Способ получения n-/4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин-2- ил/-ацетамидов или -бензамидов или их нетоксичных фармацевтически приемлемых кислых солей

 

Сущность изобретения: продукт - N-(4- морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)- ацетамид или бензамид ф-лы 1, где RI - Н, Ci-Gj-алкил; RZ - С1-С4-алкил, фенил, бензилрадикал. Реагент 1: 2-амино-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин. Реагент 2: Hal-COR2. Условия реакции: эквимолярное соотношение реагентов. Соединения оказывают стимулирующее воздействие на холинергическую систему. 6 табл. Ф-ла 1 0-tfrb Cr CHjCH-j (Л С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 07 О 413/04

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) 1 ° тТ -., А

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

СН В 2 Н

B которой (21) 4830673/04 (62) 4614768/04 (22) 20.08.90 (23) 15,08,90 (31) 8819493 (32) 16.08.88 . (ЗЗ) GB (46) 30.08.93. Бюл. N. 32 (71) 1ОЦБ С.А. (В Е) . (72) Эрин Коссман, Жан Гобер, Ролан Буаден и Жак Матье (BE) (56) Патент Японии N 74/69.688. кл. 16 Е 472, опубл. 1974.

Ч, Florio, G. Bignami and V.G. Longo, Eeh

patterns during the lehavIonrai

desensItuzation to scopolamine In rats,, Int. J.

Neuropharmac., 1969, р. 405-411, Pergamon

Press, Printed in Great Britain, Изобретение относится к синтезу новых биологически активных соединений, обладающих фармакологической активностью.

В частности, изобретение относится к способу получения новых N-(4-морфолиноб-пропил-1,3,5-триаэин-2-ил)-ацетамидов или бензамидов общей формулы I

R)

0 — 1- н

К AN

R> представляет собой атом водорода или С1 — С4-алкил;

R2 представляет собой С1 — С4-алкил, фенил или бенэил радикал, или их нетоксичных и фармацевтически приемлемых солей, которые оказывают стиму„„Я „„1838312 АЗ (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ N-(4-МОРФОЛ И НО-6-П Р ОП ИЛ-1,3,5-ТРИАЗ И Н-2-ИЛ)АЦЕТАМИДОВ ИЛИ БЕНЗАМИДОВ ИЛИ

ИХ НЕТОКСИЧНЫХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ

ПРИЕМЛЕМЫХ КИСЛЫХ СОЛЕЙ (57) Сущность изобретения: продукт — N-(4морфол и но-б-пропил-1,3,5-триаэин-2-ил)ацетамид или бензамид ф-лы 1, где R> — Н, Ct — С4-алкил; R2 — C> — С4-алкил, фенил, бензилрадикал. Реагент 1: 2-амино-4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин, Реагент 2:

Hal — C0R2. Условия реакции: зквимолярное соотношение реагентов. Соединения оказывают стимулирующее воздействие на холинергическую систему. 6 табл. Ф-ла 1

Оl и. И-RI

Г"=coR, g+eg

®1 2 Н2(Н3 лирующее воздействие на холинергическую систему.

Известны близкие по структуре производные 2-амино-1,3,5-триазинов, в частности, 2-амино-4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазин, но они обладают свойством увеличивать выделение кортикостероидов.

Цель изобретения — получение новых производных 1,3,5-триазина, обладающих иным спектром биологических свойств, чем известные структурные аналоги, Поставленная цель достигается описываемым способом получения N-(4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамидов или бензамидов общей формулы i, заключающемся в том, что проводят взаимодействие в эквимолярном количестве

2-амино-4-морфолино-6-и ропил-1,3,5-триа зина общей формулы II

1838312

3 .,ч

Ч т

К и

CHgOH)HH) где R1 имеет значение, указанное выше, с соединением общей формулы (! П) На! СОЯг, в которой R2 имеет вышеуказанное значение и На) является атомом галогена, предпочтительно атомом хлора.

Эта реакция обычно проводится в органическом растворителе, таком, как, например, дихлорметан, дихлорэтан или пиридин, при температуре, находящейся в пределах между температурой окружающей среды и температурой кипения растворителя, а также в присутствии акцептора кислоты, такого, как третичное органическое основание (например, триэтиламин, или пиридин, или минеральное основание).

