Штамм бактерий flаvовастеriuм аguатilе, используемый для получения живого стартового корма при подращивании личинок рыб

 

Изобретение относится к индустриальному рыбоводству, а именно к получению живых стартовых кормов для личинок рыб, а также к микробиологической промышленности Целью изобретения является получение штамма бактерий Flavobacterium aguatile BKM- 1651Д, используемого для получения живого стартового корма при подращивании личинок рыб о 3 табл„

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИ Х

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCK0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4602280/13 (22) 05. 11.88 (46) 15.01.91. Бюл. Р 2 (71) Днепропетровский химико-технологический институт им. Ф.Э. Дзержинского (72) Н.Н. Артеменко, НыЯ. Качан, А.П. Кучик и Ю.В. Светкин (53) 579.577.851.15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 1041081, кл. А 01 К 61/00, 1986. (54) ШТАИМ БАКТЕРИЙ FLAVOBACTERIUM

AGUATILEю ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ

Изобретение относится к индустриальному рыбоводству, а именно к получению живых стартовых кормов, ис1 пользуемый при подращивании личинок рыб, а также в микробиологической промьппленности.

Цель изобретения — получение и использование штамма бактерий Flavobacterium aguatile ВКМ-1651Д, способного высокоэффективно обеспечивать рост культуры инфузорий клона в Paramecium caudatum CA-2, отвечающего всем требованиям способа выращивания.

Предлагаемый штамм бактерий Flavobacterium aguatile BKM-1651 Д выделяли путем многоступенчатого отбора из образцов прудовой воды в весенний период. Многоступенчатый отбор включал в себя массовые выделения чистых культур сапрофитных ыгкроорганизмов мето дом Коха из стерильно отбираемых проб прудовой воды с последующим отбором штаммов, предпочитаемых инфузориями клона Paramecium caudatum СА«2 по хемосенсорным реакциям.

„„SU„„1620480 А 1 (51)5 С 12 N 1/20, А О1 К 61/00

ЖИВОГО СТАРТОВОГО КОРМА ПРИ ПОДРАЩИВАНИИ ЛИЧИНОК РЫБ (57) Изобретение относится к индустриальному рыбоводству, а именно к получению живых стартовых кормов для личинок рыб, а также к микробиологической промышленности. Целью изобретения является получение штамма бактерий Flavobacterium aguatile ВКМ1651Д, используемого для получения живого стартового корма при подращивании личинок рыб. 3 табл.

Заключительным этапом отбора штаммов явилось изучение удельной скорости роста индивидуальных и массовых культур инфузорий на суспенэиях отоб-. ранных штаммов.

Выделенньпг штамм бактерий Flavobacterium aguatile ВКИ-1651 Д идентифицирован и определен по определителю

Берги.

Предложенный штамм бактерий Flavobacterium aguatile BKN-1651 Д хранится во Всесоюзной коллекции микроорганизИБФМ AH CCCP под номером В-1651 Д.

Клон инфузорий Paramecium caudatum

CA-2 хранится в музее беспозвоночных организмов биотехнологической лабора- тории г. Днепропетровска.

Полученный штамм бактерий Flavobacterium aguatile ВКМ-1651 Д имеет следугоцие морфологические и физиологические характеристики.

Клетки представляют собой короткие палочки размером 1х0,25 мкм, грамотрицательные, спор не образуют, без жгутиков.

1620480

Рост на IIIIA при 28 С в виде круглых колоний, поверхность которых гладкая, профиль выпуклый, колонии блестящие, образующие желто-оранже

5 вый пигмент.

Кроме МПЛ штамм культивировали на среде Чапека следующего состава, r/л: глюкоза 20> YaN03 2; К НРО, 1;

NgSOg 7; Н О 0,5; КС1 0,5; FeSO< 7Н О

О, i агар 20; вода дистиллированная

1 л при тех же условиях.

