Способ изготовления аллергена для диагностики лейкоза крупного рогатого скота

 

Изобретение относится к получению биопрепаратов и может быть использовано в ветеринарной практике для диагностики лейкоза крупного рогатого скота кожной пробой. Цель изобретения - изготовление высокочувствительного аллергена для диагностики лейкоза крупного рогатого скота кожной пробой. Аллерген для диагностики лейкоза крупного рогатого скота содержит белковую фракцию бласттрансформированных лимфоцитов краткосрочных культур лейкоцитов больных лейкозом коров, гипсофилин и физраствор при следующем содержании компонентов: концентрация белка - 2-3 мг/мл; гипсофилин - 0,6-0,8 мг/мл; физраствор до 1 мл. Способ изготовления аллергена включает использование в качестве материала бласттрансформированных лимфоцитов краткосрочной культуры лейкоцитов больных лейкозом коров, в которую для повышения урожая бласттрансформированных клеток добавляется фитогемоагглютинин, выделение белковой фракции проводят путем разрушения тритоном Х-100 и сорбирования против нормальных клеточных антигенов добавления гипсофилина инактивации гамма-лучами и стандартизации по белку 4 табл. (Л С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 39/35

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

y iiqg 2

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 3 (гд ф 4

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4780237/13 (22) 22.11.89 (46) 23.05,92, Бюл, ¹ 19 (71) Белорусский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского (72) B.M. Лемеш и Л,П. Островская (53) 616 — 07(088.8) (56) Зильбер Л,Н. и др. Кожные реакции у больных с антигенами из рака желудка,—

Вопросы онкологии, 1969, т. 15, № 5, с. 18—

24.

Генов И. и Цуцуманский В. Приложение на аллерген за диагностика на левкозата по животнице. — Вет, сбирка, 1979, N 2, с, 7 — 9. (54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (57) Изобретение относится к получению биопрепаратов и может быть использовано в ветеринарной практике для диагностики лейкоза крупного рогатого скота кожной пробой. Цель изобретения — изготовление

Изобретение относится к получению биопрепаратов и может быть использовано в ветеринарной практике для диагностики лейкоза крупного рогатого скота, Диагностика лейкоза крупного рогатого скота проводится с помощью клинико-гематологического метода, основанного на определении количества лейкоцитов . и морфологического анализа клеток периферической крови (см. Инструкция о мероприятиях по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. Утв. ГУВ Минсельхоза СССР

25 марта 1974 г.).

„„. Ж„„1734763 А1 высокочувствительного аллергена для диагностики лейкоза крупного рогатого скота кожной пробой. Аллерген для диагностики лейкоза крупного рогатого скота содержит белковую фракцию бласттрансформированных лимфоцитов краткосрочных культур лейкоцитов больных лейкозом коров, гипсофилин и физраствор при следующем содержании компонентов; концентрация белка — 2 — 3 мгlмл; гипсофилин — 0,6 — 0,8 мг/мл; физраствор до 1 мл. Способ изготовления аллергена включает использование в качестве материала бласттрансформированных лимфоцитов краткосрочной культуры лейкоцитов больных лейкозом коров, в которую для повышения урожая бласттрансформированных клеток добавляется фитогемоагглютинин, выделение белковой фракции проводят путем разрушения тритоном Х-100 и сорбирования против нормальных клеточных антигенов добавления гипсофилина инактивации гамма-лучами и стандартизации по белку, 4 табл.

Однако гематологический метод. не всегда позволяет исключить патологические состояния, нелейкозной этиологии, сопровождающиеся лейкемоидными реакциями, и не выявляет алейкемические формы лейкоза (см: Горбунов А.П. Лейкоцитарный профиль крови и морфологические изменения в органах крови при некоторых заболеваниях, сопровождающихся лейкемоидной реакцией: Автореф. дис. на соиск, учен. степени канд, ветнаук. А. 1971. с. 8; Ефимов А.А, Клинико-гематологические и серологические исследования при лейкозе крупного

1734763 рогатого скота: Автореф. дис. на соиск учен. степени канд. вет. наук. А. 1971, с. 8), Известны методы серологической диагностики, в частности реакция иммунофлуоресценции, реакция связывания комплемента,.реакция непрямой гемагглютинации (см; Валихов А.Ф, Сывороточные преципитирующие антитела к онкорновирусу типа С. — Ветеринария, 1976, N 1, с.44-46;

Кукайн А,А. и др, Выявление специфических антител у больного лейкозом крупного рогатого скота/В кн.: Вирусы рака и лейкоза.—

M.; 1976, с; 80; Крикун В.А. и др. Обнаружение антител к р24 и гликопротеидному антигенам вируса бычьего лейкоза (БЛВ) у крупного рогатого скота при экспериментальной и спонтанной инфекции (Сб. научн, тр. Моск. вет, акад„1979, т. 107, с. 19 — 20).

