Способ приготовления стимулятора роста трудно культивируемых анаэробных аспорогенных бактерий

 

Область использования: медицинская микробиология, культивирование анаэробов , микробиологическая диагностика. Сущность изобретения готовят суточный почвенно-микробный перевар (гидролизат) пептонного молока Используют его в качестве закваски пептоно-кровяного молока, включающего снятое молоко с 0,5% пептона , 0,5% хлористого натрия, 12% цитратной крови. Смесь инкубируют в течение суток до типичного свертывания и переваривания . К полученному гидролизату добавляют 1 мас.% глюкозы, 1 мае % лактозы, 1 мас.% растворимого крахмала, 3 мае % сухой среды для контроля стерильности Московского ИИИВС им. И И.Мечникова. Стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 мин. Стимулятор микробного роста применяют в комбинации с обычными плотными питательными средами в соотношении 1:10. сл С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РеспуБлик (505 С 12 N 1/38

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4844862/13 (22) 07.05.90 (46) 15.11.92. Бюл. ¹ 42 (71) Самарский медицинский институт им.

Д.И.Ульянова (72) П.И,Бучин, В.С.Новокшенов и Н.К.Серпокрылова (73) П.И,Бучин, В.С.Новокшенова и Н.К.Серпокрылова . (56) Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии. М., 1950. (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СТИМУЛЯТОРА РОСТА ТРУДНОКУЛЪТИВИРУЕМЫХ АНАЭРОБНЫХ АСПОРОГЕННЫХ

БАКТЕРИЙ (57) Область использования: медицинская микробиология, культивирование анаэробов, микробиологическая диагностика. СущИзобретение относится к области медицинской микробиологии и касается организации рациональной микробиологической диагностики анаэробной неклостридиальной инфекции.

В качестве аналога фигурирует нативная кровь как почти незаменимый стимулятор роста труднокультивируемых аспорогенных анаэробных патогенных бактерий в составе и без того сложных питательных сред.

Прототипом может служить молоко с добавлением перед стерилизацией цельной крови.

Существенным недостатком кровяных сред, кроме термолабильности, является их непрозрачность закрывающая возможность регистрировать рост анаэробных бактерий в толще питательного субстрата при технически простом и экономном культиви. Ж 1776274 АЗ ность изобретения: готовят суточный почвенно-микробный перевар (гидролизат) пептонного молока. Используют его в качестве закваски пептоно-кровяного молока, включающего снятое молоко с 0,5 пептона, 0,5 хлористого натрия, 12 цитратной крови, Смесь инкубируют в течение суток до типичного свертывания и переваривания. К полученному гидролизату добавляют 1 мас. глюкозы, 1 мас.% лактозы, 1 мас.% растворимого крахмала, 3 мас.% сухой среды для контроля стерильности Московского НИИВС им, И.И.Мечникова.

Стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 мин. Стимулятор микробного роста применяют в комбинации с обычными плотными питательными средами в соотношении 1:10. ровании по методу Виньяль-Вейона и побуждающая прибегать к чашечным посевам исследуемого материала на пластинчатые среды с последующим трудоемким культивированием в анаэростатах, для чего требуются еще вакуумные насосы и эаместительные многокомпонентные газовые смеси.

Цель изобретения — повышение ростовых свойств, термостабильности и прозрачности целевого продукта. 1

Сущность изобретения заключается в приготовлении закваски в виде суточного микробного перевара 0,5% пептонного молока после внесения навески почвы, содержащей перфрингенс-бацилла. добавлении закваски в объемном соотношении 1:50 к пептонно-кровяному молоку (молоко с

0,5 мас. пептона и 12 цитратной крови), инкубировании смеси до типичного сверты f776274

50

-55 вания и переваривания, кипячении, отделении жидкой фазы, добавлении в нее глюкозы, лактозы, растворимого крахмала в количестве 1 и 3 мас. сухой питательной среды для контроля стерильности МНИИВС стерилизации.

Пример. Впрок заготавливают пептонное молоко. Для этого к прокипяченному снятому (обезжиренному) молоку добавляют 0,5 мас. пептона, смесь нагревают до

его растворения, разливают мерно в высокие флаконы с ватной пробкой, а также в несколько пробирок высоким столбиком, после чего стерилизуют в автаклаве при 0,5 атм в течение 30 мин.

