают 20 мл метанола и 360 мл диэтилового эфира. фильтраты объединяют и упаривают досуха. Остаток пропускают через колонку с силикагелем (97:3 хлороформ:метанол) и получают 1,08 r диэтилового эфира N- 14-(М -(2-ацетамидо-4(3H)-оксопиридо (2,3-д)пиримидин-б-илметил ) амино)бенэоил -L ãëóòàìèíîâîé кислоTb:, Пример 2. Диэтиловый эфир
N- (4- (М вЂ (2-ацетамидо-4(3H)-оксо-5,6„
7,8-"тетрагидропиридо(2,3-0)пиримидин- 20
6-илметил)амино )бензоил )-Е-глутаминовой кислоты.
Смесь 340 мг диэтилового эфира
N- (4. — (N -(2-ацетиламино-4(3H)-оксо— пиридо (2,3-й)пиримидин-б-илметил )ами- g5 но)бензоил -L-глутаминовой кислоты в 80 мл метанола и 40 мл ледяной уксусной кислоты помещают в сосуд гидрогенизации (Адамсa), Добавляют 55 мг катализатора (окись платины) и смесь гидрируют при 4,2 атм (60 фунтов/кв.дюйм) и комнатной температуре в течение 15 мин. Катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток пропускают через колонку с силикагелем, используя в
35 качестве элюирующего растворителя смесь хлороформа и метанола (97:395,5:5), и собирают фракции по 20 мл, Фракции 62-73 содержат побочный про40 дукт-2-ацетиламино-6-метил-4(ЗН)-оксопиридо(2,3-d )пиримидин, фракции
74-88 содержат 15,4 мг целевого продукта диэтилового эфира N- (4-1 N -(2ацетиламино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо5,3-d )пиримидин-6-илметил)амино )бензоил )-L-глутаминовой кислоты.
Пример 3. N- (4-(М -(2-ацетамидо-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидро- < пиридо(2,3-й)пиримидин-б-илметил) амино)бензоил )-L-глутаминовая кислота.
В 8 мл метанола растворяют 20 мг диэтилового эфира 11-(4-ГИ -(2-аце55 тиламино-4(3H)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо. (2, 3-d )пиримидин-6-илметил) амино)бензоил QL-глутаминовой кислоты и добавляют 0,4 мл 1 н, водного едкого натра, Смесь перемешивают при комнатной температуре 96 ч и затем добавляют 0,1 мл ледяной уксусной кислоты, Метанол удаляют в вакууме и полученный остаток растворяют в
5 мл воды. Эту смесь подкисляют
0,16 мл ледяной уксусной кислоты и полученное твердое вещество отделяют фильтрованием, получают 6,0 мг продукта И- f4-(И -(2-ацетамидо-4(3H)оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридоj2,3-d) пиримидин-6 — илметил)амико )бензоилj
L-глутаминовой кислоты.
Пример 4, Диэтиловый эфир
N-14-(И -(2-ацетамидо-4(3H)-оксопиридо (2,3-а)пиримидин-б-илметил)-N -форI миламино)бензоил глутаминовой кислоты.
В течение 2 ч при 25 С перемешивают смесь 25 мл 98i-ной муравьиной кислоты и 4,9 мл (5,25 г,51,5 ммоль) уксусного ангидрида, К полученному раствору добавляют 2,43 г (4,5 ммоль) диэтилового эфира N-(4-(N -(2-ацетамидо-4(3H)-оксопиридо {2,3-d)пиримидин-6-илметил)амино)бензоил)-L-глутаминовой кислоты. Эту смесь перемешио вают при 55 С в течение 15 мин и при о
25 С 1 ч. Растворитель отгоняют при пониженном давлении и остаток растирают с диэтиловым эфиром. Твердый остаток отфильтровывают и перекристаллизовывают из изопропанола, получают
2,0 г (78ь) диэтилового эфира N- 14(И -(2-ацетамидо-4(ЗН)оксопиридо
Р, 3-й) иримидин-6-илметил) -N - формил амино)бензоил 1глутаминовой кислоты, т.пл. 180-182ОС.
