Способ получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза

 

Изобретение относится к биотехнологии и мс^кет быть использовано при приготовлении препаратов для диагностики бруцеллеза. Цель изобретения - повышение чувствительности антигена. Основой для приготовления антигена служит вакцинный штамм 19 и бруцеллезный фаг "Тб". Бруцел-лезный фаг адсорбируют на бруцеллах из расчета 10-100 фаговых корпускул на 1 микробную клетку в течение 22-24 ч при 2-4°С. Затем взвесь бактерий с адсорбированным фагом центрифугируют. Из осадка готовят 100 млрд, взвесь на 0,5%-ном карболизированном физиологическом растворе и окрашивают краской роз-бенгал. Окрашенную суспензию бруцелл разводят лимонно-фосфатной смесью (рН 3,6), изготовленной на 5%-ном растворе хлористого натрия. Полученный антиген способен вступать в реакцию с антибруцеллезными м антифаговыми антителами, что приведет к повышению его чувствительности. Кроме того, антиген, содержащий фаг, способен выявлять животных, больных острой или хронической формами бруцеллеза при использовании только реакции агглютинации и роз-бенгал пробы.Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при приготовлении препаратов для диагностики бруцеллеза.Известен способ получения бруцеллез- • ного антигена^ заключающийся в том, что выросшую культуру штамма 19 смывают стерильным 0,5%-ным фенолизированным физиологичес1?йм раствором (рН 7,0-7,2), Полученную суспензию инактивируют при температуре 80°С в течение 60 мин. стабилизируют при i2-4°C в течение 10 дней и определяют активность.Недостатком данного способа является то, что получаемый антиген обладает невысокой чувствительностью.Известен также способ получения бруцеллезного цветного антигена для роз-бен-гал пробы, заключающийся в том, что чистую культуру штамма 19 смывают стерильным 0,5%-ныМ фенолизированным физиологическим раствором, инактивируют при температуре 80°С. Суспензию инактивированных клеток окрашивают 1%-ным водным раствором краски бенгальской розовой и ресуспендируют в буферном разбавителе, включающем едкий натр, фенолизированный физиологический раствор и мо- . лом ную кислоту.Однако этим способом получ;ают антигены с невысокой чувствительностью, реагирующие, в основном, только с агглютининами, не вступающие в реакцию с комплементсвязывающими антителами и неfcСлЗсл ю чэ&

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3987652/13 (22) 16 10.85 (46) 23,02.92. Бюл. N. 7 (71) Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт Восточного отделения ВАСХНИЛ (72) А,Л. Воробьев, В,И. Белобаб,Н.П. Иванов и К.M. Мукашев (53) 615.371/.372(088.8) (56) Ветеринария. 1973, 10, с. 50. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНАДЛЯ

СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при приготовлении препаратов для диагностики бруцеллеза. Цель изобретения — повышение чувствительности антигена. Основой для приготовления антигена служит вакцинный штамм 19 и бруцеллеэный фаг "Тб". БруцелИзобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при приготовлении препаратов для диагностики бруцеллеза.

Известен способ получения бруцеллез.ного антигена,заключающийся в том, что выросшую культуру штамма 19 смывают стерильным 0,5%-ным фенолизированным физиологичесКИм раствором (рН 7,0-7,2), Полученную суспенэию инактивируют при температуре

80 С в течение 60 мин. стабилизируют при

: 2-40С втечение 10дней и определяют активность.

Недостатком данного способа является то, что получаемый антиген обладает невысокой чувствительностью.

Известен также способ получения бруцеллезного цветного антигена для роз-бен„,!Ж„„1713592 А1 (я)л А 61 К 39/10, G 01 N 33/531 лезный фаг адсорбируют на бруцеллах из расчета 10-100 фаговых корпускул на 1 микробную клетку в течение 22-24 ч при 2-40С.