Полученные таким образом N-(4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)-ацетам иды и бензимиды могут в случае необходимости быть превращены в соли с кислотами известным способом. В качестве примеров фармацевтически пригодных кислот можно назвать неорганические кислоты; соляная, бромистоводородная, серная, азотная, фосфорная и т,д., и органические кислоты, как: уксусная, лимонная, винная, бензойная, салициловая, малеиновая и т.д.

Исходные 2-амина-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазины формулы II могут быть получены путем взаимодействия 2-амино-4хлора-6-пропил-1,3,5-триазина формулы IV с морфолином, согласно уравнению:

Ct. уй-. г —

Я -К1

eHzeHtdH3 в этих формулах R1 представляют атом во-. дорода или радикал алкила, имеющего от 1 до 4 атомов углерода, Эту реакцию проводят при повышенной температуре, обычно при температуре кипения применяемого растворителя,.и в присутствии основания. Растворителем, в котором осуществляют эту реакцию, является либо амин сам по себе, применяемый в избытке, либо инертный органический растворитель, предпочтительно диоксан, и в этом последнем случае используемым основанием является неорганическое или органическое основание, отличное от амина, используемого в реакции. например, триэтиламин, Что касается 2-амино-4-хлор-6-и ропил1,3,5-триазинов формулы И, используемых в качестве исходных продуктов, то они могут быть получены известными подходящими способами, путем взаимодействия 2,4-дихлор-б-пропил-1,3,5-триазин с соответствующим амином.

Пример 1, Получение исходных 25 амино-4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триази нов формулы II

1,2-Амин о-4-м орфол и но-6-пропил-1,3, 5-триазин(хлоргидрат}, Смешивают 87 г (1 моль) морфолина и

8,6 r (0,05 моль) 2-амино-4-хлор-6-пропил1,3,5-триазина. Температура смеси поднимается сама по себе до 54 С. Затем нагревают с рефлексом в течение 5 ч. Реакционную смесь выпаривают при понижен15 ном давлении и полученный осадок вновь растворяют в этилацетате. Раствор промывают 3 раза водой, затем сушат на сульфате натрия. Раствор удаляют при пониженном давлении и остаток перекристаллизовывают в гексане. Получают 9,1 r 2-амино-4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазина. Выход;

82 . Температура плавления: 127 — 128 С.

Хлоргидрат, температура плавления:

210 — 211 С (изопропиловый сприт — эфир).

Анализ для С1оНпМ О, HCI в расчетный; С 46,24 Н 6,94 N 26,97 С1

13,68 фактический: 46,21 6,90 26,78 13,61

Используемый в качестве исходного

30 продукта 2-амино-4-хлоро-б-пропил-1,3,5триазин на этом этапе получен согласно известному способу (1).

2,2-(метиламино)-4-морфолино-б-проп ил-1,3,5-триазин (хлоргидрат)

35 К раствору, содержащему 5,6 г (0,03 моль) 2-хлор-4-(метиламино)-6-пропил1,3,5-триазина в 50 мл диоксана, добавляют раствор, содержащий 8,7 г (0,1 моль) морфлоина в 50 мл диоксана. Смесь нагревают с

40 оттоком в течение 5 ч. Затем охлаждают, фильтруют хлоргидрат морфолина, который образовался. Растворитель удаляют при пониженном давлении и осадок поглощают хлороформом. Промывают водой и сушат органическую фазу на сульфате натрия, Выпаривают растворитель, а осадок перекристаллизовывают из этилацетата. Получают

5,3 r 2-(метиламино)-4-морфолино-6-пропилл-1,3,5-триази на.

Выход: 747;. Температура плавления:

131 — 133 С.

Полученный продукт растворяют в изопропиловом спирте при высокой температуре. К этому раствору доба вля ют эквивалентное количество раствора соляной кислоты в этиловом эфире. Хлоргидрат кристаллизуется охлаждением. Фильтруют, промывают этиловым эфиром и сушат.

Выход: 75 7,, Температура плавления:

177-178 С.

1838312

Анализ: для С ! Н !д И О k CI в %: расчетный: С 48.26 Н 7,31 N 25,59

CI 12, 97 фактический: 48,38 7,40 25,58 12,64

Пример 2, Получение N-(4-морфолин о-6-и ро и ил-1,3,5-т ри азин-2-ил)а цета мидов и бензамидов формулы !.