Колонии круглые до 2 мм в диаметре, поверхность гладкая, профиль выпуклый, пигментация оранжевая. !5

На крахмальной среде состава, г/л: пептон 10; К НРО4 5, крахмал растворимый 2, агар 20, вода дистиллированная 1 л, в аналогичньгх условиях культивирования на вторые сутки 20 наблюдали рост штамма в виде круглых колоний морфологич ски сходных с ростом на МПА в среде Чапека.

Температура культивирования 28 С. при 3„ C рост отсутствует. Минималь- 25 ная температура культивирования штамма 15-16 С. рН среды 7,2-7,4 ° В добавках солей NaCl не нуждается, гидролизует желатину, казеин и не гидролизует крахмал, целлюлозу, агар, кис- З0 лоты образует из следующих сахаров: глюкозы, сахарозы, мальтозы.

Не дает положительной реакции с метиловым красным и на присутствие в среде цитрато- не образует индола, 35

H S не обладает уреазной активностью, не восстанавливает нитриты до ы.тратов, каталазоположительный.

Растет на среде МПБ и на среде, приготовленной из отходои мясокомби-, 40 натов — бульонов от варки субпродуктов с добавлением 2 ;ной глюкозы.

Р ст штамма на жидкой среде МПБ с добавлением 2 ;ной глюкозы после 2суточной инкубации характеризовался 45 умеренным помутнением среды без образования пленки на поверхности и осадка. Помимо МПБ культура выращивалась при тех же условиях на среде

Гисса (пептон 10 r, NaCl 5 r, вода дистиллированная 1 л, глюкоза 1%/,.

Рост характеризовался слабым помутнением среды без образования газа и бе" осадка.

Данный вид бактерий является ти55 пичным представителем автохтонной в.одной микрофлоры, играет большую . роль в питании гидробионтов и не яв.ляется патогенным для беспозвоночных организмов.

Предложенный штамм бактерт и хранится на скошенном NIIA с добавлением

2 -ной глюкозы под вазелиновым маслом. Для длительного хранения штамм следует лиофильно высушивать и запаивать в стеклянные ампулы стерильно.

Новый штамм Flavobacterium aguat.

ВКМ-1651 Д обладает способностью при использовании его биомассы высокоэффективно обеспечивать рост инфузорий

Paramecium саида um СА-2 без аэреции перемешивания среды и без использования специальных сред для культивирования инфузорий.

В табл. 1 приведены сравнительные данные продуктивности периодической культуры инфузорий Paramecium caudatum CA-2 при росте на различных видах микробиального корма на демннерализованной среде Лозина-Лозинского и на водопроводной воде.

Использование предложенного штамма при получении живого стартового корма для личинок рыб осуществляют следующим образом.

Заполняют водой (водопроводной дехлорированной,, артезианской, прудовой) не содержащей живого зоопланктона любые имеющиеся емкости любой глубины. Вносят биомассу бактерий штамма

Flavobacteriun aguatile B1(N-1651 Д из расчета О, 1-0,2 г/л (сырой массы) .

Биомассу бактерий вносят по "сырой и массе с целью упрощения проведения процесса массового культивирования инфузорий, учитывая постоянную величину влажности 80 ., изменяющуюся в допустимых пределах концентрацию микроорганизмов и титры клеток бактерий штамча Г1ачоЪас егЫш а8прС11е ВКМВКМ-1651 II в культуральной воде (табл. 2) .

Титр клеток определяли на ФЭК-56 при красном светофильтре (длина волны

610 нм) .

Биомасса бактерий используется в живом виде с культуральной средой и без таковой в лиофильно высушенном и замороженном состоянии. После этого в полученную бактериальную суспензию вносят культуру инфузорий Paramecium

caudatum CA-2 в таких количествах, чтобы концентрация организмов составила в растворе 10-200 клеток в 6 м .

Время цикла культивирования инфузорий

162048

Таблица ция культуры инфумг/мл

Продукция де Лози- На воде инского

0,29

0,54

0 95

0,41

3,21

0,16

0,64

0,22

0,26

1,00 зависит от исходной концентрации организмов в растворе.