Однако диагностическая эффективность этих реакций различна, Поэтому применение одной из них как самостоятельного диагностического теста недостаточно для выявления больных лейкозом животных.

В настоящее время основным серологическим методом диагностики лейкоза является реакция иммунодиффузии в геле (РИД) (см. Инструкция о мероприятиях по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота" ГУВ

МСХ, 1985).

Недостаток этого способа состоит в том, что он недостаточно чувствителен и не всегда позволяет выявлять животных, у которых титры противовирусных антител низкие, Аллергический метод является более достоверным и эффективным по сравнению с указанными. Он прост в осуществлении, не требует дорогостоящего оборудования и реактивов.

Аллергена для диагностики лейкоза крупного рогатого скота не имеется.

Наиболее близким к предлагаемому является способ приготовления аллергена для диагностики рака желудка у людей по кожной реакции путем гомогенезации тканей и выделения микросомной фракции.

В качестве исходного материала используют опухолевую ткань после хирургического удаления раковой опухоли желудка (см.: Зильбер Л.Н. и др, Кожные реакции у больных с антигенами из рака желудка.—

Вопросы онкологии, 1969, т, 15, N 5, с. 18—

24). . Известен способ приготовления аллергена из вируса крупного рогатого скота, используя при этом клеточную культуру ФЛК, перманентно продуцирующую ВЛКРС (см.

Генов И., Цуцуманский В. Приложение на аллерген за диагностика на левкозата по животнице. — Вет. сбирка, 1979, М 2, с. 7-9;

Генов И. и др. Опыты за получавание и приложение на аллерген за диагностика на левкозата по животнице. — Вет. мед. науки, 1980, т. 17, М 2. с. 42 — 47).

Однако аллергены, полученные известными способами, неприемлемы для практического применения, так как обладают антигенными свойствами. Кроме того аллергены, полученные известными способами, содержат нуклеиновые кислоты как вирусного, так и клеточного происхождения, которые опасны как источник опухолевой информации с потенциальной возможностью индуцирования опухолевого заболевания, Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности аллергена для диагностики лейкоза крупного рогатого скота.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве материала используют бласттрансформированные лейкоциты краткосрочных культур лейкоцитов периферической крови больных лейкозом коров, в питательную среду, содержащую

10 — 20o эмбриональной сыворотки, добавляют 0,004 — 0,005 мг/мл фитогемагглютинина, снятые клетки гемогенизируют в двух — трех объемах 0,15 М NaCI, выделяют из них микросомную фракцию методом дифференциального центрифугирования, обрабатывают ее тритоном X=100 до конечной концентрации 0,5-1,0, сорбируют против нормальных клеточных антигенов, стандартизируют по белку до 2-3 мг/мл, добавляют гипсофилин до концентрации 0,6 — 0,8 мг/мл и инактивируют гамма-лучами в дозе 15 — 17 кгр в течение 24 — 25 ч, Преимущество предлагаемого способа состоит в том, что полученный этим способом препарат не обладает антигенными свойствами и не содержит неинактивированные нуклеиновые кислоты, которые могут быть источником инфекции опухолевого п роцесса.

Способ осуществляется следующим образом.