1. N-(4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамид (соединение 1), При температуре окружающей среды к раствору 11,2 г(0,05 моль) 2-амина-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазина в 100 мл безводного пиридина по капле добавляют 4 г (0,05 моль) ацетилхлорида, Смесь перемешивают в течение 6 ч, затем оставляют в покое в течение 48 ч, фильтруют хлоргидрат пиридина и выпаривают фильтрат при пониженном давлении. Полученный осадок обрабатывают один раз толуолом, который вновь выпаривают. Затем осадок поглощают дихлорметаном, промывают раствор водой и сушат над сульфатом натрия.

Полученный осадок после выпаривания растворителя очищают хроматографией на кремневом ангидриде (элюент:90:10 (об/об) дихлорметан-этанол) и продукт окончательно перекристаллизовывают в этилацетате, Получают 5,75 г N-(4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазин-2-ил)ацетамида.

Выход: 43,4%, Температура плавления;

141-142 С (соединение 1а).

Хлоргидрат: температура плавления;

145 — 146 С (изопропиловый спирт-.эфир) (соединение 1Ь).

Анализ для С12Нюйь02 HCI в %; расчетный: С 47,76 Н 6,63 N 23,22 С!

11,77 фактический: 47,78 6,73 22,80 I1,62

2, N-(4-морфолино-6-пропил-1,3,5-тиразин-2-ил)-бенэамид (хлоргидрат) (соединение 2).

К раствору 11,2 г (0,05 моль) 2-амино-4морфолино-б-пропил-1-3,5-триазина в 200 мл дихлорэтана добавляют при температуре окружающей среды, последовательно, раствор 7,7 r(0,,055 моль) бензоилхлорида в

50 мл дихлорэтана и раствор 5,5 г (0,055 моль) триэтиламина в 50 мл дихлорэтана.

Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 6 ч, затем охлаждают до комнатной температуры, промывают последовательно водой, водным раствором бикарбоната натрия, затем еще раэ водой.

Органическую фазу сушат на сульфате натрия и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Полученный осадок хроматографируют на кремневом ангидриде (элюент: 95:5 (об/об) дихлорметанэтанол), затем окончательно перекристаллизовывают из смеси 50:50 (об/об) эфир-гексан, Продукт образует в эфире хлоргидрат, Таким образом, получают 12,1 г хлоргидрата N-(4-морфолино-65 пропил-1,3.5-триазин-2-ил)-бензамида, Выход; 66,5%. Температура плавления:

197 — 198 С.

Анализ С17Н21Й502 НС! в % расчетный: С 56,12 Н 6,05 N19,,26 С! 9,77

10 фактический:56,30 6,50 19,16 9,54

Соединения, объединенные в табл,1, получены, как указано, согласно методике примера 2.1, либо согласно методике выше приведенного примера 2.2.

15 Как было указано выше, N-(4-морфолино-6-и роп ил-1,3,5-триа зин-2-ил)-а цетамиды и -бензамиды формулы и их соли обладают свойством коррекции эффектов гипофункции холинэнергической системы. Это основ20 ное свойство демонстрируется серией фармакологических опытов, на основании которых показано, что соединения, полученные согласно изобретению, оказывают определенный эффект. Подобный эффект

25 холинергических соединений, хорошо известных, таких, как оксотреморин, ареколин или физостигмин (2) или же продиводействуют эффекту, вызванному холинергическим антагонистом, таким, как скополамин.

30 Соединения, полученные согласно изобретению, были подвергнуты фармакологическим опытам, результаты которых приведены дальше.

1. Стимулирование холинергических эф35 фектов оксотреморина;

Цель данного теста состоит в том, чтобы показать, что соединения, полученные согласно изобретению, стимулируют центральные и периферические

40 холинергические эффекты, вызванные введением мыши малой дозы оксотреморина.

Степень периферической холинергической активации замерена с помощью эффекта слюноотделения, определенного по

45 следующей системе значений: значение 0: слюноотделение не превышает слюноотделение у нормальной мыши; значение 1: немного слюны находится вокруг зубов;

50 значение 2: слюна образует узкую полоску вокруг рта; значение 4: слюна смачивает кожу под подбородком; значение 6: слюна вытекает изо рта на

55 передние конечности.

Промежуточные значения не применяются и слюну берут после каждого наблюдения.

Степень центральной холинергической активации замерена с помощью тремоген 1 838312 ного эффекта, определенного по следующей шкале значений;

0: нет дрожаний;

1; случайные легкие и периодические дрожания; 5

2: умеренные дрожания, легкие и часто повторяющиеся;

3: ярко выраженные дрожания, но прерываемые периодами покоя;

6: очень сильное, почти постоянное дро- 10 жание.

