Способ индукции биосинтеза белка при регенерации тканей

 

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для стимуляции процессов регенерации тканей живого организма. Цель изобретения - ускорение биосинтеза общего и растворимого белка при регенерации. В организм внутривенно вводят стимулятор системы мононуклеарных фагоцитов - продигиозан, или зимозан, или декстрансульфат в количестве 0,25,50 и 50 мг на 1 кг массы тела животного соответственно. В результате изобретения достигается ускорение биосинтеза как общего , так и растворимого белка при физиологической и репаративной регенерации тканей. 5 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕ tHblA КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4393309/14 (22) 16.03.88 (46) 07.11.91. Бюл. М 41 (71) Институт клинической и экспериментальной медицины СО АМН СССР (72) Л, Е. Панин, И.Ф.Усынин и М.В.Соколова (53) 612.015(088.8) (56) Мертнецов Н.П. Гормональная регуляция экспрессии генов. M.: Наука, 1986. (54) СПОСОБ ИНДУКЦИИ БИОСИНТЕЗА

БЕЛКА ПРИ РЕГЕНЕРАЦИИ ТКАНЕЙ (57) Изобретение относится к биологии и медицине и может быть. использовано для

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для стимуляции процессов регенерации тканей живого организма.

Цель изобретения — ускорение биосинтеза общего и растворимого белка при регенерации.

Способ осуществляется следующим образом.

При физиологическом покое или за сутки до функциональной нагрузки или воздействия повреждающего фактора животному вводят внутривенно эффективную дозу стимулятора системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) из класса бактериальных или синтетических полисахаридов: продигиозан или зимозан, или декстрансульфат в количестве 0,25, 50, 50 мг на

1 кг массы тела животного соответственно.

Максимально выраженную индукцию биосинтеза белка наблюдают через 24 ч.

Выраженность процессов физиологической и репаративной регенерации ткани оценивают по изменению скорости биосинтеэа структурных (общий белок) и цитоплаз,, SU„„1689980 А1 (я)з 6 09 В 23/28, A 61 К 37/02 стимуляции процессов регенерации тканей живого организма. Цель изобретения — ускорение биосинтеэа общего и растворимого белка при регенерации. В организм внутривенно вводят стимулятор системы мононуклеарных фагоцитов — продигиоэан, или зимозан, или декстрансульфат в количестве

0,25, 50 и 50 мг Hà 1 кг массы тела животного соответственно. В результате изобретения достигается ускорение биосинтеза как общего, так и растворимого белка при физиологической и репаративной регенерации тканей. 5 табл. матических (растворимый белок) белков, а также митотической активности клеток. (Скорость биосинтеэа белка оценивают

14 по включению С-лейцина в общий.и растворимый белок и выражают в импульсах за

1 мин на 1 мг белка.

Пример 1. Берут 4 группы животных: контрольную (нестимулированные крысы

Вистар) и 3 опытные(стимулированные кры- О© сы); «О

Первой опытной группе животных вво- О дят продигиозан эа 1 сут, второй — за 2 сут, QQ а третьей — за 3 сут до забоя, Количество животных в каждой группе 10, Препарат готовит на физиовогическом растворе, вводит внутривенно из расчета 0,25 мг на 1 кг массы ааиввв тела животного. За 2 ч до забоя всем группам животных внутрибрюшинно вводят 1,0 мл физиологического раствора. содержащего 50 мкКи 4Ñ-лейцина. После забоя животным вскрывают брюшную полость и извлекают органы и ткани, гомогенизируют их на холоде в течение 1 мин при 3000

o6/мин э стеклянном гомогенизаторе. Алик1689980 воты гомогената наносят нэ фильтры, обработанные 0,1 M раствором лейцина в 107,ном растворе трихлоруксусной кислоты.

После отмывки фильтров от несвязанного с белками С-лейцина, а также от липидных

14 компонентов и нуклеиновых кислот, проводят измерение радиоактивности жидкостным сцинтилляционным методом.

Растворимый белок получают центрифугированием гомогената при 500009, В состоянии физиологического покоя введение продигиозана приводит к выраженной индукции биосинтеза белка в боль шинстве исследованных тканей, что свидетельствует об активации в них метаболических процессов и физиологической регенерации. Эффект максимален через 24 ч после инъекции (табл.1).

Пример 2, Физической нагрузкой вызывают функциональное напряжение, Проводят 3 серии опытов. В каждой серии берут 3 группы животных: 1 контрольную и

2 опытные, Зэ 1 сут до физической нагрузки первой опытной группе вводят внутривенно

1,0 мл физиологического раствора, второй—

1,0 мл продигиозанэ в прежней дозе. В качестве физической нагрузки используют плавание 3,5 ч с грузом, составляющим 4% от массы тела: Температура воды в аквариуме оптимальная 32 — 34 С. Животных забив:: oT сразу после плавания и через 24 ч после окончания плавэния. Зэ 2 ч до забоя всем животным вводят С-лейцин. Взятие

14 ° материала и измерение удельной радиоактивности проводят по примеру 1.