Спектр ПИР Me 2 16 (с,, ЗН); 2 49 (т., 1Н, Д 7,36 Гц); 3,97-4,10 (м,, 4Н); 4,364,39 (м. 1Н); 5,24 (м., 2Н); 7,51— 7,54 (M., 211, АА ВВ ) 7,84-7,87 (м., 2Н,,АА ВВ ); 8, 21 (м., 1Н); 8,82 (с., 1Н), Вычислено,i : С 57,24; Н 5,34; N 14,83, Е7 Зо 4 3 Найдено,Z: С 56,94; Н 5,11; N 14,57. Пример 5. Диэтиловый эфир N-14-(N -(2-пивалоиламино-4(3H)-оксопиридо(2,3-й)пиримидин-б-илметил)N -формиламино)бензоил глутаминовой 1 кислоты е Аналогично примеру 4, используя диэтиловый эфир N- 4-(И -(2-пивалоил1222 5 158 амино-4(ÇH)-оксопиридо(2,3-с1)пиримидин-6-илметил) амино)бензол PL-глутаминовой кислоты, получают предлагае- мое соединение. Спектр ПМР (Ме $0-d ) д": 1,091,16 (м., 1Н); 1,21 (с., 9Н); 1,902,10 (м., 2Н); 2,39 (т., 2Н, J 7,37 Гц); 3,96-4,09 (м., 4Н); 4,31-4,43 (м., 1Н); 5,22 (с., 2Н); 7,50-7,53(АА BB,2Н); 7,83-7,86 (АА ВВ );, 8, 21 (м., 1Н); 8, 71 (д ..1Н, 3 = 5,87 Гц); 8,72 (м., 1Н); 8,80 (с., 1Н). Пример 6. Диэтиловый эфир N- $4-jN -(2-пивалоиламино-4(ÇH)-оксопиридо(2,3-й)пиримидин-б-илметил)N -ацетиламино1бенэоил глутаминовой кислоты. К перемешиваемой суспензии 0,65 г диэтилового эфира N-14-(И -(2-пивалоиламино-4(ÇH)-оксопиридо(2,3-d) пиримидин-6-илметил)амико)бензоил глутаминовай кислоты (1,1 ммоль) и 0,22 r (2,2 ммоль) бикарбоната калия в 10 мл метиленхлорида, охлажденной, до 0-5 С, добавляют 0,097 г (1,2 ммоль) ацетилхлорида. Реакционную смесь перемешивают при О-5 С в течение 10 мин и затем дают ей возможность принять комнатную температуру. После перемешивания в течение 45 мин при комнатной температуре добавляют 50 мл .метиленхлорида. Смесь экстрагируют последовательно трижды (порциями по 25 мл) водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и вновь водой. Водные экстракты объединяют и экстрагируют 50 мл метиленхлорида. Органические экстракты сушат безводным сульфатом магния и фильтруют, растворитель отгоняют при пониженном давлении. В результате получают 0,7 г диэтилового эфира N (4- (И -(2-пивалоиламино-4(ÇH)-оксопиридо(2,3-61пиримидин-6-илметил)-N -ацетиламино)бензоил)глутаминовой кислоты. Спектр ПМР (Ме БΠ— d С), 1,17 (м., 6Н); 1,22 (с., 9H); 1,88 (с., ЗН); 1,88-2,13.(м., 2H) 2,40 (т., 2H, 1 = 7,46 Гц); 3,97-4,08 (м., 4Н); 4,30-4,42 (м., 1Н); 5,02 (с., 2Н) 7, 34-7, 66 (АА ВВ, 2H); 7, 83-7, 86 (AA ÂÂ,2H); 8,19 (м., 1Н); 8,64 (м., 1Н); 8,75 (д,, )Н,,Х = 7,39 Гц). Пример 7. Диэтиловый эфир N - -(4- 5-(2-ацетамидо-4(ÇH)-оксо-5,6, 7, 8-тетрагидропиридо 2, 3-d )пиримидин5 6-илметил)-N -ôîðìèëàìèío áåíçîèë)-Lглутаминовой кислоты. В течение полутора часов в атмосфере водорода при давлении 2,8 атм . (40 фунтов/кв.дюйм) встряхивают смесь 0,743 г (0,36 ммоль) диэтилового эфира N- 4- fN -(2-ацетамидо4 (ЗН)-оксопиридо 1"2, 3-d )пиримидин-6илметил) -N -формиламино) б ензоил )-Lглутаминовой кислоты и 230 мг окиси платины в 75 мл смеси этанола и уксусной кислоты (2:1). Реакционную смесь фильтруют через цеолит и фильтрат сначала упаривают при небольшом пониженном давлении, а затем при высоком вакууме, поддерживая по возможности наиболее низкую температуру. Остаток растворяют в метиленхлориде и пропускают через хроматографическую колонку с хроматотроном, используя в качестве элюирующего растворителя 57.