Мыши — самцы породы МР! (20 — 25 r) разделены на четыре группы по пять животных, а именно: одна контрольная группа и три группы, подвергавшиеся обработке. 15

Тестируемое соединение введено внутрибрюшинным путем (трем указанным группам) за 20 мин перед введением оксотреморина, s различных дозах для каждой из трех обрабатываемых групп. Осотре- 20 морин введен в количестве 0,05 мг/кг внутрибрюшинным путем обрабатываемым группам и контрольной группе, в растворе

10 мл/кг физиологической сыворотки. Эта доза примерно соответствует минимальной 25 дозе оксотреморина, вызывающей дрожания и слюноотделение.

После введения оксотреморина >кивотные были помещены индивидуально в маленькие клетки и наблюдались в равные 30 промежутки времени, равные 5 мин, до полного исчезновения холинергических эффектов.

Для каждой из групп индивидуальные значения, определенные для каждого пери- 35 ода наблюдения, суммировались, что позволило построить кривую, представляющую сумму значений (баллов) в зависимости от времени, характеризующую каждую группу.

Средние значения поверхности под 40 кривыми, полученными для каждой из групп, подвергшихся обработке, сравнивали со средним значением площади под кривой, соответствующей контрольной группе и явились обьектом статистического анали- 45 эа по методу Манна — Битная. На основе этого сравнения можно определить

"минимальную активную дозу", Эта "минимальная активная доза" является минимальной дозой соединения, необходимого для 50 наблюдения стимулирования эффекта слюноотделения или дрожания оксотреморином, или другими словами, чтобы получить большую площадь, чем площадь под кривой, полученной для контрольной группы, 55

Результаты, полученные в этом испытании с соединениями, полученными в соответствии с изобретением, приводятся в табл,2, В этой таблице для каждого соединения, исследованного в опыте 1 (столбец 1), приводят минимальную дозу (выраженную в мг/кг), введенную внутрибрюшиным путем, которая необходима для наблюдения потенциализации эффекта, вызывающего слюноотделения (столбец 2) или эффекта дрожания под действием оксотреморина (столбец 3).

Табл.2 показывает, что соединения согласно изобретению стимулируют эффект слюноотделения и эффект дрожания при минимальной дозе от 8,4 до 37,8 мг/кг, Кроме того,, минимальные активные дозы не имеют собственную холинергическую активность и очень далеки от смертельных доз, определяемых по тесту Ирвина, С другой стороны, этот тест показал, что некоторые из этих введенных соединений в минимальной активной дозе имеют более длительное действие, чем метиловый эфир

1,2,5,6-тетра гидро-1-метил-3-пи риди н карб оловой кислоты (ареколин), известное холинергическое соединение. Таким образом, соединения, полученные согласно изобретению, демонстрируют стимулирование эффектов, вызывающих слюноотделение и дрожание, вызванных оксотреморином через 20 мин после введения минимальной активной дозы, тогда как в тех же условиях ареколин не вызывает никакого стимулирования, 2,Ингибирование гиперактивности, вызванной скополамином.

Животное, помещенное первый раз в новую окружающую среду, демонстрирует усиленную активность по исследованию этой новой среды. Постепенное уменьшение и затем исчезновение этой познавательной активности, другими словами, привыкание к новому месту, можно считать элементарной формой обучения. Эта элементарная форма обучения чувствительна к действию медикаментов, облегчающих или замедляющих обучение. Так, например, скополамин, соединение, вызывающие мнезические расстройства, приводит к черезмерной познавательной активности у крысы, помещенной в новую окружающую среду: это явление связано с центральной антихолинергической активностью этого соединения, Наоборот, холинергический агонист, такой, как физостигмин, противодействует гиперактивности, вызванной скополамином.

В тесте, описанном ниже, соединения, в зависимости от их растворимости, введены либо в физиологической сыворотке, либо в соответствующем носителе (обычно буферный раствор цитрата с рН 5), 1838312

1.0

40

Этот тест позволяет установить для соединений, полученных согласно изобретению, активность, сравнимую с активностью физостигмина, Тест основывается на оригинальной методике, описанной А. PLATE (см. выше) с одной стороны, и, с другой стороны, на способе автоматизации регистрации измерений.

