Способ получения дисперсии полипептидов для интраназольного применения

 

Область использования: изобретение относится к области медицины. Цель: предупреждение раздражающего действия. Сущность изобретения: активное вещество - полипептид диспергируют в разбавителе , таком как жирное масло, в присутствии фосфолипида такого как фосфатидилхолин (лецитин), 7 з.п.ф-лы, 5 табл.

(1 (2 ( (3 (3 (4 (7 (7

С (5.12.87)

) 15.08.88

) 6042/86; 3700/87

) 16.12.86; 16.07.87

)DK

) 30.08.93. Бюл, N 32

) Ново Нордиск А/С (DK)

) Филип Эдгар Хансен и Андерс Роберт ренсен (ОК)

) Патент GB М 1527605, . А 61 К 37/26, 1978.

ПОЛИПЕПТИДОВ ДЛЯ ИНТРАНАЗАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ (57) Область использования: изобретение относится к области медицины. Цель: предупреждение раздражающего действия.

Сущность изобретения: активное вещество — полипептид диспергируют в разбавителе, таком как жирное масло, в присутствии фосфолипида такого как фосфатидилхолин (лецитин). 7 з,п.ф-лы, 5 табл. с с д за к н и н т н р п э и лу и к н м и

Настоящее изобретение относится к особу получения новых фармацевтичех композиций (форм), предназначенных я применения через нос.

Предпосылки настоящего изобретения.

В то время, как неагрессивное применее препарата прямокишечным или стомаческим способом является беэусловно иболее удобным для пациента, парентельное высвобождение лекарственных епаратов является в общем случае самым фективным, В частности, лекарственные епараты, которые дезактивируются в жеочно-кишечном тракте или слабо в нем глощаются, и лекарственные препараты, орые подвергаются широкому вовлечею в гепатический метаболизм после стотического применения, в общем случае именяются парентерально.

Имеются очевидные неудобства, свяные с парентеральным применением лерственных препаратов, такие, как обходимость в стерильных средствах для высвобождения, боли и раздражения, вызываемые повторными инъекциями, и потенциальный риск внесения инфекции. Таким образом, ощущается необходимость в альтернативных средствах доставки лекарственных препаратов, равных по эффективности парентеральному применению в том смысле, чтобы обойти первый цикл процесса метаболизма. Одной такой потенциально многообещающей альтернативой является применение лекарственных препаратов через нос. Однако, как и в случае с другими способами "неагрессивных" применений медикаментов, биовосприимчивость препарата после применения в нос в значительной степени не предсказуема и зависит, среди прочего, от химической природы этого препарата.

Так, известно, что прогрестерон и пропранолол абсорбируются из носовой полости таким образом, что при этом обеспечиваются такие их концентрации в крови, которые почти равны концентрациям при внутривенном введении, 1837869

Известны также другие примеры композиций для введения через нос фармацевтически активных агентов с молекулярными весами до и римерно 1 кД, например, композиции, содержащие зргопептидные алкалоиды, растворенные в водном зтаноле, применяемые в форме аэрозолей (патент

Швейцарии М 636011), соли фармацевтически активных аминов с жирными кислотами (патент Канады N. 988652) и катехоламин, суспендированный в жирной кислоте (или сложном эфире), эмульгируемой полиоксиэтиленом (Европейская патентная публикация N 0160501 А).

В последние десятилетия были предложены самые разнообразные (главным образом сиптетические) полипептидные лекарственные препараты. В общем случае, полипептиды применяли парентерально изза неполного поглощения в пищеварительном тракте и из-за их нестабильности в нем.

В этом видимо заключается причина, почему в конкретных исследованиях достатки лекарственных препаратов через нос (в частности полипептидов) в течение последних лет усилия были интенсифицированы. Было установлено, что в то время, как некоторые полипептиды меньших размеров (до примерно 10 аминокислотных остатков) могут вполне эффективно поглощаться через нос из простых водных композиций, в общем случае биовосприимчивость при применении через нос полипептидов больших размеров становится неполной и нестабильной, причем этот эффект возрастает с увеличением молекулярного веса (см.обзор Л.Иллума: АгсЬч for Pharmaci og

Chemi, т.94 (1987), c . .127-135).