Из периферической крови больных лейкозом коров путем гематологического шока выделяют лейкоциты, которые в концентрации 4 — 6.10 кл./мл вносят в питальную среду

199, содержащую 10 — 30 эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, по 100 ед./мл пенициллина и стрептомицина и

0,004 — 0,005 мгlмл фитогемагглютинина, и культивируют 72 ч. Полученные бласттрансформированные клетки осаждают центрифугированием при 800 — 1000 об./мин в течение 15 — 20 мин, трехкратно замораживают, гемогенизируют в двух-трех объемах

1734763

0,15 М NaCI и подвергают дифференциальному центрифугированию, Вначале удаляют из гомогената ядра, неразрушенные и обрывки клеток центрифугированием при

2000 — 2500 тыс, об./мин в течение 15 — 20 мин, отбрасывают осадок, надосадочную жидкость снова центрифугируют при 18-20 тыс, об./мин. Затем надосадочную жидкость 20 — 25 мин снова центрифугируют при

30 тыс. об,/мин 1,5 — 2,0 ч, полученный микросомальный осадок промывают 0,14 М

NaCI Tðè раза и ресуспендируют в 0,5 объеме 0,15 М NaCI при помощи гомогенизатора

Поттера.

Полученную суспензию микросом разрушают тритоном Х100 до конечной концентрации 0,5 — 1,0%, сорбируют против нормальных клеточных антигенов иммуносорбентом, для приготовления которого используют иммунную кроличью сыворотку против пула лейкоцитов периферической крови (3 — 5 голоа) здорового крупного рогатого скота (см. табл. 1).

Кроликов иммунизируют по схеме, приведенной в табл. 1.

Изготовление иммуносорбента.

К 10 мл антисыворотки кроликов против пула лейкоцитов здорового крупного рогатого скота добавляют 3 мл 2,5 $-ного раствора глутарового альдегида, Гель, сформировавшийся в течение 20 мин при

37 С, затем 3 ч при комнатной температуре, измельченный в гомогенизаторе и отмытый физраствором, сшивают с белковой фракцией из расчета 500 мг на 1 мл. Инкубируют при 37 С 20 мин, затем в холодильнике+4 С в течение 12 — 18 ч, Белковую фракцию от иммуносорбента отделяют центрифугированием при 5000 об./мин в течение 20 мин, Полученный препарат стандартизируют по белку 2 — 3 мгlмл, добавляют в него 0,6 — 0,8 g гипсофилина и подвергают инактивации гамма-лучами в дозе 15 — 17 кгр в течение 24 ч. Это и есть аллерген.

Аллерген проверяли на стерильность путем высева на питательные среды (мясопептонный бульон, мясопептонный агар, мясопечен очны и бул ьон под вазели но вым маслом). На питательных средах в течение

10 суток не было роста микрофлоры, Безвредность препарата проверяли на белых мышах (массой 10 — 12 г) путем внутрибрюшинного введения препарата в дозе 0,2, 0,5, 1,0 мл, Каждая доза 3 мышам. Контроль — 10 мышей. Наблюдение 10 дней. Аллерген считали безвредным, так как в течение 10 дней после его введения животные были живы и клинически здоровы, Токсичность препаратов проверяли на кроликах однократным внутрикожным вве5

50 дением 5 кроликам по 0,2 мл препарата.

Контрольным кроликам (5 голов) вместо аллергена вводили физиологический раствор.

Препарат не вызывал некроза кожи, Сенсибилизирущие свойства препарата изучали на кроликах путем внутрикожного его введения в область предплечья в дозе

0,3 мл с интервалом в 5 дней. Контрольным животным вводили препарат, аналогично приготовленный из бласттрансформированных лимфоцитов периферической крови здоровых коров. Через 15 дн. после последнего введения препарата обеим группам животных вводили аллерген в той же дозе и в то же место (разрешающая инъекция). Учет реакции на введение аллергена производили через 24, 48 и 72 ч. По характеру местной реакции и ее отсутствию судили о сенсибилизирующих свойствах аллергена.

Антигенные свойства проверяли на животных, указанных выше. У подопытных животных была взята кровь для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота в РИД, По наличию или отсутствию антител к ВЛКРС судили об антигенных свойствах препарата.Установлено, что местная и общая реакция на введение разрешающей дозы аллергенов у кроликов отсутствовала, В сыворотке крови антитела к ВЛКРС в РИД не обнаружены. Следовательно, аллерген в вышеуказанной дозе не обладает сенсибилизирующими и антигенными свойствами.

B работе использовали стерильный безвредный не токсичный препарат, лиофильно высушенный в виде аморфной массы розовато-белого цвета, хранящийся при 2 — 8 С.

