Способ диагностики токсикоза у кур

 

Изобретение относится к разделу биологии , касается вопросов экологии и позволяет выявить поражение организма кур различными экологически вредными факторамипромышленными отбросами (фенол, свинец), пестицидами (хлорак), грибными препаратами (фунгицид) и др. Цель изобретения - повышение точности способа на ранней стадии развития токсикоза. Диагноз токсикоза у кур устанавливают на раннем доклиническом этапе на 20 дней раньше, чем известными методами, что позволяет предупредить массовое хроническое отравление кур. В основе методики заключается способность клеток бурсы птиц, пораженных токсикозом, усиливать поглощение определенного красителя (краски Эванса), количество которого определяют по следующей формуле; А (%) 100 - - ,где А - количество поглощенного красителя, в %, К- оптическая плотность исходного раствора синьки Эвзнса в ед. экстинции, Э - оптическая плотность раствора красителя после инкубации с клетками бурсы в ед. экстинции и при значении А 71 % и выше устанавливают токсикоз у птиц. (Л С

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕ СПУБЛИК, „ Ж,„, 1757643 А1 (s )s А 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ОГ1 И(.,ДНИ (Я ()ЯРЕТЕ - Я Я ""E I-ажи щ д

%ИБЛИО

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Изобретение относится к разделу биологии, касается вопросов экологии, а именно проблемы изучения действия токсических факторов, поступающих с пищей.

Целью изобретения является повышение точности способа на ранних стадиях развития токсикоза.

Было выявлено следующее:

1. Необходимость использования клеток бурсы, т.к. установлено, что именно они у птиц с токсикозом обладают наибольшей поглотительной способностью по отношению к красителю синьке Эванcà. Средний показатель поглощения этого красителя у затравленных животных составлял

52+.0,6%

49 +0,5% (21) 4850577/15 (22) 08.08.90 (46) 30.08.92. Бюл. ¹ 32 (71) Латвийская медицинская академия и

Институт биологии Латвийской АН (72) И.М, Ремеэ, С,В. Васильева и Х.M. Век-. слер (56) Ф.M. Орлов. Болезни птиц, Сельхозиздат, 1962, стр. 102-105, 544, И,А. Болотников, Ю,B. Конопатов, Физиолого-биохимические основы иммунитета с/х; Наука, 1987, стр. 122, (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТОКСИКОЗА

У КУР (57) Изобретение относится к разделу биологии, касается вопросов экологии и позволяет BblslBNTb поражение организма кур различными экологически вредными факторами: промышленными отбросами {фенол, свинец), пестицидами {хлорак), грибными препаратами (фунгицид) и др, Цель изобретения — повышение точности способа на ранней стадии развития токсикоза. Диагноз токсикоза у кур устанавливают на раннем доклиническом этапе на 20 дней раньше, чем известными методами, что позволяет предупредить массовое хроническое отравление кур. В основе методики заключается способность клеток бурсы птиц, пораженных токсикозом, усиливать поглощение определенного красителя (краски Эванса), количество которого определяют по следующей формуле; А (%) = 100 К >где

Э .100

А — количество поглощенного красителя, в

%, К вЂ” оптическая плотность исходного раствора синьки Эванса в ед, экстинции, Э— оптическая плотность раствора красителя после инкубации с клетками бурсы в ед. экстинции и при значении А =- 71% и выше устанавливают токсикоз у птиц, 83+ 1,9%, что позволяло использовать его для диагностики токсикоза у.птиц.

Приводим показатели коэффициента

"А" у птиц, затравленных фенолом при условии использования клеток различных органов и тканей: бурса 83 +. 1,9 тимус 53 -5,4% селезенка 55й0,9% лимфатические узлы; мезентериальные 53+0,9% медиастинальные 51 +. 0,8 % периферические (шейные, подключичные и др.) 50 1,0% кровь: лимфоциты лейкоциты

20

50 эритроциты 41 +-0,9%

Методика

Модель токсикоза у пти,< пол .эют путем затравки цыплят в возрасте до 30 дней (после 8-го дня от рождения) токсическим препаратом в концентрации 1/ ll0 ЛДго с пероральным его введением (с кормом) в теченле 10-30 дней. Вводят в корм экологические загрязнители с учетом того, что цыпленок в возрасте до 30 дней потребляет в сутки 30 г корма. Проводят перерасчет количества загрязнйтеля в 1/10 ЛД о на массу потребляемого цыпле .ком в сутки корма. . 5олее высокая концан.-, ация вызывает

:;мерть части особе ; до завершения эксперимента (т.к..быстрее развивается острая интокслкация), т,е, раньше, чем через 10 дней Меньшая концентрацля требует затравки дольше, чем 30 дней л при этом получаются более низкие показатели поглощения красителя синьки Эванса с их значительнblM разбросом.

В процессе экспериментального исследования проводится также изучение поглотительной способности клеток бурсы цыплят контрольной группы, находящихся на полноценном рационе, как опытные, но без добавлений токсического вещества, Пример 1, Для воспроизведения модели токсикоза у птиц B течение ",О дней проводится затравка 2, цыплят грибным препаратом — биологическим пестицидам (фунгицидом) в концентрации 1/10 J1+5Q, т.е, 200 мг вещества на 1 кг корма, учитывая, что цыплята сьедают 30 г корма. 30 контрольных цыплят находятся на том же рационе. но без добавки фунгицида. Затем по 10 птиц из каждой группы декапутируют, готовят взвесь бурсы клеток в концентрации 1

10 кл/мкл, добавляют 0,02% раствор синьки Эванса в соотношении 1:3 т,е. к 0,5 мл взвеси клеток бырсы добавляют 1,5 мл раствора синьки Эванса, инкубируют 15 минут при температуре 17 С, осаждают клетки бурсы, спектрофотометрически при длине волны 700 нм определяют разность оптических плотностей надосадочных жидкостей опытных образцов с контролем (раствор синьки Эванса), Вычисляют количество по" глощенного красителя по формуле:

А — 100 100

К где А — коли ество поглощенного красителя (%).

