Способ получения индуктора устойчивости корнеплодов сахарной свеклы

 

Изобретение относится к биотехнологии , в частности к получению индуктора устойчивости корнеплодов сахарной свеклы путем экстракции мицелия гриба Botrytis cinerea. Цель изобретения - устранение процесса, повышение выхода и активности индуктора . Способ получения индуктора заключается в следующем: гриб Botrytis cinerea выращивают глубинно при температуре 20-24°С, на среде содержащей (мас,%): мочевина 20-30, калий фосфорнокислый однозамещенный 1,0-2,0, магний сернокислый 0,3-0,5, цинк сернокислый 0,03-0,05, сахароза 30,0- 40,0, вода дистиллированная - остальное , рН среды 5,8; время культивирования 4-5 суток. Затем отделяют биомассу и выделяют индуктор кз сухой биомассы гриба экстракцией 7Q% кипящим этанолом в соотношении биомасса: этанол 1:10 в течение 30 мин. Реакционную смесь фильтруют, центриЛугирллот и выпаривают. Применение способа получения индуктора устойчивости позволяет сократить время выращивания мицелия , увеличить количество мицелия и повысить активность индуктора, (Л

СООЭ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСГ1УБЛИН

ÄÄSU <Ä> 1 700052

А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ASTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСВ ГВУ ЖОВЗНЦ

+ ": ((-"л!< .(ЩЩЯ

Gю ((. .(, (. (Q г : !.

1,0 мещенный кял(<й

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4740185/13 (22.) 20.09.89 (46) 23.12.91. Бюл. Ф 47 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт сахарной промьппленности (72) В.А.Князев, N.Л.Пельц, <,Р.Сапожникова, Л.А.1:!нецова, Л.T. Борисова, !).В.Лизак и И.П.Козинец (53) 576,8(088.8) (56) !шапошников В.Н, Техническая микробиология. И., 1948, 327. (54) СПОСОБ ПОЛУ !ЕНИЯ ИНДУКТОРА УСТО! .,:—

ЧИВОСТИ КОРНЕПЛОДОВ САХАРНО СВЕКГЕ! (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению индуктора устойчивости корнеплодов сахарной свеклы путем экстракции мицелия гриба Hotrytis cinerea. Цель изобретения — устранение процесса, повышение выхода и активности индуктоИзобретение относится к биотехнологии в частности к получению индуктоэ ра устойчивости корнеплодов caxapv(?й свеклы путем экстрякции мицелия гриба

Bo try t is c incr ea .

Известен способ получения индуктора устойчивости сахарной свеклы путем экстракции мицелия гриба В.cinereà, выращен но ro поверхностно на жидкой минеральной среде Чапека, при следующем соотнощении компонен- тов, мас.X:

Азотн

Фос<Ь(?рнокислый (?дн<>зя($g)5 C 12 N 1/14(С 12 N 1/14:С 12 R 1:645) .

А 01 N 63/00 ра. Способ получения индуктора заключает ся в следующем: гриб Во try tis c inerea выращивают глубинно при температуре ?0-24 С, ця среде содержащей о (ма с, ): мочевина 20-30, калий фосфорнокислый однозямещенный 1,0-2, О, магний сернокисльп О, 3-0,5, цинк сернокислый О, 03-0, 05, сахароза 30,040, О, вода дистиллированная — остальное, рН среды 5,8; время культинироваВят< м отделяют биомяс су и выде.пяют чндуктор из сухой биомассы гриба экст?акцией 7(1,(, кипящим . этанолом в соотноиении биомасса: этанол 1:10 н течение 30 мин, Реакционную смесь фильтруют, центрифугируют и выпаривают. Применечие способа получения индуктора устойчивости позволяег сократить время нь<ра(пиняния мицелия, увепич ть количес-во мицелия и повысить активность и: дуктора.

Сернокисльп магний 0,5

Хлористьп1 ка.(- Ф 0,5

Сернокислое железо 0,01

Сахароза 30,0

Оптимальная температура -20-2? С

М рН среды 5,8. Выход сухой биомассы за 14 дней не превьпп, ет 7 3 г «Ia

1000 <и среды, активно<:ть индукторя, получепного из гриба, выращенного таким об;? азом, составляет 21, 5 . (*Активность .(ндуктора н(ряжяется степенью устойчивости обряботанно(I свеклы, в срявне:-;ии (необря ботянными растениями) .

