Способ выделения аллергена из биологического сырья
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунохимии. Целью изобретения является повышение специфической активности и растворимости в воде целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что в качестве биологического сырья используют морской гидробионт - кукумарию. Сырье очищают от внутренностей, тушки промывают физиологическим раствором, обрабатывают 10-15 мин при 50 - 70oС, гомогенизируют в 0,9%-ном растворе хлористого натрия. Гомогенат дифференциально центрифугируют, обрабатывают ультразвуком. Затем производят трехкратное замораживание при температуре не выше - 30oС и оттаивание при комнатной температуре с последующим отделением жидкой фракции, содержащей целевой продукт, фильтрованием и лиофилизацией. Общий выход целевого продукта из 100 г сырья составляет 0,7 - 1,0 г. Специфическая активность в 10-14,5 раз и растворяемость в воде выше по сравнению с прототипом.
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунохимии. Цель изобретения повышение специфической активности и растворимости в воде целевого продукта. Способ осуществляют следующим образом. В качестве сырья используют морской гидробионт-кукумарию. Сырую кукумарию очищают от внутренностей, тушку промывают физиологическим раствором, обрабатывают 10-15 мин при 50-70оС, гомогенизируют в 0,9%-ном растворе хлористого натрия (в соотношении сырье: раствор 1:3 соответственно). Полученный гомогенат дифференциально центрифугируют, обрабатывают ультразвуком. Затем производят трехкратное замораживание при температуре не выше -30оС и оттаивание при комнатной температуре (18-20оС) с последующим отделением жидкой фракции, содержащей целевой продукт, фильтрованием и лиофилизацией. Общий выход целевого продукта из 100 г кукумарии составляет 0,7-1,0 г. Специфическую активность аллергена определяют по показателю дегрануляции тучных клеток крыс (ПДТК) (Фрадкин В.А. и др. ), применение реакции непрямой дегрануляции тучных клеток крыс in vitro для характеристики специфической активности неинфекционных антигенов. ПДТК, рассчитанный в отношении клеток, обработанных 25 мкг аллергена, полученного из обработанной при 50 и 70оС кукумарии, равен 0,4
0,07 и 0,350,04 соответственно, что в 10 и 14,5 раз превышает специфическую активность аллергена, полученного по способу-прототипу. Растворимость целевого продукта в воде по показателю экстинции составляет 991,5-99,51,7. П р и м е р. Сырую кукумарию очищают от внутренностей, тушку промывают физиологическим раствором (0,9% NaCl), обрабатывают 15 мин при 70оС, гомогенизируют в 0,9% -ном растворе хлористого натрия в соотношении 1:3 соответственно. Полученный гомогенат дифференциально центрифугируют при 2000 G в течение 15 мин (осадок удаляют), при 25000 G в течение 20 мин (осадок удаляют). Далее надосадочную жидкость вновь центрифугируют при 105000 G в течение 2 ч. Полученный осадок 3 раза промывают 0,9%-ным раствором хлористого натрия, ресуспендируют в 1/2 от исходного объема в дистиллированной воде. Полученную суспензию обрабатывают ультразвуком в течение 2 мин на дезинтеграторе MSE-60 производят трехкратное замораживание при -30оС, а оттаивание при 20оС. Жидкую фракцию, содержащую целевой продукт, отделяют фильтрованием через бумажный фильтр и лиофилизируют. Выход целевого продукта из 100 г сырья 1,0 г, специфическая активность 0,350,04, растворимость в воде 991,5. Полученный аллерген вызывает положительную аллергическую реакцию в дозе 200 мкг у сенсибилизированных людей в тесте повреждения нейтрофилов.
Формула изобретения
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО СЫРЬЯ путем его термической обработки в течение 10-15 мин, гомогенизации, дифференциального центрифугирования, обработки ультразвуком с последующей лиофилизацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности и растворимости в воде целевого продукта, в качестве биологического сырья используют кукумарию, термообработку сырья проводят при 50-70oС, а после дифференциального центрифугирования производят трехкратное замораживание при температуре не выше -30oС и оттаивание при комнатной температуре с последующим отделением жидкой фракции, содержащей целевой продукт, фильтрованием.MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Номер и год публикации бюллетеня: 11-2002
Извещение опубликовано: 20.04.2002
