Способ получения нейраминидазных антигенов вируса гриппа птиц

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к способам получения нейраминидазных антигенов, пригодных для использования в серологической диагностике гриппа птиц. Целью изобретения является упрощение способа и повышение выхода целевого продукта. Для этого используют штаммы вируса гриппа птиц, содержащие в своем составе нейраминидазу более термостабильную, чем гемагглютинин. При этом накопленную вируссодержащую аллантоисную жидкость разводят буферным раствором в 4-8 раз и прогревают при 54-58°С до исчезновения гемагглютинирующей активности. Критерием качества препарата является сохранение нейраминидазной активности на уровне, достаточном для проведения реакции подавления нейраминидазной активности. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК щ)5 С 12 N 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4483390/30-13 (22) 19.09.88 (46) 15.12.90. Бюл. N 46 (71) Всес .озный научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства (72) Л.H.Ênÿçåíà и Б.Д,Голубев (53) 576 .8 .097 . 2 (088 .8) (56) Зайдес В.И,, Селимонова Л.И., Доценко Л.Н., Жданов В,11. Очистка и изучение нейраминида з вируса гриппа. — Вопросы вирусологии, 1981, V 6, с. 692-696.

Seto I.Т. Drzeniek R., Rott R.

Isolation of. a low molekulаr weight

sial idase (neuraminidase) f rom influenza virus. — 8iochimica et biophysica Acta, 1966, v. 113, р. 402404 .

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, н частности к способу получения нейраминидаз— ных антигенон, пригодных для использования н серологической диагностике

° риппа птиц.

Целью изобретения является упрощение способа и повышение выхода цел ен or о пр одук та .

П р и и е р. Для приготонления препаратов нейраминида злых а нтигенов используют вируссодержащую аллантоисную жид кос т ь нир ус он гриппа птиц

„„SU„, 1613489 А 1

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НЕЙРАИИНИДАЗНЫХ АНТИГЕНОВ ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ (57) Изобретение относится к ветери-. нар ной вирус ологии, в час тности к способам получения нейраминидазных антигенов, пригодных для испольэова" ния в серологической диагностике гриппа птиц. Целью изобретения является упрощение способа и повышение выхода целевого продукта. Для этого ис пол ь з уют шта ммы вир уса гриппа птиц, содержащие в своем составе нейраминидаэу более термостабильную,чем гемагглютинин. При этом накопленную вируссодержащую аллантоисную жидкость разводят, буферным растнором в 4-8 раэ и прогревают при 54-58 С до исчезноо нения гемагглютинирующей активности.

Критерием качества препарата является сохранение нейраминидазной активности на уровне, достаточном для проведения реакции подавления нейраминидазной активности. 2 табл.

A/èHäþøêà/ Массачузетс/ 65 / Н6 М-2/, А /утка/ Англия/56 /Н11 Р6/,А/утка/

/Украина/63 (НЗ№8) с титром гемагглютипина не ниже 1: 128 и нейра минидазной активностью не ниже 1,000 е оптической плотности .

Вир ус с од ержа щую алла нт он с ную жидкость разводят фосфатно — соленым буферным раствором (рН 5,9-6,0) в 8 раэ для устранения фона свободных сиалоных кислот. Титр гемагглюти нации в разведенном материале не должен быть

<п<же 1: 8 . Pa знед енную нир ус с одержа1613489

Та бли ца 1

Л/индюшка/

1 1ассачузетс/

56/Н6И2/

0,880

0,810

О, 161

О, 078

54

56

58

++++

А/утка/Англия/

56/H 1 1N6/

1,200-1,100

1, 152-1, 153

0,900

0,889

0,687

0,281

О, 068

52

54

56

58

62

++++ щую жидкость разливают пî flpобиркам в объеме 5,0-1,0 мп и прогревают в водяном ультра термостате 30 мин в температурном режиме 54-58 С, (пред.арительно устанавливают для каждого штамма в отдельности, до полного устранения геммаглютинации) . Затем пробы охлаждают водопроводной водой в течение 3-5 мин и определяют титр гемагглютинации с 57.-ным раствором эритроцитов петуха в капельной реак-ции гемагглютинации. При отсутствии ге:-.. гглютинации в прогретом вируссод ржащем материале определяют нейраа.пп.,з зную активность. Для этого к

О, 2 мл прогретой вируссодержащей жидкости добавляют О, 2 мл фосфатно-со;:eèîãî буфера и 0,2 мл овомуцина и о ььг ержпвают при 37,0-37,5 С в течение

16-18 ч. В охлажденных до комнатной г мпературы пробах определяют нейра. аыидазнук1 активность.

Зкстинцию реакционной смеси опре— деллют спектрофотометрически при длине волны 549 нм против овомуцина в к честве контроля. Нейраминидазная .;ктивность прогретой вируссодержащей жидкости должна быть не ниже

0,400 ед. оптической плотности.

Для инактивации нейраминидазных ант ..генов берут О, 01 мп формалина, содержащего 26 формальдегида, на

3 мл прогретой вируссодержащей жидкости.

Использование способа получения нейраминидазных антигенов вируса гриппа птиц позволя T по сравнению с известным с низить число этапов, умень|шить длительность, не требует

5 использования дорогостоящей и трудоемкой в применении аппаратуры, дорог ос т оящих ф ерме нт ати вных пр е пар а т и вВ табл. 1 представлен уровень нейраминидазиой активности при различной температуре прогревания вируссод ержащей жид кости .

В табл. 2 представлен уровень и йраминидазной активности при различной продолжительности прогревания.

Ф о р и у л а и з о б р е т е н и я

Способ пол учения нейрами нида зных антигенов вируса гриппа птиц, вкпючающий заражение куриных эмбрионов вирусом гриппа птиц, накопление вируссодержащего материала, его обработку и контроль полученного антигена на нейраминидазную активность, отличающийся тем, что, с

25 целью упрощения способа н повышения выхода целевого продукта, в качестве вируса гриппа птиц используют штаммы вируса гриппа птиц, содержащих в своем составе нейраминидазу более термо30 стабильную, чем гемагглютинин, а обработка вируссодержащего материала включает разведение вируссодержащей аллантоисной жидкости в 4.. ° 8 раз буферным раствором рН 5,9...6, О с поо следуюг им прогреванием при 54... 58 С, до исчезновения гемагглютинирующей активности.

1613489

Продолжение табл.1

Л/утка/Украина/

63/ii3N8/

++++

М "+» полою,тельная — отри ца т ел ьна я .

Табл и ца 2

Лтаммы вируса гриппа

Продолажл:тельность прогревания, мин

60

РГА А

РГЛ А РГА А РГА А

A/индюшка /Масса чуз етс /65/

H652/

++++ 0,880 — — p,81p — — О) 387 — — p p76

А/утка /Англия/

/56/Н 11 . 6/

1 152 — "- 1 053 — — 1 034

1 В Ф

1,030

А/утка /Украина/63/Н31"8/

1, 352 — — — 1,31 7 — — 1, 306 — — 1,300 положительная реакция гемагглютинацни отрицательная реакция гемагглютинацин нейраминида зная активность, ед. оптической плотности.

Составитель С.Снетлышен

Редактор 0.Спесиных Техред H.Äèäûê Корректор И.Эрдейи

Заказ 3867 Тираж 478 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открьггиям при ГКНТ СССР !

13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

+ и н

ll

Температура пр orp ена— ни, оС

56

58

72

74

1,600

1,352

0,809

О, 116

0,053