С тем, чтобы преодолеть те недостатки, которые возникают, в частности, при доставке через нос лекарственных препаратов, содержащих полипептиды больших размеров, были предложены дополнительные добавки, самые разнообразные биосовместимые агенты, промотирующие поглощение, или так называемые усилители.

В этой связи следует указать Европейскую Патентную Публикацию Мг 0111841 А, в которой описан эффект усиления поглощения желчной кислоты, и патент США М

4476116, в котором предложено использование хелатообразующих агентов таких, как

ЭДТК.

Композиции для применения через нос, предназначенные для доставки инсулина, были бы, разумеется в высшей степени предпочтительными для пациентов-диабетиков, зависящих от инсулина, по сравнению с доступными в настоящее время

55 агентам такие, как фосфолипиды. Однако, согласно данным, приведенным в патенте

Великобритании М 1527605 (см,выше), фосфолипиды в широко распространенной смеси лецитинов с длинными цепями не проявляют усиливающее поглощение действием в инсулиновых композициях для применения через нос.

В настоящее время неожиданно было установлено, что фосфатидилхолины и фосфатидилэтаноламины со средней длиной цепи значительно ускоряют поглощение через нос фармацевтических активных соединений, в частности, полипептидов, не причиняя при этом врера или раздражений носовой слизистой оболочки. Поглощение через нос также увеличивается при использовании форм, в которых жировое масло, например, растительное масло смешивают с фосфолипидом.

Краткое описание изобретения, Предлагается способ получения композиции для применения через нос, содержащей фармацевтически активный агент и формами для парентерального применения при условии, что инсулин достаточно эффективно поглощается из носовой полости и с постоянной скоростью. Для таких композиций были разработаны самые разнообразные агенты, увеличивающие поглощение, главным образом поверхностно-активные агенты.

В патенте Великобритании М 1527605

10 были предложены. ионные, а также неионные поверхностно-активные агенты-усилители, такие, как соли желчной кислоты и простые эфиры высших полиоксиэтиленовых спиртов в то время, как применение

"5 специального простого эфира высшего полиоксиэтиленового спирта, а именно, полиоксиэтилен-g (лаурилового простого эфира, описано в статье P.Çaëöìaía и др., Nev

England J,of Med., т.312 (1985) с,1078-1084).

20 Другие "усилители", например, соли тауродигидрофузидовой кислоты, предложены в патенте США N 4548922.

Химическая структура усилителей, известных до настоящего времени, значительно отличается от структуры известных составляющих клеточных мембран, включая тех, что содержатся в носовой полости. Это свойство может быть служит объяснением их тенденции вызывать раздражения носо30 вой полости или даже постоянное воспаление носовой оболочки, в частности, при хроническом применении.

По этой причине можно было бы рассмотреть использование "усилителей" бо35 лее родственных другим физиологически встречающимся поверхностно-активным

1837869 стему, увеличивающую поглощение, соржащую по крайней мере один фосфолид общей формулы (i):

Н-СН-0R (H-0R"

Н-СН- О-P (Pj (ОК)-д н и д и в н с с

Предпочтительные варианты реализанастоящего изобретения и его подробописание.

Предпочтительный подкласс соединеформулы (I) образуют соединения, в корых R и R" каждый является илкарбонилом.

Еще один предпочтительный подкласс аэуют соединения формулы (i), в которой представляет 2-(триметиламмонио)этил, соединения известны под названием итины, Еще более предпочтительный класс образуют соединения формулы (I), оторой R и R" каждый представляет илкарбонил или алкил, содержащий от мерно 4 атомов углерода, в предпочтиьном варианте до не более 12 атомов ции нийи то ал о б ал пр те оторой R и R", которые могут быть как инаковыми, так и различными, каждый бирают иэ группы, состоящей из водоро, алкила, алкенила, алкилкарбонила, алкелкарбонила и алкадиенил-алкатриенили алкатетраенилкарбонила, содержащего