В этом тесте используют самцов крыс

Spraguc-Dawley SPF (Specific Pathogeu Tree

160 — 200 г). В течение недели перед экспериментом, этих животных содержат в нормальных условиях, группами по 15 животных в стандартных огражденных решеткой клетках, со свободным доступом к пище и питью.

В начале эксперимента крыс делят на 4 однородные группы по 10 животных и приучают в течение часа к месту проведения эксперимента. Затем, каждую группу животных подвергают определенной обработке: — группа 1 получает две одновременные внутрибрюшинные иньекции физиологической сыворотки или используемого носителя; — группа 2 получает внутрибрюшинную инъекцию физиологической сыворотки или используемого носителя и внутрибрюшинную инъекцию 0,5 мг/кг скополамина в растворе; — группа 3 получают внтрибрюшинную инъекцию тестируемого соединения, растворенного а соответствующем носителе и внутрибрюшинную инъекцию физиологической сыворотки или используемого носите. ля; — группа 4 получают внутрибрюшинную инъекцию тестируемого соединения и внутрибрюшинную инъекцию 0,5 мг/кг скополамина.

Через 30 мин после такой обработки одновременно тестируют четыре группы животных. Для этого каждую группу помещают в квадратную камеру (100 х 100 см) с решетчатым полом и вертикальной стенкой . высотой 50 см. Каждая из этих камер содержит 16 зон, включая 4 угловые зоны, 4 центральные зоны и 8 периферийных зон.

Кроме того, каждая камера снабжена 2 рядами инфракрасных элементов, расположенных на высоте 2 см от пола, чтобы регистрировать горизонтальные перемещения животных, и 2 другими рядами инфракрасных элементов, расположенных на высоте 10 см от пола, чтобы регистрировать вертикальные перемещения. Эти инфракрасные элементы соединены с микропроцессором, который позволяет определить среднее значение пройденных расстояний (см) одной группой животных, среднее число выпрямлений, осуществленных животными, а также распределение горизонтальных перемещений в различных центральных, периферийных и угловых зонах, выраженных средним временем пребывания в этих различных зонах.

Каждое тестируемое соединение излучается, по крайней мере, в трех различных дозах, на основании которых определяют минимальную активную дозу, которая тормозит гиперактивность, вызванную внутрибрюшинным введением 0,5 мг/кг скополамина. Затем сравнивают значения, полученные в группе 2, обработанной только скополамином, со значениями, полученными в группе 4. обработанной одновременно и скополамином и тестируемым соединением, либо значения, полученные в группе 4 со значениями, полученными в группе 3. обработанной только тестируемым соединением. Группа контроля 1 является контрольной группой для действия скополамина, введенного группе 2. Наблюдаемые разницы во всех случаях оценены статистически методом Манна-Витнея, В таблице 3 даются результаты, полученные в этом испытании с соединенными, приготовленными в соответствии с изобретением.

Результаты, полученные в этом тесте, показывают, что соединения согласно изобретению обладают действием, ингибирующим гиперактивность, вызванную скополамином. Минимальные активные дозы, определенные для этих соединений, составляют от 1 до 9,2 мг/кг. Но в противоположность физостигмину, который является неактивным, будучи введен более, чем за 15 мин до начала измерений, соединения, полученные согласно изобретению, обладают ингибирующим действием и в том случае, если они были введены за 30 мин до начала измерений. Их активность таким образом является более длительной, нежели фиэостигмина.

3. Ингибирования эффекта скополамина на электроэнцефалограмме — ЭЭГ.

Введение человеку или животному скополамина вызывает мнезические расстройства, сравнимые с теми, которые возникают в ходе нормального или патологического старения, У пациентов, страдающих старчесхим слабоумием типа Альцгеймера, было получено улучшение мнезических расстройств путем введения физистигмина, соединения, которое ингибирует ацетил-холинэстеразу.

Скополамин, введенные внутрибрюшинным путем крысам, в количестве 0,5

1838312

30

40 мг/кг, вызывает изменения спектра ЭЭГ, которые выражаются в повышении мощности полосы в 8 Гц, снижении мощности полос от 20,8 до 40 Гц, также как в повышении общей мощности спектра ЭЭГ. Физистигмин противодействует этим изменениям.

Целью данного теста является демонстрация с помощью метода количественного анализа электроэнцефалограммы, что соединения, полученные согласно изобретению, обладают свойством нейтрализовать действия, которые скополамин оказывает на спектр ЭЭГ.

В этом тесте используют самцов белых крыс Spraguc Dawley SPF (от 160 до 200 r).

