Способ определения иммуноглобулина j @ е при аллергических заболеваниях
Использование: изобретение относится к области медицины и может использоваться во всех учреждениях Здравоохранения Цель - ускорение способа Сущность иммуноферментный анализ, используемый при диагностике аллергических заболеваний, включает в себя сенсибилизацию планшета аллергеном, нанесение на него сыворотки крови больного и антител, меченных перок: сидэзой хрена против иммуноглобулина Е. Новизна анапиза заключается в обработке планшета перед сенсибилизацией аллергеном 1%-ным раствором глютарового альдегида . Это ускоряет анализ с 4 ч до 40 мин. 2 табл.
СО!ОЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
Ál М" 2
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ l ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ll ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР . К АВтОГСКОМЧ ТВИД!=тГ,г)ЬСтц 7 (46) 07.08,92. ол, 9 (71) Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И,Мечникова (72) M.Â,Ãnèêìaí, Т,А.Прилепина и Н.Б.Сорочинская (56) !у!агЫ М! et. a!, Апп. Д!!его!, 1979, v, 42, К" 2, р. 231-236, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ И!У!МУНОГЛОБуЛИ!-И !9Е ПРИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ Изобретение относится к медицине, а именно диагностике аллергических заболеваний методом иммуноферментного анализа, Известен способ диагностики аллергических заболеваний иммуноферментным анализом, включающий в себя сенсибилизацию полистирольного планшета аллергеном с последу ощим нанесением сыворотки крови больного и антител, меченных пероксидазой хрена против иммуноглобулина Е. Недостатком этого способа является продолжительность анализа (4 ч без учета времени сенсибилизации планшета аллергеном), Цель изобретения — усксрение анализа. Цель достигается тем, что в известном способе диагностики аллергических заболеваний иммуноферментным анализом, включающем в себя сенсибилизацию планшета аллергеном, с последующим нанесением на него сыворотки крови больного, бычьего сыSU 1753421 А1 (57) Использование: изобретение относится к области медицины и может использоваться во всех учреждениях Здравоохранения, Цель — ускорение способа. Сущность: иммуноферментный анализ, используемый при диагностике аллергических заболеваний, включает в себя сенсибилизацию планшета аллергеном, нанесение на него сыворотки крови больного и антител, меченных пероксидазой хрена против иммуноглобулина Е. ! -!овизна анализа заключается в обрабогке планшета перед сенсибилизацией аллергеном 17, -ным раствором глютарового альдегида, Это ускоряет анализ с 4 ч до 40 мин. 2 табл. вороточного альбумина анти Е антител, меченных пероксидазой хрена. Согласно изобретению перед сенсибилизацией аплер?еном планшет обрабатывают 1%-ным раствором глютарового альдегида. Влияние концентрации альдегида глютаровой кислоты на сни>кение времени ана- Л лиза представлено в табл, 1. (Й Обработка планшета глютаральдегидом позволяет сократить время анализа с 4 ч до 40 мин (без учета сенсибилизации планшета д аллергеном), Способ осуществляется следующим образом. Планшеты обрабатываются 1%-ным раствором глютарового альдегида в течение 18 ч при 4ОС. Затем в ячейки обработанных планшетов заливают 200 мкл раствора аплергена в концентрации 10-50 мкг/мл в 0,1 М карбонатном буфере, рН 9,6, Сенсибилизация планшета аллергеном проводится в течении 1 ч при 37ОC. После вытряхивания 175342.1! 1 редста ален ные р6эул ь тяты В табл, 2 свидетельству!От о том, что предлагаемый метод сни>кает Время анализа с 4 ч до 40 мин и повышает чувствительность метода по сравнени!о и известным способом в два и более раз, Таблица 1 Влил н!16 кО! 1центряции ЯльдеГида I г!ЕотарОе!ОЙ кислоты на ччвствительЕ!Ость метода ИФА, %, при Д в ллерген, Выделен II ыL1 ИЗ IhàTÅPII3ft3 2,0 0,2 0 4! 0,1 1,0 0.62. ОЯ2 0,34 0,37 0,48 0,48 ЯЙЦО Еда сбооная 0,0„2 ОЯ2 0,7 0,52 Таблица 2!! Аллерген, вь|деленный из мат613иал3 Извест! !!!е1 метое1 fl еД г38мt>ILh I8T0Q Результаты ИФА, иоказат ли оптической плотност! в:ее!5! анализа 10 мин Результать! ИФА, показатее!и Опти !Вской г!ло гt IOcTlh, в!38Е 1я 3 1 3л и за 4 ч Д 0 Ь1 3 Е!.! Н Я Я П Ы Л Ь МOflOKO Шерсть кошек Шерсть собаки Перхоть лошади Перо ПОДЕуш к!л Х 5к 0,7 0,55 0,5 0,45 0,25 0,55 0,32 2 0 1,8 1,9 1,9 l,8 2,0 Составитель Г,Кр!окова Техред У,Моргентял Редактор Н,Химчук Корректор Т,Палий Заказ 27бб Тираж Подписное ВНИИПИ Государстве!tHÎIo комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, МосК83, Е-35, РауЩская наб„4/5 Производственно-издательский комбин,.г "Патент",, Ужгород, ул.Гагарина, 101 раствора аллергена в планшет ряскапыва!От 200 мкл %-нь!м раствора бычьего сывороточного альбумина на 10 мин при 37 С, Посл8 ОднОкратнОГО Отм ы Ва н ил пля не! !8 га 0002 М ФСБ р! 74 с 005%- HI It t Тв 20 (ФСБ 5 ! В) li кажду!О лунку план встя Вносят в разВедение 1:100 илл 1;2 и инкубируют прЕл 37 С в течеещ 1g мй!1, а затем отмыва!От 5 а4 раз (ФСБ Тв) и добавлгпот соответственно анти или 3HT«k AT, меченные пероксидазой 10 хрена (по 200 мкл), инкубируют 10 мин при 37 С и отмывают 7 раз(ФСБ Тв) и Вносят 200 мкл с бстрат!!ой смеси, состоящей из 20 мкг ортофенилендиамин, растворенных в 20 мл 0,02!Л !1Итратно-фосфатном буфе- 15 ре, р1-! 4,6, Реакц!л!О останавлива!От чер83 5 10 мин, Учет р03К! Еии провод!!тся Н3 спектрофЕзтометре при Длине волнbl 492 il!4, Формула изобретения Сг!Особ определения иммуноглобулина 1gE пдЕ1аллергических заболеваниях, вкл!o I3l0UIIh сенсибилизацию полистирольного план OJ ете! Ялл 6 ре 8ном с посл еду lо щи м Hа не с8н ием сыворотки к!30 В!л оол ьи ОГО и антител ме:ен н ых перо ксидазои хрена про! ив !9 Г, 0 т л и ч а >О щ и Й с я тем, ч! О, с цое!ь!О jcK0pctIvIJt способа; пео8Д сенсибилизЯЦией аллергеном планшет обрабатыва!от 1%ным раствором гл!огарового альдегида.