Эффективность и специфичность аллергена изучали в опыте на 15 кроликах, инфицированных ВЛКРС путем внутривенного введения каждому животному по 10 — 20 мл (двукратно с интервалом в 10 дней) вируссодержащей жидкости культуры ФЛК, постоянно продуцирующей вирус лейкоза крупного рогатого скота. Для контроля служили 3 интактных кролика и 3 кролика, которым внутривенно аналогично введена культуральная жидкость интактной культуры ФЛК. Кролики находились под опытом в течение 5 мес. Через каждые 10 дн, после заражения в течение всего срока опыта производили взятие крови для серологического и гематологического исследований.

B результате заражения кроликов в 80 случаев были выявлены антитела к ВЛКРС в реакции иммунодиффузии.

Всем животным аллерген вводили в дозе 0,2 мл внутрикожно в область левого предплечья. Одновременно с противоположной стороны в таком же количестве вво1734763 дили препарат, приготовленный аналогично из бласттрансформированн ых лейкоцитов здоровых коров. Учет реакции производили через 24 и 48 ч.

Окончательную реакцию учитывали через 72 ч, При этом реакция оценивалась по наличию инфильтрации (отека) и гиперемии на месте введения препарата. Местная реакция считалась положительной при наличии инфильтрации от 0,5 см и более с гиперемией в окружности. При наличии гиперемии без инфильтрации реакция расценивалась, как сомнительная. При этом изучено время проявления и длительность кожно-аллергической реакции и характер ее проявления, При внутрикожном введении аллергена у 78,5 Д инфицированных ВЛКРС кроликов отмечена кожно-аллергическая реакция в виде ограниченной гиперемии от 0,9 до 2,5 см в диаметре, с утолщением кожной складки от 0,5 до 1,1 мм, Экспериментальные препараты испытаны на спонтанно инфицированных

ВЛКРС телятах (10 голов), которые были подобраны в неблагополучном по лейкозу хозяйстве по трехкратному серологическому исследованию по РИД. 5 интактных телят— контроль. Аллерген вводили по 0,2 мл в правую подхвостовую складку, в левую — и репарат, приготовленный аналогично из бласттрансформированных лимфоцитов здоровых коров, Реакцию учитывали через 24 и 48 ч после инъекции. Проявление кожной пробы оценивали путем осмотра и измерения толщины подхвостовой складки.

Реакция на введение аллергена характеризовалась утолщением подхвостовой складки у 7 телят от 11 до 17 мм, у 3 телят толщина ее была в пределах от 8 до 11 мм при норме 5 — 7 мм. В то время, как кожно-аллергическая реакция на интактный аллерген у контрольных телят — отсутствовала, Отдельные исследования были посвящены определению оптимального содержания белка. Для этого было приготовлено 4 серии аллергена с содержанием белка соответственно:

1 серия — 1,0 мг/мл;

2 серия — 2,0 мг/мл;

3 серия — 3,0 мгlмл;

4 серия — 4,0 мг/мл.

В препарат каждой серии добавляли по

0,8 мг/мл гипсофилина и подвергали инактивации гамма-лучами в дозе 15 кгр в течении 24 ч.

Специфичность аллергена каждой серии проверяли на 3 телятах, инфицированных ВЛКРС, Контроль — (по 2 теленка на

55 каждую серию) интактные животные. Препарат вводили внутрикожно в правую подхвостовую складку в дозе 0 2 мл.

Одновременно в левую подхвостовую складку вводили культуральную жидкость или интактный аллерген с таким же содержанием, 0,8 мл гипсофилина, Результаты учитывали через 24, 48 и 72 ч.

Установлено, что наиболее выраженная реакция проявлялась при введении 2, 3 и 4 серии (реагировали все 9 инфицированных жи вотн ых).

При введении аллергена первой серии кожная реакция отмечена у одного из трех телят. В первом случае реакция проявлялась через 24 ч и сохранялась до 72 ч, во втором — через 24 ч реакция исчезала, Таким образом, оптимальной концентрацией белка в аллергене явилось содержание его 2,0 — 3,0 мг/мл, Увеличение концентрации антигена не приводило к улучшению качества препарата, а снижение уменьшало его активность, Определение оптимальной дозы аллергена проводили на 15 телятах, спонтанно инфицированных ВЛКРС и разделенных на

3 группы по 5 животных в каждой, Животным первой группы аллерген вводили внутрикожно в область правой подхвостовой складки в дозе 0,1 мл, второй группе — 0,2 мл, третьей группе — 0,3 мл с 0,8 мг/мл гипсофилина. Одновременно в левую подхвостовую складку вводили культуральную жидкость с таким же содержанием гипсофилина.