H e \(((. Гятк(?и н3 e ÃòI (? Г(? (.и(? (.(? бa Я в— ляе-. ся д?;ит<.льне гь кул(, ппп„? овяния

1700052 из — за медленного роста гриба, низкая производительность, т.к. поверхностное культи«проваHHP гриба дает мало мицелия H недостаточную активность полу5 чаемого индуктора, Цель изобретения — ускорение процесса, повышение «ыхода и активности индуктopa ..

Способ закачается н следующем, 1р

Гриб> RotI.ytis cinerea выращен глубинно при температуре 20--?4 0 ня сре— о де, содержащей (мяс. %): мо -! е«иетv 20-30 калий фосфорнокисл»ьй 15 одн о з ям ещен пый магний серттокисль>й

1,0-2, О

О, 3-0,5

0,03-0, 05

30,0-40,0

ЦИНК СE>>7>;О".HC JII,>й сахароза нодя дисттт> лиро20 тзаттняя остальное, рН среды 5 8, 45 суток, Затем отделяют биомассу и выделяют индуктор из сухой биомассы гриба экст— рякцией 70%-н»>м кипящим этанолом в >5 оTHc>øåHHH биомасса: этанол 1:10 н течение 30 мин, Реакцион>ту>о смесь фиттьтруют, цент—

|>ифуг пру>от и «»птт>ри«яит .

ГттОСОС> ИЛ тЮСТРЩ>УЕтг Я ПРИМЕРаМИ jP

Пример 1. Подготовка питательНо>I среды. 1,5>-3„5 г моченины, 0,52,5 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,3-0,5 г магния сернокислого, 0,02-0,05 г цинка сернокислого и 30 — 40 r сахарозы растворяют в литре дистиллированной ноды. Полученную среду разливают в качалочные колбы по

100 мл в каждую, закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют при т0

0,5 атм в течение 30 мин. Конкретныйт состав ср>еды указан н тяб>пще.

Подготовка ттасе«ного материала. Посевной материал выращивают ня свекловичном агаре в чашках Петри или про- 45 бирках пя косяках при ?0 — 22 С до поло ного споропошения (примерно 7-8 сут), Перед посевом споры смывают жидкой питательной средой, встряхивают 10 мин для по,тучения стабильной суспензии.

Фермептация. Суспензио спор стерильно «понят в качалочные колбы с предлагаемой питательной средой. Плотность спор должна быть О, 5-1, О т к10 шт/мл среды, 55

|<ульти«про«ание осуществляют в термостате при 2?-.24 С в течение 45 суток. Rf>fpocf>IH:."I мицелий отделяют фи>тьтр она>птем от куттьтуряльной жид кости, промывакт и сушат при комнатной температуре .до ттостоянного веса.

Выход сухой биомассы На средах с различным соотношением компонентов указан в таблице.

Получение индуктора. Сухую биомассу экстрагируют 70%-ным кипящим этилоным спиртом в отношении биомасса:

:спирт=-1".10, Экстракция идет в тече— ние 20 мин при температуре кипения спирта. Смесь фильтруют, центрифугируют при 5000 об/мин для осаждения спор. 1>ентрифугат ныпаривают с помощью пленочного испарителя. Высушенный осадок растворяют в таком коли— честве 70%-ного спирта, которое соответствует массе ня«ески, Это маточн»тй рас"..нор, из которого готовят рабочие растворы нужной концентрации.

Определение активности индуктора.

Активно=ть индуктора — это способность повышать устойчивость сахарной свеклы к возбудителям кагатной гнили.

Устойчивость определяется соотношением гнилой и здоровой ткани, по формуле:

А- — 100

А где А — % гнипой ткани в контрольной пробе;

 — % гнилой ткани в с>тежеобряботанной индуктором 0,003%-ным раствором ипдукторя обрабатывают свекловичные корнеплоды. IJJI>I определения активности индуктора на корнеплоды наносят инокулят н ниде, вы|>езок мицелия гриба диаметром 4 мм.

Через 5-6 дней после заражения вырезан>т и взнентивяют загнившую ткань и рассчитывают процентное содержание гнилой ткани н пробе.