Когда животные достигают возраста 3 мес, им вживляют накрепко асептически и под общим наркозом 5 корковых электродов: один инертный электрод, один левый фронтальный и один правый фронтальный электрод, один левый затылочный электрод и один правый затылочный.

Тест проводят, когда животные достигают возраста около 15 мес, 8 интервале животных содержат в отдельных клетках, они получают по желанию пищу и питье и подвергаются регулярному суточному циклу, включающему периодтемноты между 18 часами вечера и 6 часами утра, В то же время, животные быстро привыкают к клеткам звуконепроницаемой кабины, которую они впоследствии будут занимать для снятия электроэнцефалограмм, также как к экспериментальным условиям, путем введения плацебо внутрибрюшинным путем. Продукты вводят непосредственно перед снятием ЭЭГ.

Крыс делят на группы по 8 животных и снимают 16 образцов спектра ЭЭГ в течение 5 ч (два спектра ЭЭГ на животного).

Полученные спектры затем анализируются

3ВМ (быстродействующая преобразованная функция Фурье), что позволяет определить для каждой группы среднюю величину

16 осуществленных измерений и вычислить для каждого животного общую мощность спектра ЭЭГ, также как распределение этой мощности (в %) по различным полосам частот.

Эта операция (регистрация спектров) повторяется 9 раз (общая длительность: 121 мин).

Действие изучаемого соединения определяется на основе статистического сравнения результатов, полученных для разных групп животных, которым были введены соответственно тестируемое соединение, скоколамин и плацебо.

В табл,4 для некоторых соединений, полученных согласно изобретению и введенных внутрибрюшинным путем в указанной дозе в мг/кг, процент снижения увеличения мощности полос 6,4 до 9,6 Гц(средняя

8 Гц), повышение, вызванное внутрибрюшинным введением скополамина в количестве 0,5 мг/кг.

Результаты показывают, что соединения, полученные согласно изобретению, также как физостигмин, ингибируют действия, которые скополамин оказывает на электроэнцефалограмму. Показано, что это ингибирование достигает и даже превышает 50% при относительно малых дозах, очень удаленных от токсичных доз, что не является характерным для физостигмина.

4. Пассивное уклонение с многочисленными испытаниями.

Соединения, полученные согласно изобретению, были изучены с целью показать, с одной стороны, их свойство способствовать обучению, выраженное в уменьшении числа опытов, необходимых для достижения определенного заранее критерия, и, с другой стороны, их свойство противодействовать амнезии, вызванной введением скополамина.

Для этого был использован метод пассивного уклонения с многочислен ными опытами, Этот метод хорошо изменен для оценки действий, которые оказывает препарат на память и обучение, Тест осуществлен на самцах крыс

Spraguc — Dawley (160 — 200 г) которые во время эксперимента содержатся в стандартных клетках, Используемое устройство является прозрачной квадратной клеткой, шириной 35 см и высотой 25 см, оборудованной электрофицированным решетчатым полом. Резиновый изоляционный коврик (10 х 17 см) размещен на полу в одном из углов клетки.

Чтобы определить, пригодно ли соединение для улучшения обучения, проводят следующий опыт.

Каждое животное помещают на резиновый коврик и отмечают время, которое требуется животному, чтобы решиться покинуть это место для изучения клетки. После 20 с исследования, животное получает электрический шок (длительность 3 с) в лапки, вызывающий реакцию бегства. Крысу сразу извлекают из устройства и возвращается в прежнюю клетку. Этот опыт повторяют до тех пор, пока животное не останется по крайней мере 180 с на резиновом коврике, чтобы избежать электрического шока.

Обучение выражено средним числом испытаний, необходимых для достижения времени пребывания на коврике, равном 180 секундам.

1838312

Время пребывания на резиновом коврике, равное 180 сек, считают максимальным результатом, требуемым животному для понимания, чтобы избежать электрического шока. Крысы, которые находятся это время на коврике, получают рефлЕкс уклонения и возвращаются в свои клетки без получения электрического шока.

