Способ прогнозирования бесплодия у мужчин

 

(19) RU (11) (51) 5 0 01 Я ЗЗ 53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

К ПАТЕНТУ

Комитет Российской Федерации ио патентам и товарным знакам (2t) 4944574/14 (22) 14.06.91 (46) ЭОЛ0.93 Бюл. Йд 39 — 40 (71) Ростовский медицинский институт (72) Коган М.И.; Сизякин ДВ.; Коненков В.И.

P3) Сизякин Дмитрий Владимирович (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ БЕСПЛОДИЯ У МУЖЧИН (57) Изобретение относится к медицине, преимущественно к урологии и иммунологии, и может быть применено для прогнозирования развития бесплодия. Цель изобретения — повышение точности и упрощение определения бесплодия при варикоцеле. Сущность предлагаемого способа заключается в том, что исследуется венозная кровь больного варикоцеле. В крови определяют антигены HLA системы и по обнаружению в ней антигена А и от1 сутствию антигенов А и С прогнозируют высокий

9 3 риск развития иммунопатологического компонента бесплодия при варикоцеле. Предлагаемый способ прост, легко осуществим в лаборатории, не требует дорогостоящего оборудования, а главное в отличие от уже имеющихся методов направлен на прогнозирование развития бесплодия. 1 табп

2002267 неполну|о удовлетворенность от проведенного оперативного лечения.

Учитывая. что варикоцеле выявляется, как правило, у молодь х мужчин, и то. что 50 аарикоцеле в ряде случаев осложняется бесплодием, с i ановится очевидным необходипрогнозирования бесплодия наиболее ранние сроки, при выявлении заболевания.

Проведенными исследованиями патентной и научно-медицинской литературы выявлен ряд способов диагностики мужского бесплодия, в частности при варикоцеле, м

Описан способ диагностики иммунологиче- м

Изобретение относится к медицине, преимущественно к урологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития бесплодия, в частности. при варикоцеле.

Проблема диагностики и лечения бесплодия у мужчин является одной из серьезнейших и социально значимых задач здравоохранения, Бесплодный брак ведет к разрушению семей, часто чреват различными психогенными нарушениями, отрицательно сказывается на демографической картине,"К мужскому бесплодию ведет множество причин, одной из которых является варикоцеле, которое сравнительно часто встречается и проявляется следующими симптомами; болями в мошонке, увеличением и отвисанием половины мошонки, чаще слева, гипотрофией яичек. Различают 3 стадии заболевания: 1 стадия — варикоз вен выявляют только пальпаторно при натуживании больного в вертикальном положении тела; 2 стадия — имеется четко определяемое визуально расширение вен, но размеры и консистенция яичка не изменены; 3 стадия — на фоне выраженной дилятации вен гроздьевиднога сг|летения отмечаются явное уменьшение и дряблость яичка. В настоящее время тактика лечения больных, страдаю;цих варикоцеле — оперативная.

Одним из наиболее тяжелых осложне:;viA варикоцеле является развитие бесплодия у 20 — 15Я, мужчин. В основе развития бс- сплодля при варикоцеле лежат различные механизмы: гипоксия и гипертермия семенников рефлюкс токсических мета-болитов и гормонов из надпочечника в яичкову|о вену; формирование иммунопатологического компонента, При варикоцеле, осложненном бесплодием, в послеоперационном периоде проводится курс консервативной терапии.

Однако восстановление фертильности в послеоперационном периоде наблюдается в небольшом проценте случаев, что вызывает

40 а5 ского бесплодия, заключающийся в том, что лимфоциты больного инкубируются с живыми аллогенными сперматозоидами в течение 60-90 мин, после чего подсчитывают число лимфоцитов, вошедших в контакт со сперматозоидами, По наличию сенсибилизации лимфоцитов к сперматозоидам диагностируют бесплодие. Недостатками способа являются необходимость постоянного наличия и использования экспериментальных животных, получение аллогенных сперматозоидов крыс, субъективность количественной оценки при подсчете в камере

Горяева.