При функциональном напряжении, а т""ê>Kñ в период восстановления (6 и 24 ч) скорость биосинтеза белка в тканях у стимулированных животных достоверно выше.

Следовательно, стимуляция СМФ продигиозаном усиливает процессы физиологической регенерации, П р и и е р 3. Вызывают повреждение тканей резекцией 2/3 печени. Берут 5 групп животных (табл.2), 4 и 5 руппам за 24 ч до операции вводят продигиозан. Все 5 групп животных одновременно через 24 ч после операции (т.е. через 48 ч после инъекции) забивают.

Для групп 2 и 4 контрольными являются ложнооперированные животные (3 и 5), Скорость биосинтеза белка увеличивается у нестимулировэнных животных после резекции печени (2) по сравнению с контролем (3) на 143, а у стимулированных (4) по сравнению с контролем (ь) — HB 185 /р.

Такое резкое возрастание биосинтетических процессов при стимуляции продигиозаном СМФ является опережающей реакцией, усиливающей реапаративную регенерацию.

На клеточном уровне это проявляется усилением и ускорением пролиферативных процессов за счет митотического деления клеток: повышение митотической активности у нестимулированных животных начинается только через 24 ч после резекции и достигает максимума к 30 ч (табл.З); у стимулированных животных динамика репаративного процесса другая — пик митотической активности выше и наступает раньше, уже к 24 ч после резекции.

Достижение эффекта продемонстрировано и на других полисахаридах (эимоэан, декстрансульфат). При известном однонаправленном воздействии на СМФ получен однонаправленный индуцирующий эффект на биосинтез белка в тканях печени (табл.4).

Научная обоснованность решения подтверждена следующими экспериментами.

Повторяют способ по примеру 1. Через

24 ч животных забивают, извлекают печень и перфузируют ее через печеночндю вену сначала раствором Хенкса без Са в тече ние 5 — 10 мин., затем проводят рециркуляци онную перфузию органа в течение 25 мин бикарбонатным буфером Рингера-Кребса (рН 7, 4, 37 С), содержащим 0,03 коллагеназы. После протеолитического переваривания соединительной ткани печень диссоциируют с помощью шпателя. Из полученной клеточной суспензии с помощью дифференциального центрифугирования выделяют паренхимные (гепатоциты) и стромальные клетки печени (макрофаги, эндотелиальные клетки). Паренхимные и стромальные клетки инкубируют отдельно в фосфатном буфере Рингера-Кребса при 37 С в течение 4 ч в присутствии С-лейцина. Через определенные интервалы времени иэ инкубационной среды отбирают аликвоты клеток и измеряют в них удельную радиоактивность белка.

Известно, что препараты бактериальных полисахаридов-стимуляторов СМФ при введении in vivo захватываются клетками мононуклеарной фагоцитирующей системы, в том числе макрофагами печени, что исключает возможность их прямого воздействия на функции паренхимных элементов opraнов. Тот факт, что введение продигиоэана за сутки до эксперимента индуцирует биосинтез белка в 1,5-2 раза именно и только в паренхимных (но не стромальных) клетках печени (табл,5), свидетельствует о сущест1589980

Таблица 1

* — достоверные изменения по отношению к контролю Р<0,05.

Таблица 2

Достоверные изменения: общий белок 2 — 3, 4 — 5, 2 — 4, растворимый 4- 5, 2 — 4.

Таблица 3 вовании причинно-следственной связи между эффектами стимуляции СМФ и индукции биосинтеэа белка в паренхиме органов. Механизм такого стромально-паренхиматозного взаимодействия неясен. 5

Однако в опытах !и vlvo перенос инкубационной среды от культуры непаренхимных клеток печени после стимуляции их продигиозаном к.культуре гепатоцитов воспроизводит в них эффект индукции 10 биосинтеэа белка, обнаруженный в опытах!и vlvo.

Формула изобретения

Способ индукции биосинтеза белка при регенерации тканей, включающий внутривенное введение в организм лабораторных животных биологически активного вещества, отличающийся тем, что, с целью ускорения биосинтеза общего и растворимого белка, в качестве биологически активного вещества используют продигиозан или зимозан, или декстрансульфат и вводят их в количестве 0,25, 50, 50 мг на 1 кг массы тела животного соответственно. в

1689980

Таблица 4

* — достоверные изменения по отношению к интактным животным (P < 0,05).

®

Таблица 5

" — достоверные изменения по отношению к контролю (Р < 0,05).

Составитель A.Ñêóðàò

Техред M.Ìîðãåíòâë

Корректор Н.Король

Редактор Е.Савина

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 3816 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5