Инкубационная среда для радиоиммунологического определения пролактина в сыворотке крови человека

 

Изобретение относится к медицинскому радпопммунологическому микроанагш-jv ч может быть использовано в биохиппи н медицине с целью нзмерения концентрации пролактина при беременности , гинекологических заболеваниях и нарушениях функционирования гипофиза. Цель изобретения - упрощение состава инкубационной среды, повышение воспроизводимости результатов определения. Инкубационная среда 4 Т включает 1-пролактин , антитела к пролактину, вторые антитела, белокнаполнитель (сыворотку крови лошади), полиэтиленгликоль, буферные соли и дистиллированную воду при следующем соотношении.компонентов, мас.%: 251-пролактин (0, 7-2, 1 ) антитела к пролактину 0,0023-0,0035; вторые антитела 0,115-0,230; сыворотка крови лошади 5,4-6,9; 0,056-0,167; 0,165-0,495; -дистиллированная вода остальное. В примерах показано радиоиммунологическое определение пролактина в сыворотке крови человека при оптимальных и граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды. 1 табл„ S (Л с& оо СЛ -J СО 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 01 Гт1 33/534

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ эа

ГОСУЯЛРСТБЕННЫЙ КОМИТЕТ

Г1О ИЗ(ЗБРГТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ. ГКНТ СССР (46) 1 .06.9?.Бюч. N 22 (21) 4611895/14 (22) ?. 7. 10. 88 (71) Институт биоорганической химии

ЛН БССР и Институт экспериментальной эттдокриттологии и химии гормонов

А11Н r,(;rP (72) П. И, Суритсон, О. В. Свиридов, О,Л.С трельчеяок, Л.И.Сурвило, A.A. Булатов, В.С. Клубович, Л.И.Иандрик, Л;П.Будникова, Г.П.Елизарова и Т„В.1(ариона (53) (; 15. 373 (088,8) (16) Рrn L:IT (: in Rarlioin!!nunoassay Kit

;Ickier« irIsert. ref HPRZK-PR, April, 1986. (54) ИНКУБАЦИОННАЯ СРЕДА ДЛЯ РАДИОИММУНОЛйптЧГСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОЛАГ(ТИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (57) Иэобрететтие относится к медицинскому радт оттммунологическому микроаналиэ IT ттожет быть использовано в биохимии IT медицине с целью измереII >oT pe I åIIèe относится к медицинскому рацттоттмтту11ологттческому микроанализу, а именно к способам определе11ня пролактиттс1 тт биологических жид1 стах, и может быть ттсполъзовано в бис;.ITT. T.II и и TTIIITITTe с целью измерения конттентт рации пролактпна при беременнос I IT, гипс1.сл. тнчсскик заболеваниях и ттар шеннях функционирования гипофи„„80„„1635738 A 1 ния концентрации пролактина при беременности, гинекологических заболеваниях и нарушениях функционирования гипофнза. Пель изобретения — упрощение состава инкубационной среды, повышение воспроизводимости результатов определения. Инкубационная среда включает I-пролактин, антитела к пролактину, вторые антитела, белокнаполнитель (сыворотку крови лошади), полиэтиленгликоль, буферные соли и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, мас. .: Z-пролактин (О, 7 — 2, 1) 10; антитела тт ° к пролактину 0,0023-0,0035; вторые антитела 0,115-0,230; сыворотка крови лошади 5,4-6,9; NaH2P04 0,056-0,167;

Иа НРОт. 0,165-0,495; дистиллированная вода остальное. В примерах показано радиоиммунологическое определение пролактина в сыворотке крови человека при оптимальных и граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды. 1 табл.

Цель изобретения — упрощение состава инкубационной среды и повышение воспроизводимости результатов определения.

Цель достигается инкубационной средой, содержащей: антитела к пролактину, т I-пролактин, сыворотку крови т ж лошади, вторые антитела, полиэтиленгликоль и буферные соли при слецующем соотношении компонентов,мас.7.:

1,4 10 2 1-пролактин

Антитела к пролак!