В работе Л, В. Посисеевой, Ю, С. Татаринова, В. Н. Городкова и других описан способ определения фертильности мужчин, заключающийся в определении плацентарного микроглобулина в сперме, и при его уровне 16 мкг/мл и ниже определяют сниженную фертильность. Однако для осуществления этого способа необходимы полиэтиленовая матрица, сложные реактивы, в частности антисыворотка против плацентарного микроглобулина, что существенно затрудняет практическое применение этого способа.

В работе Г. П, Денисова, А. В. Пешкова и других предложено проводить цитофотометрию зякулята, разведенного физиологическим раствором с последующим определением по гистограмме количества сперматозоидов и по изменению величины максимального пика на гистограмме диагностировать бесплодие. Однако для осуществления этого метода необходимы лазерный проточный счетчик-анализатор микрочастиц, ЭВМ-обработка диаграмм, что делает этот метод крайне сложным и трудно применимым в практическом здравоохранении.

Прототипом изобретения является способ, описанный М. И. Ухалем, М. А. Гончаром и Т. М. Вишневской, в котором определяется иммунопатологический фактор олиго-зооспермии у больных простатитом и веэикулитом, Сущность способа заключается в том, что с целью диагностики бесплодия в семенной жидкости и непосредст вен но на сперматозоидах определяют иммунологлобулины А, М, 6 с помощью люминесцентных антител и при их наличии определяют иммунопатологический компонент бесплодия. Недостатком этого способа является необходимость сложного оборудования, реактивов, постановка ряда контролей для люминесцентных сывороток, необходиость получения семенной жидкости и сператозоидов.

2002267

Таким образом, все указанные способы направлены на диагностику уже имеющегося бесплодия, выявление сформировавшегося иммунопатологического фактора, но они не позволяют прогнозировать бесплодие при различных заболеваниях. когда бесплодия нет.

Целью изобретения является упрощение способа и повышение точности прогнозирования развития иммунопатологического компонента бесплодия.

Это достигается путем исследования крови, в которой определяют антигены HLA

10 системы и по обнаружению в ней антигена

А1 и отсутствию антигенов Ag и С3 про- 15 гнозируют высокий риск возникновения иммунопатологического компонента бесплодия при варикоцеле.

Описание способа.

Кровь, взятую из локтевой вены больно- 20

ro в количестве 2 мл, дефибринируют, из нее выделяют лимфоциты на градиенте плотности (1,077) фиколл — верографина. Концентрацию лимфоцитов доводят до

2-4 10 /мл, раскапывают типирующие сы- 25

6 воротки и лимфоцитарную взвесь микрошприцом Тарассаки ¹ 705 в планшеты и инкубируют при 22 С в течение 1 ч, 8 каждую лунку добавляют 1 мл 5 -ного зозина, через 2-3 мин закапывают 4 мкл 17%-ного 30 раствора формалина. реакцию учитывают через 10 мин под микроскопом (ОК,х 7 об.х х20). При выявлении в фенотипе антигена А> в сочетании с отсутствием антигенов Ag и С3 прогнозируют высокий риск развития имму- 35 нопатологического компонента бесплодия.

Проанализирована частота распределения антигенов HLA у здоровых доноров (600 человек), больных варикоцеле, осложненным бесплодием (27 человек), и больных ва- 40 рикоцеле, не осложенным бесплодием (10 человек). Результаты проведенной статистической обработки с использованием непараметрического критерия Фишера выявили статистически достоверные отли.- 45 чия в содержании антигенов HLA А, Ag и С3 у больных варикоцеле. осложненным бесплодием (таблица).

Таким образом, у больных варикоцеле с бесплодием отмечается существенное уве- 50 личение частоты антигена А1, сочетающееся с отсутствием в фенотипе антигенов А9 и Сз, по сравнению са здоровыми донорами и больными варикоцеле без бесплодия. Нали-.

we укаэанных изменений в фенотипе явля- 55 ется предрасполагающим моментом развития иммунопатологического компонента, приводящего к бесплодию при варико целе.