14 атомов углерода (общее количество) и условии, что оба R и R" не являются дородом, а R" представляет гидрофилью составляющую, выбранную из группы, стоящей из 2(триметиламмонио)этила, 2иноэтила, 2-карбокси-2-аминоэтила, 2,3оксипропила и пентаоксициклогексила, ержащих, таким образом, фосфатидилое производные холина (лецитина), этаномина, глицерина, серина и инозитов, тветственно, Не обязательно, но предчтительно, система, увеличивающая пощение, также содержит жировое масло в еси с фосфолипидом (фосфолипидами), Способ получения композиции включадиспергирование по крайней мере однофосфолипида общей формулы (I), не язательно, но предпочтительно смешанго с жировым маслом, в жидком или тверразбавителе вместе с фармацевтически ивным агентом либо в растворе, либо в ошкообразном состоянии, причем выпомянутый разбавитель может (не обятельно) содержать вспомогательные

-буферирующие, консервирующие и реирующие осмотическое давление агенуглерода. Самый предпочтительный подкласс соединений формулы (i) образуют соединения, в которых R и R" каждый представляет нонилкарбонил.

Предпочтительным является использование смеси двух фосфолипидов формулы (i), в предпочтительном варианте в весовых пропорциях о-, 1:10до 10:1, в более предпочтительном варианте от 1:2 до 2;1, Одним из

10 этих двух фосфолипидов может быть соединение, в котором R и R" оба являются октаноилом, деканоилом или лауроилом, Вторым из этих двух фосфолипидов может быть соединение, в котором один из двух

15 заместителей R и R" является водородом, а второй из двух заместителей R и R" является октаноилом, деканоилом или дауроилом (додеканоилом).

Примерами предпочтительных соединений формулы (1) являются: диоктаноил 1- a — - фосфатидихолин, диоктил-О-L-а-фосфатиидилхолин, дидеканоил 1- а -фосфатидилхолин, дидецил-О-L- a

-фосфатидилхолин, децил-О-L-а -лизофати25 дилхолин, дилауроил L-а -фосфатилилхолин, лауроил (=а -лизофосфатидилхолин, Получение нескольких соединений формулы (I) было известно ранее, например, Е.К.

Роблес и Д. Ван Ден Берг: Biochlm

Biophgs.Acta, т.187 (1969), стр.520 — 526, Г.К.

Мэнголд и Ф,Палтауф (Редакторы) в книге

"Липиды простых эфиров", Гл.3, Акад. Пресс

1983 г. Другие соединения формулы (I) могут быть получены аналогичными методами.

Жировое масло, которое не обязательно вводят в систему увеличения поглощения, являющуюся предметом настоящего изобретения, в предпочтительном варианте является растительным маслом, в более

40 предпочтительном варианте соевым маслом, арахисовым маслом, кокосовым маслом, маисовым маслом, оливковым маслом, подсолнечным маслом или их смесями, В еще одном предпочтительном вариан45 те реализации настоящего изобретения фармацевтически активным агентом является полипептид.

Одной группой предпочтительных полипептидов является инсулин и производные инсулина, например, инсулин, модфицированный химическими или ферментными методами, или при помощи технологии рекомбинантной ДНК, или смеси таких инсулинов, проинсулина и глюкагина, Еще одними предпочтительными полипептидами являются паратироидный гормон, антагонист паратироидного гормона, кальцитомин, вазопрессин, ренин, пролактин, гормон роста, тироидный стимулирующий

1837869 гормон, кортикотропин, фактор, высвобождающий кортикотропин, гормон, стимулирующий фолликулы, лютеинизирующий гормон, хорионный гонадотропин, атриальные пептиды, интерферон, плазминогенный активатор ткани, гаммаглобулин, фактор