-ный раствор метанола в метиленхлориде; в результате получают 0,684 r (937) диэтилового эфира N-(4-(N -(2-ацетамидо-4(ЗН)-оксо-5, 6,7,8-тетрагидропиридо(2,3-й)пиримидин-6-илметил)-N -формиламино)бензоил )-L-глутаминовой кислоты, т.пл. 188-190 С. Спектр ПМР (le>SO — d ) Р: 2,08 (с., ÇH); 2,42 (т.„ 2Н, 3 = 7,46 Гц), 2,78-2,91 (м,, 1H) 3,09-3,19 (м., 1Н); 3,89 (д., 2Н, Х = 5,98 Гц); 3,99-4,12 (м., 4H) 4,42 (м., 1H) 6,64 (м., 1Н); 7,51-7,54 (м., 2Н, AA ВВ ); 7,91-?,94 (м., 2Н, AA ВВ ); 8,61 (о., 1Н); 8,74 (д., 1Н, Х вЂ” 7,32 Гц). Повторно хроматографируют центральные фракции. После удаления растворителя пробу растирают диэтиловым .эфиром и твердое вещество собирают. Вычислено,7: С 56,83; Н 6,01; N 14,73. СgqHg Ыс03 Найдено,ь: С 56,60; Н 5,90; N 4,43. Пример 8. Диэтиловый эфир ! N- (4- fN — (2-пивалоиламино-4 (ÇH) -оксо5, 6, 7, 8-тетрагидропиридо 2, 3-й )пиримидин-6-илметил) -N -формиламино )6ензоил )-Ь-глутаминовой кислоты. Этот продукт получают аналогичным образом путем восстановления диэтилового эфира N-(4-(N -(2-пивалоиламиноI 4(3H)-оксопиридо P,З-й)пиримидин-6илметил)-N -формиламино1бензоил1глу таминовой кислоты, т.пл. 152-153 С. ИК-спектр (КВг) P,см - < 3369 и 3250 (NH), l 732, М. 7, 1605 (С=О), Спектр ПМР (Me 5,59 Гц); 4,0-4,11 (м., 4Н); 3,904,47 (м., IH)1 6,40 (м., IH); 7,527,55 (АА ВВ",2Н); 7,92-7,94 (AA ВВ,,1 2Н); 8,62 (с., IН); 8,75 (д,, IН, 7,33 Гц). Найдено,X . С 58,53; Н 6,60; N 13,6!. 15 С э Н1ф N <0<, Вычислено,X: С 58,81; Н 6,58, N 13,72. Пример 9. Диэтиловый эфир И-(4- (М -(2-пивалоиламино-4(ÇH)-ок- 20 со-5,6,7,8-тетрагидропиридо!.2,3-d 1 пиримидин-6-илметил)-N --ацетилами 1 но)бензоил -L-глутаминовой кислоты. К раствору 0,64 г (1,03 ммоль) диэтилового эфира N-14-5N †(2-пи25 валоиламино-4 (ЗН) -Оксопиридо (2, 3-d ) I пиримидин-6-илметил)-N -aUeTxnaMHHo) бензоил -L-глутаминовой кислоты в 40 мл ледяной уксусной кислоты добавляют 96 мг окиси платины. Суспензию встряхивают в атмосфере водорода (3,2 ати; 45 фунтов/кв.дюйм) в течение 2,5 ч, смесь разбавляют !00 мл метиленхлорида и фильтруют через цеолит для удаления катализатора, Фильт- 35 рат упаривают при пониженном давлении, и остаток растворяют в 100 мл метиленхлорида, экстрагируют дважды (по 75 мл) насыщенным раствором бикарбоната натрия, Водные слои повтор- 40 но экстрагируют 75 мл метиленхлорида, органические слои объединяют и сушат безводным сульфатом магния. После удаления осушающего агента фильтрованием растворитель отгоняют при пони- 45 женном давлении, получают 0,54 r (84X) диэтилового эфира N- (4-iN (2-пивалоиламино-4(ÇH)-оксо-5,6,7,8тетрагидропиридо 2,3-d)пиримидин-билметил)-N -ацетиламино)бензоил )-1, — 50 глутаминОВОи кислоты, кОтОрую допОлнительно очищают перекристаллизацией из этилацетата, т.