Чтобы определить, может ли соединение способствовать мнезическому удержанию в течение времени, проводят следующий эксперимент. Каждое животное подвергают четырем опытам во время 0.4, 24 и 28 ч. При первом опыте (время 0) животное помещают на резиновый коврик и отмечают время, которое требуется животному, чтобы решиться покинуть это место для исследования клетки. Через 20 с после исследования, крыса получает электрический шок (длительность 3 с) в лапки, вызывающий реакцию бегства. Крысу тут же извлекают из устройства и возвращают в исходную клетку. В ходе трех последующих опытов (время 4, 24 и 28 ч), животное снова помещают на резиновый коврик и отмечают время, через которое оно покидает это место. Как только четыре лапки животного касаются решетки, животное получает электрический шок и животное немедленно удаляют из устройства.

В начале эксперимента, крыс делят на 4 однородные группы; по 15 животных. 3а тридцать минут перед каждым опытом, каждую группу подвергают определенной обработке — группа 1 получает внутрибрюшинную инъекцию физиологической сыворотки — группа 2 получает внутрибрюшинную инъекцию тестируемого соединения; — группа 3 получает внутрибрюшинную инъекцию 0,5 мг скополамина и — группа 4 получает внутрибрюшинную инъекцию 0,5 мг скополамина и одновременно внутрибрюшинную инъекцию тестируемого соединения.

Группы 1 и 2 использованы в первом эксперименте, а группы 3 и 4 — во втором эксперименте.

Результаты, полученные. в этом тесте с соединением согласно изобретению, сведены в табл.4. l3 этой таблице указано соединение, которое подвергалось опыту (колонка 1) и доза, введенная внутрибрюшинным путем, выраженная в мг/кг (колонка 2). В колонках 3 и 4 приведены полученные результаты, касающиеся опыта для оценки обучения. Цифры указывают среднее число попыток, необходимых животному, контрольному (группа I) или обрабо5

30

40

50 танному (группа 2) соединением, чтобы понять, что надо находиться на резиновом коврике 180 с, чтобы избежать электрического шока, Результаты были проанализированы с помощью критерия Стьюдента.

В колонках 5 — 12 приведены результаты, полученные в эксперименте по оценке мнезического запоминания. В колонах 5-8 цифры обозначают средние значения времени пребывания, замеренные во время 0,4, 24 и

28 ч соответственно, для животных группы

3, обработанных только скополамином; а в колонках 9 — 12 находятся цифры. соответствующие животным группам 4, обработанным одновременно скополамином и исследуемым соединением (доза указана во второй колонке).

Благоприятное влияние соединения, оказываемое против амнезии, вызванной скополамином, показано увеличением времени пребывания на коврике, при каждом наблюдении. Наблюдаемые разницы статистически проанализированы (обработаны) методом Манна — Витнея. Из этой таблицы следует, что — соединения, полученные согласно изобретению. способствуют обучению рефлекса уклонения: среднее число попыток, необходимых для достижения заранее определенного критерия (максимальное время пребывания на коврике составляет 180 с) увеличивается медленнее для обработанных животных (колонка 4), чем для контрольных животных (колонка 3); — ярко выражен амнезический эффект скополамина; видно, что значения времени пребывания животных группы 3 (колонки 58) значительно меньше 180 с, необходимых для контрольных животных, после среднего числа попыток (колонка 3); и в этих условиях, благоприятное влияние соединений, полученных согласно изобретению, на противодействие амнезичес кому действию

5 скополамина, является четко выраженным: животные группы 4, обработанные одновременно скополамином и соединением, полученным согласно изобретению, имеют при каждом наблюдении время пребывания значительно выше, нежели животные группы 3, обработанные только скополамином (сравнить результаты колонки 5 с результатами колонки 9, 6 и 10 и т.д.); — физостигмин оказывает благоприят5 ное противодействие амнестическому эффекту скополамина, подобное действию соединений, полученных согласно изобретению, но в количестве, оказывающем побочные действия и очень близком к токсичной дозе, что не является подходя15

1838312

16 щим случаем для соединений. полученных согласно изобретению, 5. Токсичность.

Токсичность соединений, полученных согласно изобретению, определена у самца мыши NMRI с помощью теста Ирвина (S.

Irwin, Phychopharmaco1ogia, 13, 1968), 222—

257), Увеличивающиеся дозы тестируемого соединения были введены внутрибрюшинным путем группам из трех мышей до тех пор, пака не была достигнута смертельная доза (доза, вызывающая смерть, в течение

48 часов двух животных из трех).