УП, фактор УГ, гормон, высвобождающий гормон роста, соматостатин и холецистокины, Композиции могут быть получены жидкими, например, предназначенными для применения в виде струи, или твердыми, например, порошок, предназначенный для вдыхания, Полученные жидкие композиции такие, например, которые основаны на водных формах, будут в общем случае включать вспомогательные агенты, например, рН-буферирующие системы, и предпочтительном варианте такой буфер, как фосфатный, цитратный или ацетатный буфер, консервирующие и регулирующие осмотическое давление агенты, например, глицерин или хлорид натрия, Полученные порошкообразные композиции могут содержать фармацевтически активный агент и систему. усиливающую поглощение, в смеси с приемлемыми для применения через нос порошкообразными разбавителями или их смеси, например, целлюлозу или ее производные, например, простые эфиры целлюлозы или натрий карбоксиметилцеллюлозу, крахмал, жирную кислоту с длинной цепью или ее соль, например, стеарат алюминия, органический полимер, например, производного акриловой кислоты или неорганические растворители такие, как тальк или диатомовая земля. Для улучшения адгезии порошкообразной композиции со слизистой оболочкой носовой полости может оказаться необходимым использовать дополнительные добавки абсорбирующих воду полимеров, например, полиэтилен гликоля или поливинил пирролидона.

Жидкие композиции, в которых разбавителем является вода могут быть получены при помощи диспергирования системы, увеличивающей поглощение, в водной среде, содержащей фармацевтически активный агент и вспомогательные агенты, диспергирование осуществляют при помощи любого приема, который в общем случае используют для суспендирования или эмульгирования, например, при помощи обработки ультразвуком, Регулирование водной фазы вблизи нейтральности (например, с рН в области от примерно 6,5 до примерно 8) может быть осуществлено на любой из подготовительных стадий, В предпочтительном варианте получают микроэмульсии, в которых размер диспергированных частиц или

55 капель составляет порядка 10 нм, при этом облегчается их переход через слизистую оболочку носа. Такие микроэмульсии могут быть стерилизованы при помощи фильтрации. Содержание фосфолипида формулы (1) и жирового масла в предпочтительных композициях (формах), являющихся предметом настоящего изобретения, изменяется в области от 0,01 до 10 в предпочтительном варианте от 0,5 до 5 (в/о) и от 0,01 до 50, в предпочтительном варианте от 0,1 до 10 (в/о), соответственно, от всей композиции.

Ввиду того факта, что в слизистой оболочке носа содержится протеазы и петидазы (см. P.Å. Стрэтфорд и В. Г,Л. Ли.

Int,Jeurn.Pharmceutis, т.30 (1986), стр.73—

82), может оказаться желательным ввести биосовместные ингибиторы протеазы и пептидазы в композиции, содержащие полипептид.

Концентрация фармацевтически активного агента будет разумеется, зависеть от конкретного выбранного агента, от его эффективности, от сравнения его биовосприимчивости при применении через нос и при применении другими способами, например, при помощи парентеральной инъекции и от необходимой частоты применения вместе с необходимой одной дозой композиции. Такие фармакологические данные могут быть получены при помощи приемов, известных каждому специалисту в этой области, например, в результате экспериментов на животных, например, в терминах индексных величин таких, например, которые оценивают для композиций инсулина в примерах, приводимых ниже.

Если взять инсулин в качестве примера, то его концентрация в композиции, являющейся предметом настоящего изобретения, может изменяться в области от примерно 5 до 1000 международных единиц (М.Е.) на мл, в предпочтительном варианте от 50 до

500 М.Е. на мл.

В инсулиновые композиции предпочтительном варианте включают бычий, свиной или человеческий инсулин.

Иллюстрирующий процедурой получения инсулиновых композиций, являющихся предметом настоящего изобретения, в которых разбавителем является вода, является о процедура. содержащая растворение инсулина, например, кристаллического цинкового инсулина, например, высокоочищенного сорта инсулина, предложенного в патенте

Великобритании М 1285023, в воде в присутствии кислоты, например. хлористоводородной кислоты. Водный раствор консервирующего агента, например, фенола, алкил фенола такого, как крезол, или

1837869

5

25

55 етил пара-оксибензоата получают отдельо, он может содержать агент, обеспечиващий изотонность раствора, такой, как лорид натрия или глицерин, Кроме того, онсервирующий раствор может содержать уферирующий агент такой, как фосфат нария, цитрат натрия, ацетат натрия или

РИС (трис(оксиметил)аминометил) и ингиитор протеазы. Полученный в результате онсервирующий раствор затем смешивают кислым раствором инсулина, а затем доавляют основание, например, раствор гидата окиси натрия, чтобы обеспечить

Н-значение в нейтральной области.

