Способ дифференциальной диагностики саркоидоза и ревматизма
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при дифференциальной диагностике саркоидоза и ревматизма , протекающих со сходной клинической картиной. Цель изобретения -дифференциальная диагностика саркоидоза и ревматизма на ранних этапах и повышение точности диагностики. Способ осуществляется путем определения в сыворотке крови методом иммуноферментнсго анализа титров А-полисахарида и антител к А-полисахариду стрептококка. При наличии А-полисахарида и при титрах антител к нему выше 1,4 оптич. ед. диагностируют ревматизм; при отсутствии А-полисахарида и при титре антител к А-полисахариду меньше 1,4 оптич. ед. саркомдоз Использование способа позволяет повысить эффективность дифференциальной диагностики, сократить время обследования больного на 2 недели, назначить адекватную терапию в более короткие сроки . сл с
союз соВетских
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВ Е ННОЕ llATEE-ITHOE ВЕДОМСТВО СССP (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2") 4849391/14 (22) 09.07.90 (46) 23.11.92. Бюл. ¹ 43 (71) Московский научно-исследовательский институт туберкулеза (72).B.Н. Адамович, Е.И. Шмидт, Н.А. Шостак и А,P. Шихман (56) Рабухин А.Е. Избранные труды. M., 1983, с. 73, (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ САРКОИДОЗА И РЕВМАТИЗМА (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано при дифференциальной диагностике саркоидоза и ревматизма, протекающих со сходной клинической картиной. Цель изобретения — дифференциИзобретение относится к медицине и может быть использовано при дифференци альной диагностике саркоидоза и ревматизма, протекающих со сходной клинической картиной. Дифференциальная диагностика саркоидоза и ревматизма остается до настоящего времени сложной задачей ввиду сходства клинико-рентгенологической картины двух заболеваний (Рабухин А.Е, и др„1975; А.Г. Хоменко, О. Швайгер, 1982; В.Н, Адамович и др, 1988). Оба заболевания могут проявляться артралгиями, артритом, узловатой эритемой, плевритом, перикардитом, поражением проводящей системы сердца, лимфоаденопатией. И саркоидоэ, и ревматизм могут протекать с периодами обострения и ремиссии. Морфологической основой как саркоидоза, так и ревматизма является гранулема, Ошибочность диагностики саркоидоза составляет 61 — 73 (Филиппов В.П. и ,щх, 1982; B.Н. Адамович, С,Е, Борисов, „„5U„„1777082 А1 альная диагностика саркоидоза и ревматизма на ранних этапах и повышение точности диагностики. Способ осуществляется путем определения в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа титров А-полисахарида и антител к А-полисахариду стрептококка. При наличии А-полисахарида и при титрах антител к нему выше 1,4 оптич. ед, диагностируют ревматизм; при отсутствии А-полисахарида и при титре антител к А-полисахариду меньше 1,4 оптич. ед, саркоидоз. Использование способа позволяет повысить эффективность дифференциальной диагностики, сократить время обследования больного на 2 недели, назначить адекватную терапию в более короткие сроки, 1985). Частота поражения легких при ревматизме достигает 44 (, (Ясиновский М,А, и др„ 1969; Саксонов С.И,. и др., 1982). Известен способ диффенциальной диагностики ревматизма путем определения антистрептолизина-0 (АСЛ-0 в сыворотке - крови (Рабухин А,Е. Избранные труды. М., 1983, с, 73). Однако указанный способ имеет ряд существенных недостатков: накопившийся международный опыт, а также данные отечественных исследователей свидетельствуют о том, что АСЛ-О 23 — 56;ь обследованных дает ложноположительные и/или ложноотрицательные и/или ложноотрицательные результаты, что значительно снижает его диагностическую ценность. Так, АСЛ-0 выявляется в повышенном титре при таких заболеваниях, как анкилозирующий спондилоартрит, туберкулез и др. По данным ВОЗ, он был выявлен у 207, здоровых школьников вне связи с перенесенной стрептококковой инфекцией и при 1777082 фичным для ревматизма. Кроме того, 10 недостатком данного способа дифференци- 30 35 рида и антител к нему, позволяющее выя-.40 ; отсутствии каких-либо проявлений ревматизма, В То же время примерно у половины больных ревматизмом титр АСЛ-0 остается нормальным. что не позволяет считать его специфическим и адекватным тестом диагностики ревматизма. Возможно, это связано с тем, что АСЛ-0 отражает иммунный ответ организма лишь на внеклеточный ан- ° тиген стрептококка, не являющийся специальной диагностики является тот факт, что ACJl-0 циркулирует в крови в течение сравнительно короткого промежутка времени, что не позволяет использовать его при поздних проявлениях ревматизма, диагностика которых особенно сложна в связи с частым субклиническим течением процесса. А-полисахарид стрептококка, в отличие от АСЛ-О, является группоспецифическим антигейом стрептококка, отражающим иммунный ответ на антиген клеточной стенки