пл. 120-123 С, Спектр ПИР (Ме 80 — d<) сР: 1,061,19 (м,, 6Н);:1,16 (с., 9Н); 1,82 {с,, ЗН); 1,84-2,17 (м., 6Н); 2,42 (т., 2Н, У = 7,40 Гц); 2,80-2,94 (м., IН); 3,17-3,23 (м., IН); 3,68 (д,, 2Н, 22 Х = 5,59 Гц); 3,98-4,10 (м., 4H); 4, 39-4,45 (м., 1Н); 6, 38 (с., I H); 7,43-7,46 (АА ВВ, 2Н); 7,90-7,93 (АА ВВ, 2Н); 879 (д,, IН, 3 7,33 Гц). Пример 10. N-!1-4-(N †(2-амино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо (2, 3-d )пиримидин-6-илметил)-N— формиламино)бензоил -L-глутаминовая кислота. Диэтиловый эфир (0,092 г, 0,16 ммоль) N-f4-(N -(2-ацетамидо-4(ÇH)-оксо-5,6, 7,8-тетрагидропиридо (2,3-с1)пиримидин6-илметил)-N -формиламино)бензоил Ь-глутаминовой кислоты в 10 мл 0,25 н. водного раствора едкого натра перео мешивают при 25 С в течение 72 ч и затем воду упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 15 мл воды, раствор охлаждают до О С и подкисляют уксусной кислотой. Твердое вещество собирают фильтрованием спустя 30 мин и получают 0,046 г (60,5X) N-Il4- (N †(2-амино-4(ÇH)-оксо-5,6, 7, 8-тетрагидропиридо (2, 3-d ) пиримидин-6-илметил)-N -формиламино ) бензоил -Ь-глутаминовой кислоты. Спектр ПМР (Ме БО - d ) 4!: 1,812,2 (м., 4Н); 2,33 (м., ÇH); 2,73 (м,, IН); 3,1 (м,, 1Н 3,85 (м., 2Н); 4,39 (м., IH); 6,2 (м., IH); 7,497,51 (м., 2Н, АА BB ); 7,90-7,93 (м., 2Н, АА ВВ ); 8, 59-8, 62 (м., 2Н) ° Аналогично описанному 200 мг диэтилового эфира N -- 4-(N-(2-пивалt оиламино-4 (ЗН) -оксо-5, 6, 7, 8-тетрагидропиридо(2,3-d!пиримидин-6-илметил)Б -ацетиламино бензоил) — L-глутамйно-вой кислоты перемешивают в течение 72 ч в 5 мл 0,2 н,гидроокиси натрия. Реакционную смесь нейтрализуют 0 5 н. соляной кислотой, охлаждают до О С, образующееся твердое вещество собирают. фильтрованием, получают N- (4-(N (2-амино-4(ÇH)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо 1.2, 3-d )пиримидин-6-илметил) -Н вЂ” ацетиламино 16 ензо ил )-Е-глутаминовую кислоту. Пример 11, И-!4-(N -(2-амина-.4 (ЗН)-оксо-5, 6, 7,,8-тетрагидропиридо (2,3-d )пиримидин6-илметил)-N формиламино3бенэоил j-L-глутаминовая кислота. Раствор 20 мг Н- 14-$N -(2-амино4(3H)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо 1".2,3-d1пиримидин-б-илметил)-амино1 бензоил )- .-глутаминовой кислоты в 1581222! 0,5 мл 97 -ной муравьиной кислоты I о нагревают при 90 С в течение 1 ч. Растворитель отгоняют при пониженном давлении и остаток растирают с диэтиловым эфиром. Твердое ве= шество собирают фильтрованием, получают 17 мг N-(4-Pl -2-амино-4(ЗН)-! оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо-б-илметил)-N -формиламино)бензоил1-L- 10 глутаминовую кислоту, которую дополнительно очищают, растворяя в 0,1 н, едком натре, и осаждают добавлением ледяной уксусной кислоты. Пример 12. N-14-(11 -(2-амино- !5 4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо (2,3-d)пиримидин-б-илметил) амино)бензоил ) L-глутаминовая кислота. К 32 мп 5 -ного раствора хлористого водорода в метаноле (приготовлен- 20 ном разбавлением метанолом 2 мп концентрированной соляной кислоты до объема 60 мл) добавляют 0,717 r (1,3 ммоль) диэтилового эфира N- 41 25 fN - (2-ацетамидо-4 (ЗН) -оксо-5, 6, 7, 8— тетрагидропиридо 2, 3 — и 1пиримидин-6илметил)-N -формиламино)бензоил)-Lглутаминовой кислоты (приготовленного в соответствии с примером 2). Ре30 акционную смесь перемешивают при 45 С в течение 18 ч. После охлаждения реакционной смеси до 25 С добавляют 4 мл 6 н.