Фосфолипид формулы (1), не обязательо в смеси с жировым маслом, может быть обавлен в раствор инсулина в виде раствоа или эмульсии, которую получают при поощи растворения или суспендирования осфолипида формулы (I) в воде и, если зто еобходимо, затем подвергая суспензию бработке ультразвуком перед смешением раствором инсулина. В качестве альтернаивы раствор или суспензия фосфолипида ожет, если это необходимо, содержать буерирующий агент и концентрирующий гент. После смешения рН-значение инсуиновой композиции можно обеспечить в ейтральной области, Наконец, полученный результате раствор инсулина доводят дс асчетного объема добавлением воды.

Дальнейшие подробности реализации астоящего изобретения. Композиции, явяющиеся предметом настоящего иэобреения, можно использовать в любой дозе, в ависимости от устройства, предназначеного для применения через нос. Это устройтво может быть сконструировано с точки рения обеспечения оптимальной точности змерений и совместимости его конструкивных элементов таких как контейнер, клаан и привод с композиций для применения рез нос и может базироваться на системе еханического насоса, например, на систее распылителя с фиксированной дозой, ли системе аэрозоля под давлением, Система аэрозоля требует применения распыяющего агента. который должен быть нертным относительно композиции. Соотетствующие распыляющие агенты могут

ыть выбраны среди таких газов, как фторуглероды, углеводороды, азот и окись азота, ли их смеси. (Дальнейшие подробности реализации астоящего изобретения на практике деонстрируются при помощи приводимых иже примеров, которые. однако, не следурассматривать в качестве каких либо оганичений области, охватываемой им.

Исходный инсулиновый материал, используемый в примерах 1 — 12 содержит примерно 20 — 30 r цинка на мг азота.

Соевое масло и арахисовое масло являются очищенными сортами, соответствующими сортам U.S.P. XXI и П.Г,XYI, соответственно.

Пример 1. 772 мг человеческого инсулина растворяли в 40 мл 0,02 M растворе хлористоводородной кислоты и добавляли 1,6 r безводного глицерина. Далее, до объема 80 мл добавляли дистиллированную воду. рН регулировали на уровне 74 при помощи 0,2 M раствооа гидрата окиси натрия. 1,0 г дидеканоил-L-а -фосфатидилхолина растворяли в 2 мл этанола (96 ) и с использованием подкожного шприца инъектировали в 10 мл дистиллированной воды.

Полученный в результате мутный раствор подвергали обработке ультразвуком с использованием ультразвукового зонда с высокой энергией в течение 10 минут и полученный в результате коллоидный раствор добавляли в раствор инсулина при перемешивании, а затем до объема 100 мл добавляли дистиллированную воду. Эту композицию, содержащую 200 M.Å. (мл инсулина, диспергировали в распылитель, предназначенный для применения в нос, и затем 100 микролитров применяли в носовую полость самца кролика NZW. Такую же композицию, но беэ дидеканоил-L-a -фосфатидилхолина, также испытывали на кроликах, В фиксированные моменты времени брали пробы крови иэ маргинальной ушной вены и определяли концентрации глюкозы методом гексокинаэы.

Были гюлучены следующие результаты (см.табл.1).

Пример 2. 100 мг дидеканоил 1= а

-фосфатидилхолина растворяли в 100 мг соевого масла и этот раствор добавляли в 5 мл

0,01 Мбуфера фосфата натрия,,рН 7,4.

Смесь эмульгировали с использованием ультразвуковой обработки, 2 мл инсулинового раствора с 400 единицами на мл добавляли в эту эмульсию и рН обеспечивали на уровне 7,4 затем до объема 10 мл добавляли воду.

После применения через нос этой композиции кроликам концентрацию глюкозы в крови наблюдали в течение 120 минут. Площадь над кривой, в которой единственные значения концентрации глюкозы в крови выражены в пересчете на проценты от начального значения, оценивали методом треугольника. Далее, индекс рассчитывали по формуле:

1837869

10

Индекс = 0,053 х А/Р,в которой А — это площадь над кривой для испытываемой композиции, D — это доза испытываемой композиции, а множитель 0,053 представляет собой эмпирический множитель, выведенный при подножном применении сильно действующих инсулиновых препараций.

