Способ получения антигена вируса болезни гамборо

 

Использование: биотехнология, вирусология , способ получения высокоактивного специфического антигена для постановки реакции диффузионной преципитации и других серологических реакций при диагностике болезни Гамборо. Сущность изобретения: используют 35-40-дневных цыплят, бурсальный индекс которых составляет не менее 5,0. При этом взятие фабрициевых сумок для выделения вируса болезни Гамборо осущеставляют спустя 90-96 ч после заражения вирусом. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (192 (1 12

yi2s С 12 N 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ИМс/М = 1000, Мт

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ .ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4731485/13 (22) 16.08.89 (46) 15.10.92. Бюл. М 38 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства

P2) А. С. Алиев, Ф. С. Кудрявцев и 3. Д.

Джавадов (56) К. Hirai and S.. Shlmakura. Jmmunadlffusion reaction fo avian Infections fursal

virus. — Avian Dis., 1972, % 4, р, 961-964. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА БОЛЕЗНИ ГАМБОРО

Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано при получении высокоактивного специфического антигена для постановки реакции диффузионной преципитации /РДП/ и других серологических реакций при диагностике болезни Гамборо.

За рубежом известны способы получения антигена для постановки серологических реакций при диагностике болезни

Гамборо путем заражения свободных.от патогенной микрофлоры цыплят /СПФ-цыплят/ 21-дневного возраста, взятия от них фабрициевых сумок, выделения и очистки антигена /1,2,3/, Недостатком указанных способов является использование СПФ-цыплят, стоимость которых не менее чем в 10 раз дороже, чем обычных, промышленных, Целью изобретения является упроще-. ние и удешевление способа получения антигена вируса болезни Гамборо, пригодного для постановки серологических реакций при диагностике этого заболевания.

Поставленная цель достигается тем, что антиген готовят с использованием цыплят (57) Использование; биотехнология, вирусология, способ получения высокоактивного специфического антигена для постановки реакции диффузионной преципитации и других серологических реакций при диагностике болезни Гамборо. Сущность изобретения . используют 35-40-дневных цыплят, бурсальный индекс которых составляет не менее 5,0. При этом взятие фабрициевых сумок для выделения вируса болезни Гамборо осущеставляют спустя 90-96 ч после заражения вирусом. 1 табл. из промышленных стад 35-40-дневного возраста.

Перед заражением, с целью определения пригодности данной группы цыплят для получения антигена, определяют среднее соотношение массы фабрициевой сумки и общей массы птицы /бурсальный индекс/, Для этого из общей группы птиц методом случайной выборки отлавливают 5-10 цыплят, убивают и индивидуально взвешивают цыплят и их фабрициевы сумки, а затем определяют индекс по формуле; где Mc — масса фабрициевой сумки, г, М, — масса тела, г.

На основании индивидуальных индек-. сов Mc/Ìò высчитывают среднеарифметическое значение индекса. Цыплята считаются пригодными для получения антигейа при значении среднеарифметических

ПОКазатЕЛЕй ИМ,/М НЕ нижЕ 5,00.

1768636

20

35

Цыплят убивают через 90-96 часов после заражения, отбирают фабрициевы сумки. гомогенизируют их в 0,001М фосфатно-буферном растворе /рН 7,2-7,4/ в соотношении 1. 1 /вес обьем/, трижды замораживают и оттаивают, обрабатывают ультразвуком с частотой 18000 Гц в течение

1 мин, центрифугируют при 4000 об./мин s течение ЗО мин, Собирают надосадочную жидкость и инактивируют ее.

Инэктивэцию антигена проводят при температуре 37,0 0,5 С в течение б ч при непрерывном помешивании вирусного материала в присутствии димерэтиленимина в конечной концентрации 0,2 .

Полноту инактивации проверяют путем зара>кения чувствительных цыплят ипи куриных эмбионов, Полученный антиген является универсальным и может быть использован в реакции диффузионной преципитации, встречном иммуноэпектрофореэе, иммуноферментном анализе.

Сравнение литературных данных по получению активного антигена вируса болезни Гамборо на СПФ-птице и по предлагаемому способу, с использованием цыплят из промышленных стад, свидетельствует о том, что активность получаемого антигена и в том,и в другом случае одинакова, Так, в исследованиях К,Hlrai et э1, /1/, проведеных на СПФ-цыплятах, максимальная активность антигена вируса болезни Гамборо в реакции диффузионной преципитации составила 1:16-1:32 и активность полученного предлагаемым способом антигена была на том же уровне.

Пример t. В таблице приведены данные, характеризующие зависимость активности преципитирующего актигенэ в фабрициевой сумке больных цыплят от формы и тяжести течения эаболевакия. Как следует иэ приведенных данных, максимальное накопление антигена происходит при остром течении заболевания в возрасте 35-40 дней ка 4 день после заражения.

Пример 2. Как следует иэ данных таблицы, острое течение болезни с высокой степенью накопления антигена в фабрициевой сумке имеет место, если для заражения использовали цыплят с бурсальным индексом не киже 5„0, Тогда как заражение цыплят с бурсальным индексом в пределах

0,91-4,57 не сопровождается клиническими проявлениями заболевания и не позволяет получить активный антиген.

Пример 3. При заражении цыплят

35-40-дневного возраста с бурсальным икдексом не ниже 5,0 наибольшая активность антигена (1:16-1:32) имеет место лишь на 4-й день после заражения, т.е. через 90-96 часов

/см. таблицу/. Тогда как на 3-й день активность антигена составляет 1:8, а на 5-й—

1:2-1:4. Эти данные указывают на необходимость взятия фэбрициевых сумок от больных цыплят через 90-96 ч после заражения, Использование предложенного в качестае изобретения способа получекия антигека. вируса болезни Гамборо позволяет по сравнению с существующими способами снизить затраты на цыплят, из фабрициевых сумок которых получают антиген, не менее чем в 1.0 раз, так как выведение и выращивание свободных от патогенной микрофлоры животных требует применения сложного дорогостоящего оборудования, необходимого для поддержания строгой изоляции от внешней среды.

При этом активность антигена, полученного заявляемым способом, не ниже, чем у известных, Антигек, изготовленный по предлагаемому способу, чувствителен, специфичен, прост в получении, Формула изобретения

Способ получения антигена вируса болезни Гамборо, включающий отбор популяции цыплят, заражение их вирулентным вирусом болезни Гамборо, взятие фабрициевых сумок, приготовление гомогената, обработку его ультразвуком с последующей инактивацией вируса, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, производят отбор популяции цыплят 35...40-дневного возраста с бурсальным индексом, определяемым по формуле:

БИ = — 1000

Мт где Мс — масса фабрициевой сумки, r;

Мт — масса тела цыпленка. г, не ниже 5,0, а взятие фэбрициевых сумок осуществляют спустя 90...96 ч после заражения вирулектным вирусом болезни Гамборо.

1768636

Активность антигена вируса болезни Гамборо в реакции диффузионной преципитеции в зависимости от возраста зараженнык цыплят и сроков взятия патматериала

Составитель Э. Джавадов

Техред М.Моргентал Корректор В. Петраш

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 3622 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5