Пример 1, Больной С, 16 лет, поступил в урологическую клинику по направлению райвоенкомата с диагнозом: варикоцеле слева. При объективном осмотре: яички обычных размеров, гладко-эластичной консистенции, безболезненные при пальпации. По ходу левого семенного канатика определяются варикозно расширенные вены, прослеживающиеся до верхнего полюса яичка. Общие анализы беэ особенностей. Данные сперматограммы: объем 5,0, цвет белый, время разжижения

40 мин, запах специфический. рН 8,0, сперматозоиды количество 100 млнlмл, хорошо подвижных 71, слабо подвижных 18%, неподвижных 11, морфологич. изменения: с патологией головки 1 млн., лц нет. эр нет, реакция агглютинации отрицательная. Гормональный статус без особенностей, реакция микроспермоагглютинации отрицательная. При Н А типировании выявлены антигены: А9, 83, В г. Данный фенотип не прогнозирует высокий риск развития иммунологического бесплодия. Больному была выполнена операция Иваниссевича.

Пример 2, Больной Д. 17 лет, поступил в урологическую клинику с жалобами на выраженные боли в левой половине мошонки, усиливающееся после физической нагрузки. При осмотре больного выявлено наличие варикозно расширенных вен по ходу левого семенного канатика, несколько не доходящих до верхнего полюса лев. яичка.

Лабораторные исследования беэ патологических изменений, гормональный статус в пределах нормальных показателей, реакция микроспермоагглютинации — отрицательная. Сперматограмма: объем 4.5 мл, цвет белый, время разжижения 40 мин.. запах специфический. рН 7,8 сперматозоиды: количество 120 млн./мл, хорошо подвижных

73%, слабо подвижных 10, неподвижных

17%, клетки спермиогенеза единичные в поле зрения, лц 0-0 — 1х. эц нет. При HLA типировании выявлены следующие антигены: А1, В4, С1, Св, Больному установлен диагноз: варикоцеле слева и произведена операция

Иваниссевича.

8 дан ном случае у больного имеет место варикоцеле слева, не осложненное бесплодием в настоящий момент. однако, учитывая то, что в фенотипе больного Д. проявился антиген А1 при отсутствии Ag и Сз у больного прогнозируется высокий риск развития иммунопатологического компонента бесплодия, в связи с чем больному необходимо помимо оперативного лечения провести комплекс иммунареабилитацион н ых мероприятий, направленных на предотвращение развития бесплодия.

2002267

50

Пример 3. Больной К. 26 лет, постуг, ил в урологическую клинику с жалобами на бесплодный брак в течение 3 лет, При объективном осмотре. яички обычных размеров, гладко-эластической консистенции, безболезненные при пальпации. По ходулевого семенного канатика пальпируется конгломерат расширенных вен, прослеживающийся до уровня середины левого яичка, уменьшающийся в горизонтальном положении больного.

Лабораторные данные: общие анализы крови и мочи в норме, анализ сока предстательной железы: лц 0-0-1х, зпителиальные клетки 2-3х, гонококки и трихомонады не обнаружены, прочая микрофлора нет, лецитиновые зерна незначительное количество, Сперматограмма: объем 3,2 мл, цвет белый, время разжижения 40 мин. запах специфический, рН 8.0, сперматозоиды: количество

28 млн/мл, хопошо подвижных 23%, слабо подвижных 26 $, неподвижных 51%; морфологические исследования: с патологией головки 6 млн., с патологией шейки хвоста 3 млн., лц 0-0-1х, зц нет, клетки спермиогенеза единичные в поле зрения, проба Кунина на резистентнасть положительная, лецитиновые зерна небольшое количество, аггл ютинация спермиев - ++, Гормональный статус. ЛГ 6,0 мед/мл (1,6-12,5), ФСГ 3,5 д /мл (3,4 — 15,8), тестостерон 8,7 нгlмл (2 — 10), пролактин 86 мкМЕ/мл. Реакция микроспермаагглютинации — титр 1;32 положительная, Больному установлен диагноз: варикоцеле слева, бесплодие в браке 3 года, алигоастенозооспермия, Выполнение операция