Испытываемая таким образом инсулиновая эмульсия для применения через нос имеет индекс 24%.

Аналогичная композиция, но приготовленная без растительного масла, имела индекс 12-15

Пример ы 3 — 12. Композиции иэ примеров 3 — 6,8 и 12 получали с использованием тех же приемов, что были описаны в примере 1 в то время, как композиции из примеров 7 и 9 — 11 получали по методу из примера 2. В табл.2 используются следующие сокращения:

Фосфатидилхолин PC

Дидеканолил фосфатилилхолин DDPC

Дилауроил фосфатидилхолин 0 РС

Содержание в процентах приведено в пересчете на вес/объем, Все композиции содержали 80 M.E./ìë инсулина.

Эти данные показывают прекрасные эффекты увеличения поглощения фосфатидилхолина с ацильными или алкильными группами со средней длиной цепи, Пример 13. 100 Ml дидеканоил 1= Q

-фосфатидилхолина растворяли в 100 мг соевого масла и раствор затем добавляли в 5 мл 0,01 М буфера фосфата натрия, рН 7,4, содержащего 160 мг глицерина, После эмульгирования смеси при помощи обработки ультразвуком в эмульсию добавляли

100 мг глюкагона, рН обеспечивали на уровне 7,4 и воду добавляли до объема 10 мл;

После применения через нос этой композиции кроликам. концентрацию глюкозы в пробах крови определяли путем взятия проб из маргинальной ушной вены, при этом использовали метод гексокиназы.

Во времени получали следующие концентрации глюкозы в пробах крови:

Минуты после применения 0 15 30 60

Глюкагон без системы "усилителя" 107

100 107 113 111

Глюкагон без системы "усилителя" 163

100 144 178 188

Пример 14, Инсулин (4,53 мг) человека размалывают в ступке вместе с а-циклодекстрином (395,47 мг) и получают препарат с содержанием инсулина в 0,3 МЕ/мг.

Препарат испытывают на моделях с кроликами, в которых кроликов обрабатывают путем введения через нос препарата инсулина (20 мг/животное). Спустя 0,15,30,60 и

+20 мин после введения отбирают образцы крови, в которых определяют концентрацию крови. Каждую такую концентрацию глюкозы в крови выражают в виде процента от первоначальной концентрации глюкозы и методом треугольника рассчитывают площадь между средней концентрацией глюкозы в крови относительно кривой времени и кривой t (время) = 100. Затем по нижеприведенной формуле рассчитывают индекс, которым сравнивается гипогликаэмическое действие препарата для введения через нос с действием стандартной подкожной инъекции быстродействующего препарата инсулина.

Индекс = 0,053 х А/0, где А — площадь над кривой для испытуемого препарата, 0 — доза испытуемого препарата в МЕ/животное и коэффициент 0,053 является полученным эмпирически коэффициентом на основе подкожного введения быстродействующего препарата инсулина.

Для вышеприведенного препарата индекс равен 42.

Пример 15. Инсулин человека (2,91 мг) размалывают в ступке вместе с а -циклодекстрином (717,09 мг).

Размолотый порошок опрыскивают раствором дидеканоилфосфатидилхолина (80 мг) в необходимом объеме разбавленного этанола, содержащего около 30% (об./об.) воды, после чего оставляют сушиться, Высушенный порошок просеивают через сито с размером отверстий в 0,7 мм и затем через сито с размером отверстий в 0,2 мм и получают препарат с содержанием инсулина в 0,1 МЕ/мг, При испытании на модели с кроликами примера А для полученного препарата найден индекс в 88, Пример 16, Воспроизведена методика примера В с использованием человеческого инсулина (2,3 мг), а -циклодекстрина (537,7 мг) и дидеканоил-фосфатидилхолина (60 мг), растворенных в этаноле, содержащем около 4% (об./об.) воды и получают препарат с содержанием инсулина в 0,1

ME/Mr.

При испытании на модели с кроликами примера А для полученного препарата найден индекс, равный 95.