Активность индуктора из мицелия гриба, выращенного на средах разного состава, показана в таблице, Сведения, приведенные н таблице, наглядно показывают, что н тех случаях, corJIа содержание компонентов ниже предлагаемого интервала концентраций (примеры 3,5,9), положительнт.тй эффект не столь велик.

В примерах 1,2,7,8,10 приведе i»I данные по составам в пределах предлагаемого интервала концентраций и сведения по потерям снекломассы и сахара н корнеплодах.

Таким образом, применение предлагаемого способа получения индукторя

1700052 устойчивости . -..-:воттяет сократить времт выращивания ми»»елия9 увеличить количество мицелия и повысить активность индуктора, Формула из о бр ет ения

Способ получения индуктора устойчивости корнеплодов сахарной свеклы, 10 включающий выращивание гриба Hc trytis сжегеа на питательной среде; содержа= щей источник азота сахарозу, калий фосфорнокислый однозамещенный, магний сер»»окисльп», соль серной кислоты 15 и воду, отделение мицелия гриба и вы= деление индуктора из биомассы путем экстракции спиртом, о т л и ч а юВлияние разного соотнойения компонентов питательной среди на выход м»»целия и активность индуктора

Показатели

1 Время выра—

N п/п

Состав, мас %

Компоненты щивания, Выход ! М»»ЦЕЛ»»Я 9

?г/1000 мл

t !

Активность

cу :ки индуктора

3.0

4090

35,4

In 5

22, ".

ЕЕ

ЕЕТ дт

»т

II

° ТТ т

IV

,т

II

ITT

4» т

2 т 94 .0Ä2

20 1

??очевт»на (I)

Калий»посфорт»окислый

«днозамещенный (I I)

?»a» »»ий cep»»a»c» »É (ХЕ Е)

??и»»т» сернокисль»й (ЕЧ)

Сахароза (7)

2. I

ЕТЕ

Ет

3 е

ТЕ

III

Е»т

»i

2,0 (190)

0,5 {0 5)

0,05

40:0 (30)

2,.0

0,5 .

40 90

1 9

2„0

0,5

0,05

40,0

3,5

2 0

0 5

0 05

40.0

3,0

l,. О

Г)

0,05

0,5

0,5 шийся тем, что, с целью ускорения процесса и повьппения вьгхода целевого продукта9 из источников азота используют мочевину, из солей сеРнокислой кислоты — сернокисгпп» цинк при следующем соотношении компонентов (мас.%):

??очевина 290-3,0

Калий фосфорнокисльп» однозаме— щенньп» 1,0 — 2,0

?1агний сернокисльп» 0,3-0,5

Цинк сернокисльп» О, 03-0, 05

Сахароза 30-40,0

Вода Ос т альн ое при этом выращивание осуществляют глубинным методом .

17ООО52

Продолжение таблицы

Состав, мас,%

Р п/и

ЛктивВыход миделия„

r/1000 мл ность

1 индуктора %

Г.V

Ч

ГI

1 Г.I

IV

1

1 т Г

IZI

ГЛ

4?,4

18,1

38,5

1/,7

Г.

II

I I.Ã

1.V

16 4 т1

II1

T.V

Г

Il

1гГ

ТV

I

Il т II

IV

I

1т

I1I

Г1/

L . I

II I !! l 2 i8,2

40,0 с 5

4О.О

17,5

15 1

1I

Г I.I

ГЛ

16 Т

39,4

Компоненты

0,05

40,0

3,0

О,05

40,0

3,0

2,0

0,5

О,03

40,0

3,0

2 0

0,5

0„01

40,0

3,0

О,О6

40,0

3,0

2,0

0,":

0,05

40,0

3,0

2,0

0,6

0,05

40,5

Зро

2,0

О,2

0,О5

40,0

3„0

2,О

3О,О з,о

2,0

О,5

0,05

25„0

3,0

2,0

Время выращивания, сутки

Покаэатели

11р одолже ни е та блицы

1700052

Показатели

Р и/и

Время выра—

Состав, мас.Е

Компоненты щивання, сутки

Активность

Вьt Y. од ми (слня, г/1000 мл индуктора, 7

40,3

7ь3

1 . Составитель И. Рогачев

Техред Л.,Сердюкова Корректор А,Обручар

Редактор Н. Козлова

Заказ 4443 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Гагарина,101

III

IV

17 Прототип

I8 Контроль без обработки

0,5

0,05

45,0