едкого натра и смесь дополнительно перемешивают 72 ч при 25 С. Раствор концентрируют при пони- 35 женном давлении. Добавляют 20 мл и смесь подкисляют ледяной уксусной кислотой, дббавляя ее по каплям. о Смесь выдерживают 2 ч при 0 С, твердое вещество собирают и получают О, 485 г (88 ) N-!!4- Pl - (2-амино-4 (3H)оксо-5, 6, 7, 8-тетрагидропиридо (2, 3-й ) пиримидин-6-илметил) амино)б ензоил ) -Ь-глутаминовой кислоты, т, пл. (разложение) 198 С. Спектр ПИР (Ме7$0 — d <) g: 1,861,1 (м,, 6Н); 2,31 (т., 2Н, 7,2 Гц) 2,8-2,86 (м., IН); 3 24-. 3,2S (м., 2Н); 4,2-4,4 (м., 1Н); 5 94 (с., 2H) 6 29 (с., IH); 6 34 50 (т., IН, = 5,24 Гц); 6,56-6,58 (АА ВВ,2Н).; 7,62-7,65 (АА BB,2H); 8,06 (д,, J = 5,15 Гц); 9,7 (широкий с,, IН), Этот продукт может быть получен гидролизом диэтилового эфира N-(4PN -(2-пивалоиламино-4(ЗН)-оксопиридидо 2, 3-d)пиримидин-6-илметил)-N формиламино 6 ензоил1глутаминовой кислоты, Диэтиловый эфир (1,44 г Г 2,4 ммоль) N — 4- (М- (2-пивалоиламино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо(2,3-с1)пиримидин-б-илметил)-N -формиламино бенэоил)-Ь-глутаминовой кислоты растворяют в l н. едком натре и раствор перемешивают при 25 С в течение 72 ч. Добавляют активированный уголь и суспензию перемешивают, фильтруют. Фильтрат подкисляют ледяной уксусной кислотой и белый осадок собирают фильтрованием спустя 30 мин после охлаждения до 0 С. Получают 0,87 r (84 ) того же продукта, т.пл. (разложение ) выше 198 С. ИК-спектр (КВг) Я,„„,, см - : 3460-2600 (NH и COOH); 1695, 1655 и ! 600 (c.=0). Спектр IIMP (Ие $0-d ), d : 1,852,02 (м., 6Н); 2,3 (т, 2Н, J = 7,4 Гц) 2,81-2,88 (м., IH); 3,23-3,32 (м.,2Н) 4,2-4,4 (м., IН); 5,92 (с, 2H); 6,34 (т., IН, 3 = 5,28 Гц); 6,55-6,57 (м., 2Н, АА ВВ ); 7,61-7,64 (АА ВВ, 2Н);. 8,08 (д., IН, J = 7,64 Гц); 9,7 (широкий с., IH). Пример 13. Готовят раствор N-(4-(Н -(2-амино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8тетрагидропиридо(2,3-й)лиримидин-б-илметил)амино)бенэоил)-L-глутаминовой кислоты в смеси 15i ацетонитрила и 85% раствора О,l .-ного триэтиламина в уксусной кислоте (буферный рН 7,0) из расчета 1 мг глутаминовой кислоты на 1 мл растворителя. Этот раствор вводят в хроматографическую колонку 10 мм 50 см Циклобонд 1 фазу, используя тот же растворитель. Устанавливают скорость потока 1,10 мп/мин с регистрацией УФ-спектра при 254 нм. Первый диастереоизомер, существенно свободный от другого, получают с временем удерживания 45,58 мин (изомер "A"). Второй диастереоизомер, существенно свободный от первого, получают с временем удерживания 48,32 мин (изомером "В"). Исследования показали, что предлагаемые соединения проявляют цитотоксичность в клеточных культурах, Например, по отношению к CCRF-CEM человеческим Т-клеткам, образующимся при лейкемии, установлены следующие значения IC (для нескольких образцов),. представленные в табл.l. 1581222 Эти соединения не являются ингибиторами дигидрофолат-редуктазы, следовательно, цитотоксичность соединений может быть изменена простым добавлением гипоксантина. Цитотоксичность истинных ингибиторов дигидрофолат-редуктазы в той же системе может быть изменена только одновременным добавлением гипоксантина и тимидина. Хотя соединения не являются ингибиторами дегидрофолатредуктазы, они проявляют значительную неопластическую активность при испытаниях на живых организмах. Это подтвержда-, ют представленные в табл.2 данные для