635738

0,7-2,1 10

l251-пролактин

Антитела к прплок0,00?3-(1,0035

Tt III Y httInPOT«a KPnBtt ЛО

1,0-1,7

0,115-0, 230

5,4.-6,9

0,056-0,167

0,165-0,495 лонека„

11знестнп применение сь1норотки крови лошлдп B Ktt tåñ TBå кортизолсвязьп1лющс1Р системы н рлдипиммунологическом определении кс ртизплл. Однако н литературе пет снеден1и1 о применении лошадиной chIBopoòêè B качестве ингредиента 11нкублц«ппппй среды для

РаДИОИММУПОЛОГИчЕСКПГO ОПРЕДЕЛЕНИЯ белковых гормонов, Влранее tteBoawoticно было прсдскл IBTI птсутстнис иерекрестной peatctttttt t ntitiottett ToB s ottiapvHott сыворотки и прп11лктипл человека с антителами. Ио-1ппп1мому, вс зможность замены нсскп.1t,êèõ пб111супотрсб35

45

ЛЯЕМЫХ 11ПГРЕД11СН rп11 ЛОЩЛДИНОй Ct IBOроткой при хпрпшей Jio(произнпдимости и точности я1111еется с1собенпосThlo заявляемой нпкубл :1ппно1 средь1 для радиоиммунолпги IFiе1 пго определения пролактина, И р H м е р 1. РлдиопммунплогиЧССКОЕ ОПРЕЛС.ПС1п1С ПРО11ЛКтнпа В СЬ1ВОроткс крови Ilplt ollòlltili tll,iíлх знлчепиях содержания illll р -пп liòoli 1гпкублциппной с рсдь1, Инкублцпсч1пу." i-; еду и лучлют смеШИВЛНП С 1! Р . i 1 < l i FO >> it Е. I Ol I „ Ètltt! Õ КОН

55 центрлцпях, 11;:<

И1ЛДИ

Вторые антитела

Полиэт1гленгликоль

11а112ГО4, 11л2 ИГОМ. l0

Дистн11лиронлннля нпдл Остальное

Таким образом, инкубационная среда для определения про11лктинл в сыворотке кровп челонекл заявляемого состлпа отличается от прототипа мень-, шим количестнп11 ингредиентов (вместо эмбриональной сыворотки крови телят, сьп1оротки крп1в1 кролик т», бычьего сь1вороточногп лльбумннл и гамма-гло" 20 бучинов кролика B состав инкубационно среды B клчсстве белка-наполните.пя вводится один компонент — сыворотка кропи лошади). Это позволяет cymecTBeHtto ytIpocTnTt.. технологию пригптонлення ннкублиионной среды в производственных условиях и повысить воспропзноднмост> определения с ее помоЩ1Ю ПРОЛЛКтпна Н ешппРОтКЕ КРОВИ ЧЕ0)0029 тину

Сыворотка крови лошади 1,3Ь

Вторые антитела 0,172

Полиэтиленгликоль 6,15

ЙаИ РО 0, 112

1 1а< НР01 0,330

Дистиллированная вода Остальное

Радиоиммунологический анализ включает следующие стадии.

1. Внесение в пробирку с сывороткой крови человека или калибровочной пробой (0,1 ь,t). последовательно 1

2. Преинкублцня содержимого пробирок в течение 18 ч при 20 С.

3. Внесение в пробирки 1 мл смеси, содержащей полиэтилечгликоль, нторые антитела и сыворотку крови лошади, 4. Инкубация содержимого пробирок

1 ч при 20"С (но время инкубации устанавливлется динамическое равновесие между комплексом пролактин — антитела к проллктину — вторые антитела и свободными проллктином, антителами к пролактину и пторичными антителами.

5. Иентрифугирование, удаление жидкой фазы, измерение сКоросТН счета

"5Ò в тнердой фазе °

Строят калибровочный график зависимости скорости счета 1 1 от концентрации пролактина в калибровочных пробах и по этому графику определяют содержание пролактина н неизвестных пробах сыворотки крови человека.

Пример 2. Радиоиммунологическое определение прплактинл н сыворотке крови человека прп нижних граничных значениях ссдержлння ингредиентов инкубационной cpettt tÄ

Для проведения анализа используют инкубационную среду с ппжнн11и граНИЧНЫМИ ЗНаЧЕНИЯМИ С.1ДЕР КЛННЯ ИНГРЕдиентов, млс.X:

125 Z-ïðoëàê Tèí 0,7 х10 — н

Антитела к прплактину 0,0023

Сыворотка крови лошади

Вторые антитела

Иолизтпленгликол1, ЬлН,ГО, 16

О, 165

117

0,230

6,9

0,167

0,495 шади

Вторые антитела

Полиэтиленгликоль

NaH POy

NEE IIPO

Дистиллированная вода Остальное

Получение инкубационной средь; в радиоиммунологическое определение пролактина проводят, как описано в примере 1, 3d исключением того, что количества добанляемьж ингредиентов инкубационной среды изменяют в сооТ ветствии с заданными значениями верхних концентраций„

Результаты радиоиммунологического определения пролактина в сыворотке крови практически здоровых женщин, муж гин и беременных женщин с помощью набора ПР1Ц.1С-PR, инкубационная среда которого бьв(а выбрана в качестве прототипа, и с помощью предлагаемой инкубационной среды приведены в таблице.