К вЂ” показатель оптической плотности исходного раствора (в ед, экстинции), Э вЂ” оптическая плотность красителя после инкубации с клетками бурсы (в ед. экстинции), А1 — один из показателей цыпленка опытной группы и равен:

А1(%) 100 0,373 100 — 71 О/

128 О

Полученный результат позволяет говорить о наличии у данной птицы токсикоза.

Показатель белка сыворотки крови у этой птицы составлял 2,67 мг/мл, что не подтверждает наличие токсикоза.

Через 30 дней у оставшихся цыплят группы появляются клинические признаки токсикоза и снижение уровня белка в сыворотке крови, что подтверждает развитие токсикоза у птиц, Пример 2. Для воспроизведения модели токсикоза у птиц 30 цыплят опытной группы подвергают затравке хлораком в течение 10 дней путем введения этого пестицида с кормом в концентрации 1/10 ЛДю, -..е. 500 кг вещества на 1 кг к ðìà, учитывая, что цыпленок сьедает в сутки 30 г корма, Контрольную группу составляет 20 цыплят, находящихся на таком же корме, но без добавок пестицида. Через 10 дней забивают

10, опытных и 10 контрольных цыплят, Готовят взвеси клеток бурсы концентрации 1,5

10 кл/мкл, добавляют 0,02% раствор синьки Эванса в соотношении 1:3, инкубируют

20 минут при температуре 25 С, осаждают клетки бурсы центрифугированием, спектрофотометрически при длине волны 650 нм определяют разность оптических плотностей надосадочных жидкостей опытных образцов по сравнению с контролем (раствор слньки Эванса), вычисляют коллчество поглощенного красителя, составившего 76%.

Полученный результат позволяет говорить о наличии у данной птицы токсикоза, Показатель белка сыворотки крови со- . ставляет 2,71 мг/мл, что не подтверждает наличия токсикоза у птицы.

Диагноз токсикоза был подтвержден через 30 дней, когда у оставшихся 10 цыплят опытной группы появились клинические признаки токсикоза, а также снижение содержания общего белка сыворотки крови по сравнению с контрольной группой цыплят, Пример 3. Для воспроизведения модели токсикоза у птиц 30 цыплятам опытной группы дают с кормом фенол в концентрации 1/10 ЛД5о, т,е. 200 мг вещества на 1 кг корма. Контрольная группа цыплят получает такой же корм, за исключением нитрата натрия. Через 10 дней забивают 10 контрольных и 10 опытных цыплят, готовят взвеси клеток бурсы в концентрации 2 10 кл/мкл, добавляют раствор синьки Эванса

1:3, инкубируют 20 минут при температуре

20 С, осаждают клетки бурсы, спектрофото1757643

Частота выявления токсикоза у птиц методам прототипа и новым способом в ранние и поздние сроки токсикоза у птиц от воздействия экологических загрязнителей, поступающих животным с кормом (зкспериментальные даннЫе) Приме ание: х) похазатели в графе Прототип отражают содержание белка в сыворотке крови в мгlмл tMf2ll) . хк) показатели в графе "Новый способ" отражает показатель поглощения А" в g (гльтп). ххх) достоверность отличия с контролем при p<0,0бг

Составитель Е.Дмитриченко

Техред M.Ìàðãåíòàë . Корректор A.Mîòûëü

Редактор ).Ходакова

Заказ 2951 Тираж . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул.Гагарина, 101

5 метрически при длине волны 650 нм определяют разность оптических плотностей насадочных жидкостей опытных образцов.

Из данных следует, что известным способом диагноз токсикоза у птиц выявлен через 30 дней с момента начала затравки животных экологическими загрязнителями, Данным способом диагноз токсикоза у птиц выявлен через 10 дней с момента начала затравки животных экологическими загрязнителями, т.е. на 20 дней раньше.

Формула изобретения

Способ диагностики токсикоза у кур, вызванного поступлением токсического фактора с кормом, путем биохимического исследования биологической среды, о т л ич а ю шийся тем, что,с целью повышения точности способа на ранней стадии развития токсикоза. в качестве биологической среды используют клетки бурсы, которые выделяют в концентрации 1 ° 10 -2 в10

5 5 кл/мкл, добавляют 0,02)ь-ный раствор синьки Эванса в соотношении 1:3, инкубируют в течение 15 — 20 мин при температуре

17 — 25 С, осаждают клетки бурсы, определя-5 ют спектрометрически при длине волны

650 — 700 нм разность оптических плотностей насадочных жидкостей опытного о6разца по сравнению с контролем, при этом разность количества поглощенного краси10 теля Эванса вычисляют по следующей формулее:

А = 100 — Э 100/Ê э где А — количество поглощенного красителя, %, 15 K — оптическая плотность исходного раствора синьки Эванса, ед. экстинции;

Э вЂ” оптическая плотность раствора красителя после инкубации с клетками бурсьг цыпленка, ед. экстинции, 20 и при значении А = 71% и выше устанавливают наличие токсиКоза у кур.