Способ диагностики рассеянного склероза
Изобретение относится к медицине , а именно к способам диагностики рассеянного склероза. Целью изобретения является повышение точности.1 Способ диагностики рассеянного склероза осуществляется путем забора крови у пациента до и через 30 мин после введения раствора резерпина и определения числа иммунных розеток лимфоцитов крови с эритроцитами барана , нагруженными серотонином в обеих пробах. При неизменном значении показателя по сравнению с исходным диагностируют рассеянный склероз.Точность диагностики повышается на 17 - 22%.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
РЕСПУБЛИН
Р1) G 01 1 1 33/53 б
l (! л
I с
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4407553/14 (22) 08.04.88 (46) 07.04.91. Бюл. Н- 13 (71) Пермский государственный медицинский институт (72) Т.А.10шкова, A.À.Áûêîâà и M.Ô.Ãàðèøèíà (53) 615.375 (088.8) (56) Хондакариан О.А., Завалишин И.А., Невский О.М, Рассеянный склероз. M,:
Медицина, 1987, с. 127. (54) СПОСОБ ПИАГНОСТИКИ РАССЕЯННОГО
СКЛЕРОЗА (57) Изобретение относится к медиИзобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике заболеваний, может быть использовано для распознавания рассеянного склероза (РС).
Цель изобретения — повышение точности диагностики рассеянного склероза.
Способ осуществляют следующим образом.
Забирают 0,05-0,1 мл крови из пальца больного РС в 0,05-0,1 мл
5Х-ного раствора цитрата натрия для предупреждения свертывания крови.
Вводят больному подкожно 0,5 мл
2,51-ного раствора резерпина.Через
30 мин повторно забирают кровь,как описано ранее. После тщательного встряхивания пробирки в нее добавляют для доэирования эритроцитов
0,8-0,9 мл дистиллированной воды на
30 с, а потом доливают до 9-10 мл
„„Я0„„1640653 А 1
2 цине, а именно к способам диагностики рассеянного склероза. Целью изоб1 ретения является повышение точности.
Способ диагностики рассеянного склероза осуществляется путем забора крови у пациента до и через 30 мин после введения раствора резерпина и определения числа иммунных розеток лимфоцитов крови с эритроцитами барана, нагруженными серотонином в обеих пробах. При неизменном значении показателя по сравнению с исходным диагностируют рассеянный склероз.Точность диагностики повышается на 17
227.. среды 199 для восстановления рН 7,0.
Пробирки центрифугируют 5-10 мин при
1500 об/мин, после чего надосадочную жидкость сливают, а осадок лейкоцитов ресуспендируют в 0,1-0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия или среды 199, К полученной взвеси добавляют 0,1-0,2 мп 0,57-ной взвеси глютаризированных эритроцитов барана, нагруженных серотонином, смесь инкубируют 10-15 мин при +37,0-37,5 С, после чего центрифугируют при
1500 об/мин 5-10 мин. Надосадочную жидкость удаляют пипеткой, осадок ресуспендируют в капле любой интактной сыворотки (бычьей, лошадиной, человеческой). Из полученной суспензия клеток делают мазок фиксируют в метиловом или этиловом спирте,высушивают, окрашивают по РомановскомуГимза. Под микроскопом рассматривают !00 лимфоцитов, отмечая среди них
1640653 число (Х) клеток, фиксировавших на себе три и более эритроцитов (POK), Зная содержание в крови больного лимфоцитов (7) и общее количество лейкоцитов, высчитывают абсолютное содержание POK в 1 мл крови.
Обработку эритроцитов барана в глютаровом альдегиде производят следующим образом: соединяют 1 мл 57.-ной lp взвеси тщательно отмытых нативншх бараньих эритроцитов с 0,25Х-ным раствором глютарового альдегида в со отношении 1:1 ° Смесь выдерживают при
37,0 С в течение 15 мин, после чего эритроциты дважды отмывают от альдегида забуференным изотоническим раствором хлорида натрия рН 7,2 и донодят до первоначального объема этим же раствором (57-ная взвесь). Для 20 сенсибилизации эритроцитов готовят раствор серотонина с концентрацией
0,1 мг/мл на забуференном физиологическом растворе рН 6,4. 1 мл 57-ной взвеси глютаризированных эритроци- 25 тов центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, а к осадку эритроцитов приливают 1 мл раствора серотонина. Смесь тщательно встряхивают и вьдерживают при комнатной температу-:3p ре 25-30 мин, после чего эритроциты дважды отмывают центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин изотоническим раствором хлорида натрия и им же доводят до 0,5Х-ной
35 взвеси.