стрептококка. что, по данным ВОЗ. (1989), имеет непосредственное отношение к патогенеэу ревматизма и позволяет рассматривать показатели сенсибилиэации к полисахариду как специфические для ревматизма, что подтверждается многочисленными исследованиями. Преимуществом данного способа является также длительная персистенция антигенов клеточной стенки (А-полисахарид) в крови, что позволяет диагностировать ревматический процесс, развившийся в поздние сроки после перенесенной стрептококковой инфекции, и благодаря этому кардинально улучшить дифференциальную диагностику с саркоидозом. Комплексное определсние А-полисахавить различные стороны иммунного ответа на стрептококк. является черезвычайно важным для своевременной диагностики различных проявлений ревматизма и решает важную задачу дифференциальной диагностики ревматизма и саркоидоза, Целью изобретения является ранняя диагностика и повышение точности диагностики заболеваний. Способ осуществляется следующим oGразом, Забор крови производится из кубитальной вены в обьеме 5 мл. Далее проводится исследование сыворотки крови методом иммуноферментного анализа. Подбор оптимальных концентраций сорбируемых антигенов осуществляется в прямой модификации ИФА с использованием иммуноглобулиновых фракций антисывороток к А-полисахариду и клеткам стрептококка группы А типа M 29, меченных пероксидазой хрена. Для сорбции всех антигенов использовали 96-луночные полистироловые плашки (Dynatech, Швейцария). А-полисахарид сорбировали в ФБС в интервале концентраций от 0,1 до 20 мкг/мл в течение 18 ч при 4 С. После окончания сорбции плашки промывали Твин-ФБС и в л.унки вносили соответствующие антитела, меченные пероксидазой хрена, в концентрации 250, нг/мл по пероксидазе хрена. (После промывки плашек с сорбированными микробными клетками в лунки добавляли 20% нормальную человеческую сыворотку в Твин-ФБС и инкубировали 2 ч при 37 С. Данный этап проводили для блокирования возмо>кно присутствующих на поверхности клеток рецепторов к Гс-фрагменту IgG). Каждую пробу исследовали параллельно в трех лунках, Инкубацию проводили при 37 С в течение 2 ч. Сыворотки разводили Твин-ФБС. После инкубации и отмывки плашек в лунке вносили по 0,2 мл соответствующих вторичных антител, меченных пероксидазой хрена. Концентрация вторичных антител, определяемая по пероксидазе хрена, составляла 500 нг/мл, Инкубацию проводили при 37 С в течение 2 ч, После инкубации и отмывки в лунки вносили "субстрат. — 0,35% раствор о-фенилендиамина с 0,006% Н Ог в 0,1 М цитратно-фосфатном буфере, рН 5,0, и инкубировали 30 мин при 4 С в темноте, Реакцию останавливали добавлением в каждую лунку 0,1 мл 4 M серной кислоты. Оптическую плотность продукта пероксидазной реакции определяли при длине волны 490 нм на вертикальном абсорбциометре MR или MR-600 (Denatech, Швейцария). Максимальные показатели оптической плотности продукта пероксидазной реакции отмечались при сорбции А-полисахарида — 5 мкг/мл. Эти концентрации указанных антигенов в дальнейшем были использованы во всех клиника-иммунологических исследованиях по определению антител. Оптимальное фиксированное разведение при определении антител к А-полисахариду — 1;1000. При определении уровня антител к используемым антигенам все сыворотки от индивидуальных больных в динамике исследовали на одной плашке, одновременно на каждой плашке определяли уровень антител в эталонной сыворотке (эталоном 5 служил пул 50 донорских сывороток). Оценку уровня антител, определяемых в ИФА, проводили с использованием двух показателей: абсолютного и относительного, Абсолютный показатель уровня антител исследуемой сыворотки рассчитывали из от1777082 ношения оптической плотности продукта пероксидазной реакции исследуемой и эталонной сывороток, взятых в одинаковом фиксированном разведении. Верхней границей нормального уровня антител считали такой уровень, ниже которого определялись 80 — 90 Д абсолютных показателей уровня соответствующих антител контрольной группы здоровых доноров. Относительный показатель уровня антител определяли как процент лиц, у которых абсолютный показатель превышал верхнюю границу нормы. Для выявления циркулирующих антигенов стрептококка группы А в сандвич-системе ИФА были использованы иммуноглобулиновые фракции кроличьих антисывороток к А-полисахариду стрептококка группы А, Оптимальной концентрацией сорбированных иммуноглобулинов была концентрация 5 мкг/мл. Оптимальным фиксированным разведением при определении А-полисахарида было выбрано разведение 1:10. При опред.:лении циркулирующих антигенов стрепток окка все сыворотки от индивидуальных больных в динамике исследовали на одной плашке, параллельно на каждой плашке определяли уровень соответствующих циркулирующих антигенов в эталонной сыворотке (эталоном служила сыворотка больного ревматизмом с детектируемыми антигенами стрептококка). Оценку уровня циркулирующих антигенов осуществляли по двум показателям: абсолютному и относительному. Абсолютный показатель уровня антигенов определяли из отношения оптической плотности продукта пероксидаэной реакции исследуемой и эталонной сывороток, взятых в одинаковом разведении, Средний абсолютный показатель уровня антигенов рассчитывали как среднеарифметическое абсолютных показателей больных, у которых были BbIявлены соответствукш !