Контролем служили 3 группы незаразн ых телят (по 2 в каждой), которым аналогично вводили контрольный препарат, Результаты учитывали через 24, 48 и 72 ч.

Установлено, что наиболее выраженная реакция проявлялась при введении аллергена в дозах 0,2 и 0,3 мл (реагировали большинство инфицированных ВЛКРС телят).

При введении аллергена в дозе 0,1 мл реагировали 2 из 5 животных, У интактных животных реакция была отрицательной, Таким образом, оптимальной дозой при внутрикожном введении аллергена является 0,2 — 0,3 мл, оптимальными сроками учета реакции — 48 и 72 ч после введения аллергена.

Для определения оптимальной концентрации гипсофилина в аллергене в препарат с содержанием белка 2,0 мгlмл его было внесено 0,5 мг/мл (1 серия), О,б мг/мл (2 серия), 0,8 мгlмл (3 серия), 1,2 мг/мл (4 серия), Активность аллергена каждой серии проверяли на 3 инфицированных ВЛКРС

1734763

5

15

55 животных и на 2 интактных животных. Вводили препарат и учитывали реакцию по та-. кой же методике и в те же сроки, что и в предыдущем опыте.

Аллергическая реакция зарегистрирована у всех инфицированных ВЛКРС животн ых.

Наиболее выраженной она была при введении аллергена с содержанием 0,6 0,8 гипсофилина соответственно.

У контрольных животных при введении аллергена всех серий реакция была отрицательной. Однако введение аллергена (4 серии) с 1,2 содержанием гипсофилина приводило к появлению некроза как у опытных, так и у контрольных животных.

Следовательно, оптимальной концентрацией гипсофилина в аллергене является

0,6 — 08 . Уменьшение ее снижает активность аллергена, а увеличение может вызвать некротические явления, Оптимальные параметры инактивации препарата определяли по биопробе на кроликах, зараженных по схеме, приведенной в табл. 2.

Для определения полноты инактивации аллерген с содержанием белка 2 мг/мл и содержанием гипсофилина 0,8 мг/мл подвергали облучению гамма-лучами в дозах 7, 15, 17, 20 кгр, а также их воздействию при комнатной температуре в течение 12, 24, 48 и 72 ч.

Каждой серией препарата заражали кроликов (по схеме). Наблюдение за кроликами 20 дней. О результатах заражения судили по РИД. Для этого через 20 дн. после заражения брали кровь из уха для получения сыворотки. B качестве диагностикума служил антиген ВЛКРС. Аллерген считали полно инактивированным при отсутствии антител к ВЛКРС в сыворотке крови кроликов, зараженных аллергеном.

Установлено, что полная инактивация аллергена происходит при облучении препарата гамма-лучами в дозе 15 — 17 кгр и выше в течение 24 ч. (У подопытных животных не выявлены антитела к ВЛКРС). Полная инактивация аллергена отмечалась при воздействии гамма-лучами в дозе 7 кгр в течение 48 ч.

Таким образом, оптимальными параметрами инактивации аллергена следует считать воздействие гамма-лучами в дозе 15 кгр, экспозицию 24 ч, Уменьшение этих параметров не приводило к полной инактивации, а увеличение является нецелесообразным, Антигенные свойства аллергенов, полученных по известному и предлагаемому способам, проверяли на кроликах путем внутрикожного его введения в область предплечья в дозе 0,3 мл с интервалом в 5 дней. Через 15 — 20дн. после последнего введения препарата брали кровь для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота в РИД. На каждый препарат по 15 кроликов. По наличию или отсутствию антител к ВЛКРС судили об антигенных свойствах.

Результаты исследований отражены в табл. 3.

Следовательно, предлагаемый аллерген не обладает антигенными свойствами по сравнению с известным препаратом и приемлем для практического применения.

Отдельные опыты проведены по изучению чувствительности и специфичности в сравнении предлагаемого и известного аллергенов.