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Больной Ill. 33 года, повторно поступил в клинику нервных 4р болезней с жалобами на слабость в ногах, пошатывание при ходьбе, головокружение, нарушение функции тазовых органов. Из анамнеза известно, что болен с 18 лет, течение заболе- 45 вания ремитирующее, обострения отмечались в 1976, 1979, 1982, 1986 гг.
При осмотре отмечено: патологии со стороны внутренних органов нет, пульс 68 уд. в 1 мин, АЛ 120/80 мм рт.ст.
Неврологически: горизонтальный нистагм в обе стороны, речь несколько дизартрична. Спастический тетрапарез с патологическими рефлексами °
Брюшные рефлексы не вызываютея. Выраженная статическая и динамическая атаксия. На обзорной краниограмме патологии нет. Глазное дно: деколорация височных половин дисков зрительных нервов. Установлен диагноз: рассеянный склероз, цереброспинальная форма.
Клинический диагноз рассеянного склероза подтвержден иммунологически. Резерпиновая проба положительная: число серотониновых розеток (97) практически не увеличилось (27) после введения резерпина. Это свидетельствует о том, что иммунная система не дала обычной, характерной для здоровых лиц реакции на эндогенный серотонин в виде увеличения числа иммунных розеток.
Пример 2. Больной Б., 27 лет, поступил в клинику нервных болезней впервые 7.V,87 с жалобами на снижение зрения, слабость в правой ноге, онемение пальцев рук, шаткую походку. В январе 1987 г. лечился в клинике глазных болезней с диагнозом ретробульбарный неврит. Спустя три недели зрение частично восстановилось, ио присоединилась слабость в ногах, более выраженная в правой, пошатывание при ходьбе. При осмотре: патологии со стороны внутренних органов не выявлено; пульс 72 уд. в 1 мин, АД 120/75 мм рт.ст. Неврологически: больной эйфоричен, критика снижена.
Походка атактическая, сила в ногах снижена — 3,5 балла. Сухожильные рефлексы оживлены справа выше, чем слева. Патологические рефлексы с двух сторон. Брюшные рефлексы не вызываются. Статическая и динамическая атаксия. На краниограмме патологии нет. Глазное дно: побледнение височных половин дисков зрительных нервов.
Установлен диагноз: рассеянный склероз, цереброспинальная форма, дебют, первая атака. Клинический диагноз подтвержден иммунологически. Резерпиновая проба положительна: число серотониновьтх розеток (77) не увеличилось после введения резерпина (2X)
Иммунологический диагноз: рассеянный склероз.
Цроведение резерпиновой пробы у 17 больных рассеянным склерозом (цереброспинальная и стволово-мозжечковая формы) показало, что у всех введение резерпина не увеличило число иммунных к серотонину POK: до введения ,среднее 135+13 после введения 89,7
+ 13,7, P(0,01, 1640
Таким образом, точность диагностики по предлагаемому способу достигала 100Х в то время как точность диагностики по аутоантителам к ткани мозга составляла 77-827.
Составитель И. Башкаев
Техред С.Мигунова .(Редактор Е.Хорина
Корректор Л Бескид
Подписное
Тираж 417
Заказ ) 264
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. 1агарина, 101
Постановка резерпиновой .пробы на пациентах с другими видами поражений нервной системы подтвердила специфичность способа, Р0К до введения реэерпина 9,1+0,9, после введения 44,3+2,7, Р(0,01.
Здоровые доноры (20 человек) реагировали на введение резерпина резким увеличением в крови числа иммунных к серотонину РОК,Х до введения
6,7 +0,3, после введения резерпина
37,3 «+ 2,1.
653 6
Формул а изобретения
Способ диагностики рассеянного склероза путем забора крови с пос5 ледующим ее иммунологическим анализом, отличающийся. тем, что, с целью повышения точности диаг-. ностики, после забора крови пациенту вводят резерпин и через 30 чин осуществляют повторный забор крови, к обеим пробам добавляют 0,1-д,2 мп .
0,57-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных серотонином,инкубируют смесь в течение 10-15 мин при о
37-,С, подсчитывают в мазке число розеткообразующих лимфоцитов и при отсутствии достоверного увеличения показателя между обеими пробами диагностируют рассеянный склероз.