Пример 17. Глюкогон человека (4 мг) размалывают в мельнице с а -циклодекстрином (796 мг) и получают препарат с содержанием глюкагона в 5 мгlг.

Препарат испытывают на модели с кроликами, в которой 6 кроликам вводят через нос препарат глюкогона (20 мг/животное).

1837869

55 пустя 0,15,30,60 и 120 минут после введея отбирают образцы крови, в которых определяют концентрацию глюкозы. Каждую к онцентрацию глюкозы в крови выражают в в де процента от первоначальной концентации глюкозы и способом треугольника одсчитывают площадь между кривой 1(врея) = 100 и средней концентрацией глюкозы крови относительной кривой времени. ассчитанную площадь, деленную на ввоимую дозу, используют в качестве меры г пергликаэмического эффекта от введеия, В данном испытании получено значеие площади на дозу, равное 74,876, Пример 18. Воспроизведена методиа примера В с применением глюкогона чеовека (4 мг), а -циклодекстрина (716 мг) и идеканоилфосфатидилхолина (80 мг), расворенных в зтаноле, содержащем около (об./об.) воды, и получением препарата содержанием глюкогона в 5 мг/г.

В испытании по методике примера 0 ля полученного препарата получено значеие площади на дозу, равное 107,683.

Пример ы 19,20. Препараты этих римеров приготовлены и испытаны по меодике, аналогичной методике примера 1. ндекс подсчитывают так, как описано в римере 2 (см.табл.3).

Пример 21, В 5,5 мл воды растворяют

-циклодекстрин (664 мг), добавляют биоинтетический гормон роста человека (БГР, поставляется фирмой Ново Нординск

/S, 35,8 мг) и раствор высушивают вымоаживанием. Полученный порошок (600 мг) ранулируют с 96 -ым зтанолом (250 мкл), росеивают через сита на 0,7 и 0,3 мм и ушат в эксикаторе над силикагелем. Полченный препарат содержит 3 МЕ/20 мг БГР.

Биодоступность препарата для введеия через нос испытывают в сравнении с аствором для в.в, введения, приготовляеого следующим образом.

В 1 мл воды растворяют Б-чГР (1,364 мг) и затем разбавляют карбонат-глициновым уфером (рН 8,4), к которому добавлен 1 льбумина сыворотки крови человека до коечного объема в 5,3 мл. Такой раствор для нъекций содержит 0,754 ME/мл Б-чГР.

Испытания проводят на самцах кролиов линии NZW весом около 2,5 кг с шестью роликами в группе для введения через нос тремя кроликами в группе для в.в. введеия. В ходе испытания кроликов фиксируют станке и для отбора образцов крови в шную артерию кроликов вводят катетер.

В группе для введения через нос каждому зверьку вводят 20 мг препарата. Для вдувания порошка в ноздри животных используют шприц специальной конструкции, создающий строго определенное давление воздуха, Отбирают образцы крови в

0,5 мл в охлаждаемые льдом гепаринизированные пробирки эа 5 мин до и

10,20,30,40,50,60,75,90,120,180 и 240 мин после введения испытуемого препарата.

В контрольной группе каждому зверьку вводят 250 мкл в.в. раствора для иньекций.

Образцы крови отбирают за 5 мин до и

10,20,30,40,50,60,75,90 и 120 мин после введения, Образцы крови анализируют относительно иммунореакционноспособного чГР с помощью чГР-ELISA метода.

Подсчитанная биодоступность вводимого через нос порошка составляет 31 .

Пример 22. В 5 мл воды растворяют а-циклодекстрин (608 мг), добавляют Б-чГР (35,8 мг) и раствор высушивают вымораживанием. Полученный порошок (552 мг) гранулируют с раствором DDPC (48 мг) в

96 -ном этаноле (200 мкл), просеивают через сита на 0.7 и 0,3 мм и сушат в эксикаторе над силикагелем. Полученный порошок для введения через нос содержит 3 МЕ/20 мг

Б-чГР, В испытании по методике примера Н биодоступность составляет 36 (относительно в.в, инъекции), Пример 23. В 4,6 мл воды растворяют а-циклодекстрин (552 мг), добавляют Б-чГР (35,8 мг) и раствор сушат вымораживанием.

