"питательная среда "церебробакт" для культивирования лактобацилл"

 

Использование: биотехнология, питательная среда, культивирование лактобацилл. Сущность изобретения: обезжиренную, обезвоженную мозговую ткань крупного рогатого скота , являющуюся отходом при получении медицинского препарата ЛипоИзобретение относится к биотехнологии , микробиологической промышленности, в частности к созданию новой питательной среды (ПС), предназначенной для выращивания лактобацилл. Целью.изобретения является унификация ПС, упрощение технологии изготовления . Указанная цель достигается описываемой питательной средой, которая в качестве церебрин, подвергают легкому ферментативному гидролизу медицинским панкреатином или гомогенатом поджелудочной железы при 40-42°С в щелочной зоне рН 7,6-8,0 в течение 4-5 сут в присутствии хлороформа с последующим прогреванием при 90°С в течение 5-10 мин, осаждением из надосадочной жидкости неразгидролмзованных белков в изоэлектрической точке с последующим высушиванием препарата. Полученный препарат - основа питательной среды Церебробакт для культивирования лактобацилл, при следующем соотношении входящих в нее компонентов, мас.%: лактоза 0,95-1,00; хлористый натрий 0,45-0,50; агар-агар 0,065-0,070; ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота с содержанием аминного азота от 100 до 140 мг % остальное. Среда проста в изготовлении, содержит доступные отечественные компоненты и не требует дорогостоящего оборудования для своего производства, обеспечивает рост и развитие лактобацилл, обладает селективными свойствами подобно эталонной среде МРС. 2 табл. питательной основы содержит стандартный компонент - гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота (КРС) и состоит из следующих компонентов, мас.%: ел с ,00 О 00 Q О 00 со Лактоза Хлористый натрий Агар-агар Ферментативный 0.95-1.00 0,45-0,50 0,065-0.070

сolo3 сoBf- l(.ких

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУВЛИК (я)з С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОспАтент сссР)

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Лактоэа

Хлористый натрий

Агар-агар

Ферментативный

0,95-1,00

0,45-0,50

0,065-0,070 (21) 4943686/13 (22) 16.05.91 (46) 07.04.93. Бюл, N 13 (71) Научно-производственный центр медицинской биотехчологии (72) P.È.Èñêàíäåðîâ, И,Г,Ермишина, Т.Ф.Власова, Н.Н.Лизько, Б.Б.Егоров, Г,А.Ермолин, Н.Ш.Сасунов, А.оглы Сабзали, В.B.Ìåñàåâ и Н,А.Попова (73) Научно-производственный центр медицинской биотехнологии (56) 1. De Man P.S., Rogosa M„Sherpa М.Е, J. Appt. Bact„1960, N 23, р. 130-135.

2. Ленцнер А.А. Лабораторное дело, 1967, ¹ 5, с. 301-302, 3. Лиэько Н.Н., Шилов В,М, Лабораторное дело, 1979, № 7, С. 430-433. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА "ЦЕРЕБРОБАКТ" ДЛЯ КУЛ ЬТИВ И РОВАН ИЯ ЛАКТОБАЦИЛЛ (57) Использование: биотехнология, питательная среда, культивирование лактобацилл. Сущность изобретения: обезжиренную, обезвоженную мозговую ткань крупного рогатого скота, являющуюся отходом при получении медицинского препарата "ЛипоИзобретение относится к биотехнологии, микробиологической промышленности, в частности к созданию новой питательной среды (ПС), предназначенной для выращивания лактобацилл.

Целью изобретения является унификация ПС, упрощение технологии изготовления.

Укаэанная цель достигается описываемой питательной средой. которая в качестве

„„HJ„„1808008 АЗ церебрин", подвергают легкому ферментативному гидролизу медицинским панкреатином или гомогенатом поджелудочной железы при 40-42 С в щелочной зоне рН

7,6-8,0 в течение 4-5 сут в присутствии хлороформа с последующим прогреванием при

90 С в течение 5-10 мин, осаждением из надосадочной жидкости неразгидролизованных белков в изоэлектрической точке с последующим высушиванием препарата.