Для этого в неблагополучном по лейкозу хозяйстве по результатам двукратных серологических исследований (по РИД) подобрана группа телят (13 голов) десятимесячного возраста, положительно реагирующих на лейкоз в РИД, и 3 теленка с сомнительной

РИД. Для контроля брали 5 сероотрицательных телят.

Кожно-аллергическую реакцию ставили путем внутрикожного введения по 0,2 мл в правую подхвостовую складку подопытным и- контрольным животным известного препарата, в левую аналогично вводили предлагаемый препарат, Результаты исследований отражены в табл. 4.

Данные табл. 4 свидетельствуют, что кожно-аллергическая реакция по кожной пробе через 24 ч после введения аллергенов характеризовалась утолщением подхвостовой складки от 13 до 16 мм и от 10 до 13 мм соответственно на предлагаемый и известный аллерген. При этом в первом случае реакция сохранялась 72 ч, во втором — исчезала через 48 ч. Положительный эффект составил 84,6 и 53,8/ соответственно в первом и втором случаях.

Таким образом, на основании проведенных экспериментов было установлено. что полученный препарат является высокоспецифичным и позволяет поставить положительный диагноз на лейкоз, Аллерген для диагностики лейкоза кожной пробой прошел с положительным результатом комиссионную проверку внутри института (акт от 26 июня 1987 г., акт от 28 сентября 1988 r.).

Формула изобретения

Способ изготовления аллергена для диагностики лейкоза крупного рогатого скота, включающий культивирование вируссодержащих клеток в питательной среде с после1734763

Таблица1

Та бл и ца2

20

Таблица 3

Сравнительные данные по изучению антигенных свойств известного и предлагаемого аллергенов 1 дующим съемом урожая клеток, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности целевого продукта, из клеток используют бласттрансформи рова нные лейкоциты краткосрочных культур лейкоцитов периферической крови больных лейкозом коров, в питательную среду, содержащую 10 — 20, эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, добавляют 0,004 — 0,005 мг/мл фитогемагглютинина, снятые клетки гомогенизируют в двух — трех объемах 0,15 М

NaCI, выделяют из них микросомную фрак-. цию методом дифференциального центрифугирования, обрабатывают ее тритоном

5 Х-100 до конечной концентрации 0,5-1,0, сорбируют против нормальных клеточных антигенов, стандартизируют по белку до 2—

3 мг/мл, добавляют гипсофилин до концентрации 0,6 — 0,8 мг/мл и инактивируют

10 гамма-лучами в дозе 15 — 17 кгр в течение

24 — 25 ч.

1734763

13

Таблица 4

Оравнительное испытание предлагаемого,и известного аллергенов в. кожно-аллергической реакции на их активность и чувствительность

Номера пп

Инвентарный номер

Кожно-аллергическая реакция по толщине кожной складки аллерген, приготовленный по предлагаемому способу

1 1982 +

2 0949 +

+ 10 мм, инфильтрация +

+ 13 мм, инфильтрация +

11 мм, инфильтрация +

3 .1995

4 1598

5 мм, без инфильтра-— ции

16 им, инфильтрация

14 мм, инфильтрация

13 мм, инфильтрация +

12 мм, инфильтрация +

6 мм, без инфильтрации

6 мм, без инфильтрации

12 мм, инфильтрация +

12 мм, инфильтрация +

10 мм, незначительная инфильтрация

Ь мм, инфильтрация

6 мм, без инфильт >а-ции

6 мм, бе з инфиль т ра ции

8 мм, незначительная инфильтрация

1О мм, незначительная инфильтрация

14 5 голов от 5 до 7 мм, без инфильтрации от 5 до 7 мм, без инфильтрации

Где + - положительная реакция, - - отрицательная реакция, + -сомнительная реакция.

40

50

Составитель В.Лемеш

Редактор M.Êóçíåöîâà Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М.Максимишинец

Заказ 1763 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

5 1990

6 1979

7 2656

8 6538

9 6589

10 1962

11 1984

12 1986

13 1983

Результат серологических исследований по

РИД

13 мм, инфильтрация

16 мм, инфильтрация

15 мм, инфильтпация

1О мм, инфильтрация

12 мм, инфильтрация

14 мм, инфильтрация

16 мм, инфильтрация

8 мм, инфильтрация

Оценка аллерген, приготов- Оценка реак- ленный по известно- реакции му способу ции