Полученный порошок (504 мг) гранулируют с раствором DDPC (96 мг) в 96 -ом этаноле (200 мкл), просеивают через сита на 0,7 и 0,3 мм и сушат в эксикаторе над силикагелем.

Полученный порошковый препарат для введения через нос содержит 3 М Е/20 мг Б-ч ГР.

В испытании по методике примера Н найденная биодоступность составляет 44. (относительно в.в. инъекции).

Пример ы 24, 25, 26, 27. Композиции укаэанных примеров получают по методике примера 2 использованием соответственно

100 мг кокосового масла, кукурузного масла, оливкового масла или подсолнечного масла.

Кроме того, испытания и подсчет индекса осуществляют согласно методике примера 2 (см. табл.4).

Пример 28. Исследование переносимости композиций, полученных в соответствии с изобретением, слизистой носа проводилось при использовании композиций примеров Н и 1(далее обозначенных как композиции Н и 1). Так, в два различных

1837869

Н-cH-OR

С

Таблица 1

Глюкоза в крови в процентах от первоначального уровня дня каждому из 8 здоровых добровольцев делалось по 2 вдувания (1 на каждую ноздрю) композиции Н или композиции I, причем в каждом вдувании содержится 20 мг соответствующей композиции. Вдувание осуще- 5 ствляют с помощью сменного наконечника пипетки и отмеренного небольшого количества сжатого воздуха. За 10 мин до и 180 мин после введения порошка проводят риноскопию. Сравнивают наблюдения до и по- 10 сле введения порошка, и вызываемое порошком раздражение оценивают как: "отсутствие", "слабое", "умеренное" или "тяжкое". Как ясно видно из нижеприведенной таблицы, включение в композицию1дидека- 15 ноилфосфатидилхолина почти снимают раздражающее действие, присущее аналогичным композициям, но без фосфолипида (см. табл.5).

Формула изобретения 20

1,Способ получения дисперсии полипептидов для интраназального применения, включающий диспергирование активного агента в разбавителе с поверхностно-активным веществом, добавление рН- 25 буферирующих, консервирующих, регулирующих осмотическое давление вспомогательных веществ, о т л и ч а ю щ ий с я тем, что, с целью ускорения интраназального поглощения и предупреждения 30 раздражающего действия конечного продукта, диспергирование проводят в жирном масле или другом разбавителе, в качестве поверхностно-активного вещества используют фосфолипид общей формулы 35 н 0R

Б-сБ-О-Р(О) (ОЯ)-Щ" где R и R", одинаковые или различные,— водород, алкил. алкенил, алкилкарбонил, алкенилкарбонил, алкадиенилкарбонил, алкатриенилкарбонил или алкатетраемилкарбонил, содержащий не более 14 атомов углерода, при этом R и R" не являются водородом, а R" — гидрофильная группа, выбранная из 2-(триметиламмония)этила, 2-аминоэтила, 2-карбокси-2-аминоэтила, 2,3-диоксипропила или 2,3,4,5,6-пентаоксициклогексила.

2.Способ по п,1, отличающийся тем, что R" — 2-(триметиламмонио)этилом.

3.Способ по п.2, отличающийся тем, что R и R" — каждый алкил или алкилкарбонил, содержащий 4-12 атомов углерода.

4.Способ по п.3, отличающийся тем,что R и R" — нонилкарбонил.

5.Способ по п.2, отличающийся тем, что или R, или R" — водород.

6,Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве жирного масла берут растительное масло, выбранное из группы соевое, арахисовое, кокосовое, маисовое, оливковое, подсолнечное масло.

7.Способ по пп.1 — 6, о т л и ч à ю щ и йс я тем, что фосфолипид берут в количестве

0,1-10,0%, предпочтительно 0,5 — 5,0% от всей композиции.

8.Способ по п.7, отличающийся тем, что жирное масло берут в количестве

0,01 — 50,0%, предпочтительно 0,1 — 10,0 от всей композиции.

Приоритеты по пунктам: 16.12.86— пп.1,2,3,4,7, 16.01,81 — пп,5,6,8.

1837869

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4