Полученный препарат — основа питательной среды "Церебробакт" для культивирования лактобацилл, при следующем соотношении входящих в нее компонентов, мас.%: лактоsa 0,95-1,00; хлористый натрий 0,45-0,50; агар-агар 0,065-0,070; ферме нтативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота с содержанием аминного азота от 100 дс 140 мг о 0cTallbHo8. Среда проста в изготовлении, содержит доступные отечественные компоненты и не требует дорогостоящего оборудования для своего производства, обеспечивает рост и развитие лактобацилл, обладает селективными свойствами подобно эталонной среде MPC. 2 табл, питательной основы содержит стандартный компонент — гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота (КРС) и состоит иэ следующих компонентов, мас.,;

1808008

В пределах 5,0-5,5

0,45-0,50

0,9-1,0 тав питательной

20,0

21,3

15,3

16,5

13,3

9,8

1 1,5

19,5

17,8

18,5

298

19,8

16,3

21,2

24,5

17,2

14,4

8,9

37000-24000

5500-6000 рН 1 -ного раствора

Растворимость, %

Массовая доля влаги, Массовая доля общего азота, 6,2-7,2

Не менее 5 0

Не менее 2.5-3 0

В пределах 10-11 гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани КРС при содержании аминного азота от 100 до

140 Остальное

Гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани KPC получают путем ферментативного расщепления белоксодержащего сырья (отход производства медицинского препарата "Липоцеребрин") медицинским панкреатином, взятым в количестве 2,0 об., или гомогенатом поджелудочной железы свиньи (10-15 об. ) при

40-42 С в щелочной зоне рН 7,6-8,0 в течение 4-5 сут в присутствии хлороформа с последующим прогреванием биомассы при

90 С в течение 5-10 мин, осаждением высокомолекулярных соединений в изоэлектрической точке белка. фильтрованием препарата и высушиванием. ,Пример 1, Гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани KPC получают путем ферментативного расщепления белоксодержащего сырья, разведенного дистиллированной водой 1;25, медицинским панкреатином (М РТУ 42594684) или гомогенатом поджелудочной железы свиньи, взятыми в количестве 2 об, или

10-15 об. соответственно, процесс ведут при 40-42 С в щелочной зоне рН 7,8-8,0 в течение 4-5 сут в присутствии хлороформа (3 об,%), Гидролиз прекращают прогреванием при 90 С в течение 5-10 мин, при этом коагулируют и выпадают в осадок неразгидролиэованные белки. Оставшиеся в надосадочной жидкости высокомолекулярные соединения осаждают в изоэлектрической точке белка, надосадочную жидкость фильтруют и подвергают высушиванию в потоке горячего воздуха в аппаратах, используемых при получении сухого молока, Режим высушивания (на входе 150-160 С и на выходе 90-95 С) обеспечивает получение сухого препарата с остаточной влажностью менее 2,5-3 Д, Полученный ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани KPC имеет следующие физико-химические характеристики:

Массовая доля аминного азота, ф, Аминный коэффициент

N аминный

N общий

Коэффициент протеолиза

N остат.

N общ.

Аминокислотный сос основы (в 1 р-ре):

Изолейцин

"5 Лейцин

Валин

Треонин

Серин

Метионин

20 Тирозин

Фенилаланин

Цист(е)ин

Аспарагиновая к-та

Глутаминовая к-та

25 - Пролин

Глицин

Аланин

Лизин

Гистидин

30 Аргинин

Триптофан

Полипептиды (молек.)

Вес rio электрофорезу, Дал

Пример 2.

Подобрана концентрация ферментативного гидролиза обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани КРС, обеспечивающая

40 оптимальные условия жизнедеятельности лактобацилл. Результаты исследований представлены в табл.1.