При концентрации организмов 10 "

50 мг/мл время созревания культуры

5-6 сут при концентрации 100-200 мг/мл

2-3 сут. Температура инкубирования

20-28 С, рН 7-8,5. Процесс не требует

О аэрации, перемешивания среды и регулирования светового режима.

Получаемая биомасса инфузорий хорошо поедается в живом виде личинками карповых и сиговых рыб и может непосредственно подаваться в лотки с личинками без отделения культуральной воды, при этом не происходит загрязнения воды в лотках ядовитыми продуктами распада органических веществ (табл. 3) .

Пример 1. Заполняют чистой 20 водой, свободной от зоопланктонных организмов, емкости, вносят биомассу бактерий штамма Flavobacterium aguatile

BEN-1651 Д, не отделенную от культуральной среды, из расчета 0,1 г/л. 25

После этого вносят инокулянт инфузорий IQIoH Paramecium caudatum CA-2 и доводят плотность организмов в исходном растворе до 10 мг/мл. Выдерживают

5 сут при 20 С. Через 5 сут получают 30 корм, состоящий из живой биомассы инфузорий в количестве 3 г/л. При увеличении инокулянта инфузорий до плотности 200 мг/мл, время выдержки составляет 2 сут.

Пример 2. Заполняют емкости чистой водой и вносят биомассу бактерий в замороженном состоянии штамм

Flavobacterium aguatile ВКИ-1651 Д из расчета 0,2 г/л. Вносят инокулят 40 культуры инфузорий клон Paramecium

Bacillus subtilis

Pseudomonas sp.

Saccharomyces cerevisial

Pseudomonas spo шт. Ф 2

Flavobacterium aguatile

0 6

caudatum СА-2 из расчета достижения плотности организмов в воде 100 мг/мл.

Выдерживают 2 сут при 21 С. Через

2 сут получают корм, состоящий из живой биомассы инфузорий в количестве

4,5 г/л.

Пример 3. Заполняют емкости чистой водой и вносят биомассу бактерий, лиофильно высушенную и расфасованную в запаянные ампулы, из расчета

0,2 г/л. Вносят инокулят культуры инфузорий клон Рагашесшш caudatum

СА-2 нз расчета достижения плотности организмов в воде 200 мг/мл. Выдерживают 2 сут при 25 С. После выдержки получают корм, состоящий из живой биомассы инфузорий в количест; " . г;л.-, Из приведенных примеров зидно, что с использованием биомассы бактерий Flavobacterium aguat ile БЕМ= !651 Д можно легко полу шть живой стзртовый корм в любое время года и без специального оборудования для купьтпвирования инфузорий в количествах 3

4,5 г/л. Время созревания культуры в зависимости от количества задаваемой биомассы бактерий и величины инокулята составляет 2-5 сут, при этом оно легко регулируется.

Предлагаемый штамм бактерий позволяет получать наиболее предпочптаемый личинками рыб инфузорпальный корм в виде биомассы инфузорий Paramec..иш

caudatum CA-2.

Формула изобретения

Штамм бактерий Flavobacterium

aguatile ВКМ-1651 Д, используемый для получения. живого стартового корма при подращивании личинок рыб.

1620480

Таблица 2

Титр клеток в растворе, млн.шт./мл ская сть, Таблица 3

piriforenia

Период отсчеКонтроль та, ч

60,0+,1 1, 1 500+27,3 570+77,3

103,3+13,9 2410+86,7 1895+78,6

156,6+23,6 2176+107,4 1966+63,95

156,6+13,5 1133,3+66,8 1146+75,4

Составитель О. Корженко

Редактор M.Íåäîëóæåíêî Техред П.Олийнык, Корректор А. Осауленко

Ю» М

Заказ 4220 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ОСЫ

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Концент бактери а.с.в.

0,40

0,20

0,10

0 05

24

60 0+10 5

58,3+9,6

58,3+14, 7

31,6+6 5

0,30

0,14

0,07

0,03

4,46

1,408

0,052

0,018