В приведенной ниже таблице 6, приведена смертельная найденная доза для соединений, полученных согласно изобретению, Из этой таблицы следует, что соединения являются малотоксичными, в противоположность физостигмину, 6, Дозировка и введение, Фармацевтические составы, заключающие в себе соединения, полученные согласно изобретению, могут быть введены оральным, парэнтеральным или ректальным путем. Фармацевтические составы, используемые для орального введения, могут быть твердыми или жидкими, например, в виде таблеток (в оболочке или без нее), пилюль, драже, желатиновых капсул, растворов, сиропов и т.д. Составы, используемые для парзнтерального введения, также находятся в известных фармацевтических формах для данного типа введения, например, растворы, суспензии или водные или масляные эмульсии.

Для введения ректальным путем, вещества, содержащие соединения, полученные согласно изобретению, обычно применяются в виде свечей.

Фармацевтические формы, такие как впрыскиваемые растворы, суспензии, таблетки, капли, свечи и т.д, получают согласно широко известным для фармацевтов способам, фармацевтические формы могут также содержать соединения, которые позволяют постепенно выделить активный продукт.

Соединения, полученные согласно изобретению, смешивают с твердым или жидким, нетоксичным, фармацевтически приемлемым носителем, а в случае необходимости с диспергирующим веществом, размельчающим (расщепляющим) веществом, стабилизирующим веществом и т.д, При необходимости можно добавить подслащивающие вещества, красители и т,д, Процентное содержание активного продукта в фармацевтических составах может изменяться в широких пределах, s зависимости от пациента и способа введения, в частности, в за5 висимости от частоты введения, Что касается ежедневной дозировки, то она может изменяться в пределах от единичных доз, например, от 0,1 до 2 г активнос ro продукта, в зависимости от способа

10 введения. Так, например, она может составлять от 0,25 до 0,75 г предпочтительно 0,5 г от одного до трех раз в день, когда соединение принимают в виде таблеток.

8 качестве примера, не ограничиваю15 щего композиции, содержащей соединение формулы I, .которая может быть введена оральным путем, можно привести следующий состав для таблеток:

Соединение 2 250 мг

20 Метил целлюлоза (Methocel К4М) 200 мг

Сухая лактоза 154 мг

Аэрозиль 5мг

Безводная лимонная

25 кисл.ота

Тальк

Стеарат магния

60 мг

11мг

20 мг

Формула изобретения

30 Способ получения N-(4-морфолино-6пропил-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамидов или бензамирв вобщей формулы о — -1-и

И и бН2бн СН3 где R> — водород или С вЂ” Ь4-алкил;

В2 — С1 — С4-алкил, фенил или бензил, или их нетоксичных фармацевтически при40 емлемых кислых солей, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что 2-амино-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин общей формулы

М „rRi

; - =г -,.„

®2®2 З где R1 имеет указанные значения, подвергают взаимодействию с эквимоляр50 ным количеством соединения общей формулы

На1СОВ2, где Rz имеет указанные значения;

HaI — галоген, 55 и в случае необходимости„полученный целевой продукт превращают в нетоксичную фармацевтически приемлемую кислую соль, 1838312

Таблица 1

Т.п., C

Методика Выход, % примера

Соединение

Заместитель P

Рез льтаты фактический расчетный

NHCOCHzCsHg

2,1

51,3

110-113

ЙНСОСН(СНф

2;1

34,3

141

Й(СНз)СОСНз

60 — 61

5а

2,1

34,8

5b (I)*

И(СНЗ)СОСНЭ

104-105

2,1

75,5

И(СНЗ)СОСН(СН3)

36-37

2,1

38,5 й(СНЗ)СОС6Н5

7 0)*

2,2

122

46,5

* (1) хлоргидрат, Таблица 2

Потенциализация холинергических эффектов оксотреморина

2-P-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазины

С 63,34

Н 6,74

20,52

С 57,34

Н 7,85

23,89

С 55,91

H 7,53

25,09

С 49,44

Н 6,97

22,19

С 58,62

Н 8,16

22,80

С 57,22

Н 6,36

18,54

63,18

6.85

20,55

56,84

7,84

23,70

56,02

7,57

25,05

48,78 . 7,01

22,43

58,78

8,33

22,62

56,78

6,40

18,28 1838312

ТаблицаЗ

Ингибирование гиперактивности, вызванное скополамином

Таблица 4

Ингибирование эффекта скополамина на полосе от 6,4 до 9,6 Гц ЭЭГ

Таблица 5

1838312

Таблица 6

Составитель Г. Коннова

Техред M. Моргентал Корректор С. Патрушева

Редактор

Производственно-издательский комбинат ".Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 2900 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5