ие циркулирующие антигены. Относительный показатель уровня антигенов определяли как процент лиц, у которых выявлялись соотвествующие антигены. При отсутствии А-полисахарида в сыворотке крови диагностируют саркоидоэ, а при наличии А-полисахарида диагностируют ревматизм. При титре антител к Л-полисахариду, большем, чем 1,4 оптич.ед., диагностируют ревматизм, а при сохранен 1и нормы диагностируют саркоидоз. Способ поясняется следчющими примерами. Пример 1. Больная К., 28 лет (и. б hL 6021). поступила в клиник с жалобами на 50 предлагаемому способу А-полисахарид стрептококка в сыворотке крови не обнаружен. Антитела к А-полисахариду 1,04 оптич.ед.. Диаг остирован саркоидоз 1. Диагноз впоследствии подтвержден морфологически. Предлагаемым способом обследованы 116 больных, нуждавшихся в проведении дифференциального диагноза между саркоидозом и ревматизмом, Из них у 53 больных диагностирован саркоидоз, у 63 больных— 40 сердцебиение, боли в суставах, субфебрпль нчю температуру. С 14 лет страдает ревматизмом, митральным пороком сердца. Состояние при поступлении удовлетворительное. В сердце аускультативная картина сочетанного митрального порока, недостаточности аортального клапана. В легких— дыхание с жестким оттенком, Небольшое увеличение подмышечных и передне-шейных лимфоузлов. Рентгенологически: равномерное усиление легочного рисунка. Оба корня умеренно расширены, несколько анфильтрированы. В анализе крови СОЭ— 30 мм/ч, Увеличение теней корней легких, увеличение периферических лимфоузлов обусловили необходимость исключения саркоидоза. Проведено исследование крови по предложенному способу. А-полисахарид— ++++; антитела к А-полисахариду стрептококка 3,20 оптич. ед. Диагностирован ревматизм в активной фазе. Правильность установленного диагноза подтверждена эффективностью антиревматической терапий и дальнейшим динамическим наблюдением за течением заболевания, Пример 2. Больная М., 47 лет (и.б, N 1423). поступила в клинику с жалобами на сухой кашель, субфебрильную температуру, периодические боли в грудной клетке. В детстве перенесла полиартрит,,расценивашийся как ревматический. В 1988 г, появились боли в грудной клетке, субфебрильная температура, сухой кашель. Лечение антибиотиками без эффекта. Флюорографически выявлено расширение теней корней легких. При поступлении состояние удовле гворительное. В легких везикулярное дыхание. Короткий систологический шум а верхушке сердца, На рентгено- и томограммах грудной клетки; усиление легочного рисунка в прикорневых отделах билатерально, в основном за счет сосудистого компонента, увеличение всех групп внутригрудных лимфоузлов. B кг инических анализах крови и мочи отклонений от нормы не выявлено. С учетом данных анамнеза проводился дифференциальный диагноз саркоидоза и ревматизма. По 1777082 новного заболевания, сократить сроки пребывания больного в стационаре до уточнения диагноза на 2 недели, уменьшить общую длительность стационарного лечения и улучшить прогноз эа счет правильно назначенного лечения. Составитель М, Иванов Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Н, Ревская Редактор Заказ 4120 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ревматизм. Точность диагностики была подтверждена клинико-морфологическими данными. А-полисахарид стрептококка был обнаружен описанным выше способом у 92,2% 5 больных ревматизмом, причем у 23,6% — в высоком титре, При саркоидозе у 81,1 g больных А-полисахарид не был обнаружен, а в высоком титре он не был обнаружен ни у одного- 10 больного саркоидозом. При сравнении результатов исследования антител к. А-полисахариду у больных саркоидозом и ревматизмом получены достоверные различия: 1,94+ 0,17 оптических 15 единиц при ревматизме и 1,03+ 0,03 оптических единиц при саркоидозе (р < 0,001). Предлагаемый способ позволяет провести дифференциальный диагноз саркоидоэа и ревматизма с высокой степенью достовер- 20 ности (957ь) без осложнений для больного, помогает правильно назначить лечение осФормула изобретения Способ дифференциальной диагностики саркоидоза и ревматизма путем иммунологического исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и ранней диагностики, в сыворотке крови с помощью иммуноферментного анализа определяют наличие А-полисахарида стрептококка и титры антител к А-полисахариду и при наличии А-полисахарида стрептококка и при титре антител к нему выше 1,4 оптических единиц диагностируют ревматизм, а при сохранении показателей нормы диагностируют саркоидоэ.