Реэупьтаты экспериментов сравниваются с данными, полученными на тех же образцах сыворотки крови с помо— щью набора реактивов для радиоиммунологического анализа 11ГИ..V.-PR фирмы

CIS - Internntional (прототип) в точNa П1 О4

JI E(r тилл((р о в а иная пода Остальное

Получение инкубационной среды и радиоиммунологическое определение пролактина проводят, как описано в примере 1, эа искчючением того, что количества добавляемых ингредиентов инкубационной среды изменяют в соответствии с заданными значениями нижних концентраций.

Пример 3. Радиоиммунологическое определение пролактина в сыворотке крови при верхних граничных значениях содержания ингредиентов.

Для проведения анализа используют инкубационную среду с верхними граничными значениями содержания ингредиентов, мас. : ((+ I-прола ктин 2,1 а10

Антитела к пролактину 0,0035

Сыворотка крови лоповьш(ает экономичность, предлагаемая инкубационная среда позволяет получать хорошо воспроизводимые результа ты, что повь(шает достоверность опре25 деления пролактина, особенно rpEE диагностике важных высоких концентраций гормона.

6>ормула изобретения

Инкубационная среда для радиоиммунологнческого определения пролактина в сыворотке кропи человека, включающая I-пролактин, антитела к пролактину, белок-иаполнитель„ вторые

35 антитела, полиэтиленгликоль, буферны( соли и дистиллированную воду, о т л ч а ю щ а я с я тем, что, с целью упрощения состава среды и повьш(ения

40 воспроизводимости результатов при on. ределении, в качестве белка-наполнителя используют сыворотку крови лошади при следующем соотношении компонентов, мас. .: (1-пролактин (0,7-2,1)(10

Антитела к про010023-0,0035 лактину

Сыворотка крс.,I. лошади

Вторые антитела

Полиэтиленгликоль

Ы,РО4.

Na

Дистиллирона((ная вода

1,0-1, 7

0,115-0,230

5,4-6,9

0,056-0)167

0,165-0,495

Остальное

ЗС738

6 ном соответстл«. ннсTpукцисй по применению.

Анализ результатов экспериментов

5 показывает .то предлагаемая инкубае ционная среда позволяет проводить радиоиммунологическое определение пролактина в сыворотке крови человека„ Значения концентраций пролактинл в образцах сыворотки крови человека, полученнь с помощью заявляемой инкубационной среды, соответствуют Физиологическому состоянию организма и вериАицированному диагнозу и не ото(чаются от значений, полученньм с помощью инкубационной среды-прототипа; состав предлагаемой инкубационной среды значительно проще состава прототипа, что значительно облег20 чает технологию ее изготовления и

1635738

Инкубационная Пролактин, мкИЕ/мл греда

159,0 10

110,0 10

8,4

6320,0 8

4,3

165)0 10

101,0 10

Предлагаемая (пример !) 4

3, .

Предлагаемая (пример 2) 2.8

6250„0 8 6,4

4,4

170,0 10

112,0 10

Предлагаемая (пример 3) 3,2

6340 0 0

5 5

Составитель П.Бонарцев

Техред И.Дидык Корректор М. Шарохин

Редактор С,Рекова

Заказ 2811 Тираж 307 Подписное

В!ИП1ПИ Государственного комитета по иэобретениям и открытиям прн 1 К11Т CCCF

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Проиэводственно-иэдательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

Женщины пул

Мужчины пул

Женщины беременные

Женщины пул

Мужчины пул

Женщины беременные

Женщины пул

Мужчины пул

Женщины беременные

Женщины пул

Мужчины пул

Женщины беременные

fi150 0 8

152,0 10

115,0 10

Воспроиэводимость, 7. (коэЬФину ент в ар иМ ии)