Используемые концентрации лактозы, 45 хлористого натрия и агар-агара являются общепринятыми для ПС, предназначенных для культивирования лактобацилл (3).

Изменение концентрации этих ингредиентов в указанных в формуле изобретения пределах не влияет на ростовые свойства данного вида бактерий.

Таким образом, ростстимулирующие свойства питательной среды "Церебробакт" на питательной основе (ПО) из фермента55 тивного гидролизата обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани KPC сохраняются на необходимом уровне для нормального роста и развития лактобацилл при концентрации аминного азота от 50 до 140 мг%, Оптимальная концентрация 100-140 мг .

1808008

Пример 3. Изучение возможности выращивания различных штаммов

В.blfidum (производственный шт. М 1, 791, ЛВА-3) в питательной среде "Церебробакт" представлено в табл.2.

Таким образом, из данных табл. 2 следует, что ПС "Церебробакт непригодна для выращивания различных штаммов бифидобактерий, следовательно, она проявляет селективные свойства при культивировании лактобацилл.

Пример 4, Проведено изучение влияния концентрации ПО на культуральноморфологические признаки штамма

Lactobacillus plantarum 8-РАз, Показано, что при различных концентрациях ПО от 50 до

140 мг (, сохраняются типичные культурально-морфологические особенности данного штамма лактобациг л: грамположительные, в основном короткие толстые прямые палочки с закругленными концами, расположенные беспорядочными скоплениями и отдельными короткими цепочками по 3-5.

При выращивании в полужидкой ПС при

37,5-38 С микроб вызывает в первые сутки неравномерное помутнение, через 2-3 сут микробы образуют кометообразные колонии без явного выделения "стерильной зоны". В среде с концентрацией аминного азона в ПО от 50 до 80 мг, колонии имеют меньшие размеры, но типичные морфологи. ческие характеристики сохраняются. в

Таким образом, снижение концентра. ции аминного азота в ПО до 50 мг не влияет на морфологические характеристики лактобацилл.

Предлагаемая селективная питательная среда "Церебробакт" содержит стандартизованную питательную основу, являющуюся отходом при получении медицинского препарата "Липоцеребрин", что позволяет производить ее в достаточно больших количествах (десятки TokH), унифицируя условия получения медицинского

5 препарате лактобактерина, Предлагаемая питательная среда проста в изготовлении, содержит доступные отечественные комйоненты и не требует дорогостоящего оборудования для своего из10 готовления, обладает селективными свойствами подобно эталонной среде MPC.

0,95-1,00

0,45-0,50

0,065-0,070

Лактоза

Хлористый натрий

Агар-агар

Ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота с содержанием аминного азота от 100 до

140 мг

35

Остальное

Формула изобретения

15 - Питательная среда для культивирования лактобацилл, содержащая питательную основу иуглевод,отл ич а ю ща я с я тем, что, с целью унификации и стандартизации среды и упрощения технологии ее приго20 товления, в качестве питательной основы она содержит ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной: мозговой ткани крупного рогатого скота с содержанием аминного азота от 100 до 140 мг7ь, из

25 углеводов — лактозу, и дополнительно содержит натрий хлористый и агар-агар при следующем соотношении компонентов, мас.,(,:

1808008

Таблица 1

П р и м е ч а н и е: Состав. ПС "Церебробакт", мас. :

Ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозгбвой ткани с конечной концентрацией аминного азота от 50 до 140 мг

Лактоза 0,975

Хлористый натрий 0,475 э Arap-агар 0,07

Таблица 2

П р и м е ч а н и е: Состав ПС "Церебробакт" в этом и последующих примерах

4 идентичен примеру 2 с концентрацией аминного азота

s ПΠ— 140 мг, Составитель Р,Искандеров

Техред М,Моргентал Корректор П.Гереши

Редактор Л.Волкова

Заказ 1394 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изЪбретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина. 101 с