N-(4-(N -(2-амино-4-(3H)-оксо-5, I б„7,8-тетрагидропиридо 2,3-0)пирими;,. дин-б-илметил) амино)бензоил -L-глута- 2р миновой кислоты. Такой высокий уровень антинеопластической активности на живых тканях является весьма неожиданным при столь Н Н сн — ъ i 2 или их таутомерных форм, о т л и ч аю шийся тем, что соединение об щей формулы II II 1 % СН вЂ” И 3 CGNH — СН вЂ” CH CH C00R 2 2 2 З СООТГ> 5О 1 ! М Сн Ж COSH Сн СН2СИ2СООВЗ Н СООТГ 1 где R — водород или группа R C0-, в которой R - водород или С -С -алкил; " означает L.конфигурацию относительно указанного атома углерода, где R и имеют указанные значения; R u R — одинаковые или различЭ ные и являются С „-С -алкилом, R — С -С -алканоил, низком уровне активности по отношению к дигидрофолат-редуктаэе. Что касается токсичности, то эти соединения по определению являются антиметаболитами и их терапевтический эффект основан на вмешательстве в ферментные превращения. В связи с этим указанные соединения являются потенциально токсичными, если их введение не будет тщательно контролироваться. Как видно из вышеприведенных данных, токсичность может быть уменьшена путем соблюдения дозировки. Более того, токсичность предлагаемых соединений значительно ниже, чем применяющегося в клинической практике метотрексата. Формула изобретения Способ получения производных 4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо-(2,3-6)пиримидина общей формулы Е СОМН - СН вЂ” СН СН СООН 2 2 СООИ подвергают каталитической гидрогенизации с получением соединения общей формулы (IIa) 1581222 Т а б л и ц а 2 где Р1 — R4 и имеют укаэанные энаМ чения, при необходимости полученное соединение (IIa), где R — водород, ацилируют кислотой RQOOH, где R+ имеет указанное значение, или ее реакционно-способным производным для получения соединения (IIa), где R<ацил, и затем R --R4 гидролизуют. Приоритетпопризнакам; 30.06.86 при R „ — водород; 20.04.87 при R „ — группа В СО Таблица 1 ИнгибиДоза, мг/кг Смертность Опухоль рование о l00,0 100 50 100 Я/10 6СЗНЕ D Лимфосаркома Ежедневно (в течение 8 дней) 9/10 3/10 1/10 О/10 25,0 100 12,5 100 6,0 77 Через день, начиная с 9-го дня Значения IC gz, мкг/мл Соединение 10/10 О/9 О/10 О/10 200, 0 100, 0 50,0 25,0 98 93 74 20 ¹(4-(Л -2-амино-4-(ЗН)оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо(2,3-й)пиримидин-6-илметил)амико 1 бензоил )- .-глутаминовая кислота Диастереоиэомеры N 4-(N -(2-амино-4(3H)оксо-5,6,7,8-тетрагидроииридо(2,3-й)пиримидин-б-илметил)амиио) бенэоил -Т.-глутаминовой кислоты N- (4 — (Н вЂ” (2-амино-4( (ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо 12, 3 — a ) пиримидин-6-илметил)N -формиламино)бензоил )-L-глутаминовая кислота СЗН Адено— карцинома 25 грудной железы Ежедневно (8 дн.) Токсич- 10/10 50,0 но 25,0 10/10 0,0079 10/10 3/10 О/10 1/10 О/10 О/10 0/10 12,5 6,25 6,25 3,125 1,560 0,780 0,390 96 89 61 27 ЗО 0,0026-27 Через день, всего 9 дн, (начиная с 1-го дня) О/10 О/10 О/10 О/I0 О/10 94 8) 64 61 100, О 50 0 25,0 12,5 6,25 0,011 Составитель В, Волкова Техред М.Моргентал Редактор Н. Лазаренко Корректор Л.Патай Заказ 2026 Тираж 325 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент". r.Óæãñðîä, ул. Гагарина,101