Поскольку для последующего приготовления суточного гидролизата кровяного молока используют непосредственна почвенную микрофлору, в составе которой обязательно" присутствие протеолитичной перфрингенс-культуры, поскольку для контроля доброкачественности пачвеннога образца в качестве первой технологической операции прибегают к получению почвенной закваски.

С этой целью в серию с пептонным молоком раздельно вносят бактериологической лопаточкой по 0,5 — 1 г разных образцов почвы, взятой с глубиной 1 — 2 см от поверхности (по опыту обычно бывает достаточно трех образцов), Посевы выдерживают при 30 С в течение 18 — 24 ч.

В качестве закваски используют содержимое только той пробирки, где произошло типичное свертывание и переваривание пептоннаго молока (часть пористого свертка казеина подброшена к пробке пробирки, а основная масса представлена мутноватым гидролизатом с почвенным осадком на дне).

Удобно для приготовления закваски пользоваться предварительно отобранным заведомо доброкачественным образцом почвы, сохраняемым в холодильнике.

Перед применением закваски в потребное количество флаконов са стерильным пептонным молоком добавляют по 12 цитратной крови животных или донорской крови людей с просроченным сроком годности и перемешивают.

Закваску в виде молочного гидролизата (надосадочной жидкости) добавляют к кровяному пептонному молоку в обьемном соотношении 1::50. Гидролиз ведут при 30 С в течение 20-24 ч, после чего приподнятый к пробке флакона пористый сверток казеина и фибрина отделяют от стенок сосуда и погружают в перевар, содержимое кипятят в .водяной бане 45 мин для коагуляции неперевариваемых частиц (белковых продуктов), гидролизат отделяют от остатка и просветляют центрифугированием или фильтрованием через бумажный фильтр.

Желаемое качество продукта гарантируется только при 12,— íîì содержании крови в пептонном молоке. поскольку при избытке крови процесс гидролиза подавляется, а при заниженной дозе — перевар бывает обедненным кровяными ростовыми веществами.

На заключительном этапе приготовления стимулятора к приготовленному микробному перевару добавляют по 1 мас. глюкозы. лактазы, растворимого крахмала и

3 мас. порошка сухой среды для контроля стерильности, выпускаемой московским

НИИВС, смесь нагревают в водяной бане при помешивании до полного растворения привнесенных ингредиентов, устанавливают рН 7,2-7,4 и после расфасовки стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 мин, Готовый целевой продукт представляет собой коричневатую прозрачную или слегка опалесциру)ощую жидкость.

Доброкачественность целевого продукта контролируется микробиологическим метадом, а именно, путем параллельного посева при всех равных условиях по способу

Виньяль-Вейона лабораторного штамма бактераида (труднокультивируемая грамотрицательная аспорагенная облигатно анаэрабная бактерия) на обычный гл окозный индикаторный агар и такой же агар, содержащий 10 приготовленного стимулятора.

Критерий доброкачественности целевого продукта — отсутствие или очень скудный рост тест-культуры на первой среде и появление обильного роста не позже трех суток — на второй.

Целевой продукт способен при добавлении в количестве 10 — 1570 к глюкозному индикаторному питательному агару придать последнему свойства оптимальной среды для выделения из исследуемого материала всех патогенных аспарогенных анаэробов, в том числе и по технически простому, экономному методу Виньяль-Вейона.

Формула изобретения

Способ приготовления стимулятора роста труднокультивируемых анаэробных аспорагенных бактерий, включающий использование крови, отличающийся тем, что, с целью повышения ростовых свойств, термостабильности и прозрачности целевого продукта, в 0,5/-ное пептанное молоко вносят навеску почвы, смесь инкубируют в течение 18-24 ч до типичного

1776274

Составитель П. Бучин

Техред М. Моргентал

Корректор.M. Петрова

Редактор

Заказ 4047 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 свертывания и переваривания, полученный гидролизат используют в качестве закваски пептонно-кровяного молока, представляющего смесь пептонного молока и 12 -ной цитратной крови, при этом закваску вносят в объемном соотношении 1:50, затем полученную смесь инкубируют в течение суток до типичного свертывания и переваривания ее, затем кипятят, отделяют жидкую фазу, добавляют в нее глюкозу, лактоэу, крахмал в количестве 1 мас.7 каждого и 3 мас.

5 сухой питательной среды для контроля стерильности МНИИВС и подвергают стерилизации.