Затем взвесь бактерий с адсорбированным фагом центрифугируют. Ыэ осадка готовят

100 млрд. взвесь íà 0,5 -ном карболизированном физиологическом растворе и окрашивают краской роз-бенгал. Окрашенную суспензию бруцелл разводят лимонно-фосфатной смесью (рН 3,6), изготовленной на

5%-ном растворе хлористого натрия, Полученный антиген способен вступать в реакцию с антибруцеллезными и антифаговыми антителами, что приведет к повышению его чувствительности. Кроме того, антиген, со держащий фаг, способен выявлять животных, больных острой или хронической формами бруцеллеза при использовании только реакции агглютинации и роэ-бенгал пробы. гал пробы, заключающийся в том, что чистую культуру штамма 19 смывают стерильным 0.5%-ным фенолизированным физиологическим раствором, инактивируют при. температуре 80 С, Суспенэию инактивированных клеток окрашивают 1%-ным водным раствором краски бенгальской розовой и ресуспендируют в буферном разбавителе, включающем едкий натр. фенолизированный физиологический раствор и молочную кислоту.

Однако этим способом получают антигены с невысокой чувствительностью, реагирующие, в основном, только с агглютининами, не вступающие е реакцию с комплементсвязывающими антителами и не

1713592

Составитель В.Романова

Редактор Л,Гратилло Техред М.Моргентал Корректор М. Демчик

Заказ 644 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва; Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород. ул, Гагарина, 101 пригодные для выявления хронических и латентных форм инфекции.

Целью изобретения является повышение чувствительности антигена.

Пример 1. Основой для приготовления антигена служат вакцинный штамм 19 и бруцеллезный фаг Тб.

Бактериальную массу для получения антигена выращивают на рекомендуемых для бруцелл плотных питательных средах.

Размножение фага Т6 проводят в бактериальных клетках штамма 19 в обычной для бруцелл жидкой питательной среде.

Бруцеллезный фаг адсорбируют на клетках бруцелл из расчета 10-100 фаговых корпускул на 1 микробную клетку в течение

22-24 ч при температуре 2-4 С. Затем взвесь бактерий с адсорбированным фагом цент,рифугируют при 5000-600Ь об/мин в течение 30 мин и сливают надосадочную жидкость. Из бруцелл, находящихся в осадке, готовят 100 млрд. взвесь на 0,5 -ном карболизированном физиологическом растворе. Для определения активности и установления рабочих титров в реакции агглютинации, связывания комплемента (PCK) или других серологических реакциях, данную взвесь титруют по общепринятым методикам.

Роз-бенгал антиген готовят путем окрашивания 100 млрд. суспензии бруцелл, с адсорбироваюным фагом краской роз-бенгал.

Окрашенную суспензию разводят лимоннофосфатным буфером (рН 3.6), приготовленным на 5 -ном растворе хлористого натрия.

При испытании полученного бруцеллез.ного антигена, содержащего фаг, установлено следующее.

Результаты исследования сывороток крови животных, реагирующих со стандартным антигеном в реакции агглютинации (PA) и роз-бенгал пробы (РБП) или одновременно в РА, РБП и РСК, полностью совпадают с результатами при использовании бру.целлезного антигена с адсорбированным фагом.

Сыворотки крови, негативно реагирую5 щие со стандартным антигеном в PA и РБП и положительно в РСК/РДСК, дают положительные результаты с предлагаемым антигеном как в PA и РБП, так и в РСК/РДСК.

Таким образом, использование антиге10 на, содержащего специфический фаг, позволит усовершенствовать диагностику бруцеллеза и будет способствовать более . полному выявлению животных, больных хронической и латентной формами инфек15 ции, у которых могут отсутствовать или содержаться в незначительном количестве антибруцеллеэные антитела. 8 то же время антифаговые антитела обязательно присутствуют у хронически и латентно больных, 20 которые будут взаимодействовать с данным антигеном.

Применение комплексного диагностикума позволит уменьшить количество серологических тестов и будет способствовать

25 более полному выявлению животных, больных бруцеллезом.

Формула изобретения

Способ получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза. включа30 ющий выращивание штамма ВгисеИа

abortus 19 на плотной питательной среде, смыв выросшей культуры 0,5 $-ным фенолизированным физиологическим раствором, инактивацию бактериальных клеток нагре35 ванием, окрашивание pîç-бенгалом с последующим ресуспендированием в буферном растворе и стандартизацией целевого продукта, отл ича ю щи йс я тем, что, с целью повышения чувствительности, 40 перед окрашиванием на инактивированные бактериальные клетки адсорбируют бруцеллезный фаг ТБ в количестве 10-100 част. на

1 клетку.