Иваниссевича, биопсия тестикул. При гистоанализе выявлена: отек стрсмы яичка, очаговый некраз сперматагенного эпителия, незначительное расширение просвета семенных канальцев, во многих канальцах сперматогенез прослеживается да зрелых форм. Клетки Лейцига не изменены, При HLA типировании лейкоцитов крови больного по указанной выше методике, по локусам А, В, С выявлены антигены Н1 А:

А1, Аг, Вз, H>z. Таким образом, в его фенотипе был оанаружен А1 flpH отсутствии А9, Сз, Больному в течение года проводилось лечение; курс клостильбегида, 2 курса прафази, однако положительного аффекта достигнуто не было. Сперматограмма, выполненная через 13 месяцев после оперативного лечения: обьем 4,0 мл, цвет белый, время разжижения 40 мин. залах специфический рН 7,4, сперматозоиды, количество 22 млн/мл, хорошо подвижных 18Я„слабо подвижных 21 о(, неподвижных 61 о4 морфологические исследования с патологией головки 4 млн„с патологией шейки хвата 5 млн., лц нет, зц нет, клетки спермиогенеза единичные в препарате, проба Кунина на резистентность отрицательная, лецитиновые зерна незначительное количество агглюти на ция с перми ев ++, Гарма нал ьный статус: ЛГ 6,5 МЕ/мл (1,6-12,5). ФСГ 4,0 ,и /мл (3,4 — 15,8), тестостерон 8 — 9 нг/мл (2-10), пролактин 80 мкУЕ/мл, Таким обра30l4, j больного с помощью HLA TMfl11p083ния был выявлен высокий риск возникновения иммунопатологического компонента бесплодия, которое у больного развилось, Иммунапатологический характер его доказан другими исследованиями (реакция микраспермаагглютинации), а традиционные методы лечения положительнога эффекта не дали.

Пример 4. Больной Г. 31 гад, поступил в уралогическую клинику с жалобами на бали в левой половине мошонки. В анамнезе больного 1 ребенок, родившийся б месяцев назад. При клиническом обследовании у бального по ходу левого семенного канатика при нахождении больного в вертикальном положении пальпируется конгломерат извитых вен, доходящий да верхнего полюса левага яичка, исчезающий в горизонтальном положении бального.

Лабораторные анализы: общие анализы крови и мочи в норме, анализ сока простаты: лц О-Π— 1х, эпителий 1 — Зх, ганакакки и трихамонады нет., патогенная микрафлора не выявлена, лецитинсвые зерна в значительном количестве. Сперматограмма: объем 4 мл. цвет белый, время разжижения 40 мин, запах специфический, рН 8.2, сперматазаиды: количество 70 млнlмл, хорошо подвижных 69%. слабо подвижных 19/;, неподвижных 12 Д; морфологические исследования: с патологией головки 1 млн, с патолагией хвоста нет, лц 1-2х, зц нет, клетки спермиогенеза единичные в Х, проба Кунина отрицательная, лецитиновые зерна незначительноее количество, агглютинация спермиев отрицательная, Гормональный статус: ЛГ 3,8 МЕ/мл (1,6-12,5), ФСГ

3,9,и /мл (3,4--15,8), тестостерон 10,4 нг/Nf (2 — 10), пролактин 354 мкМЕ/мл. Реакция ми крас пермааггл аистинации отрицательная

Больному установлен диагноз: варикоцеле слева, и в связи с выраженным болевым синдромом сделана операция

Иваниссевича. При HLA типировании лейкоцитав были выявлены следующие антигены:

А2, Вв, С2. Па их составу иммунопатологического бесплодия у больного не прогнозируется, Фертильнасть у больного сохранена

2002267 (56) Авторское свидетельство СССР

10 М 1173985, кл, G 01 N 33/53. 1985.

Распределение антигенов HLA у здоровых и больных варикоцеле

Составитель Д. Сизякин

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М. Максимишинец

Редактор Л. Павлова

Заказ 3172

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4l5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина. 101 (рождение ребенка 6 месяцев назад, нормальные показатели сперматограммы).

Таким образом, анализ приведенных данных в примере подтвердили прямую и сильную зависимость развития иммунопатологического компонента бесплодия от фенотипа HLA системы у больных варикоцеле.

Заявляемый способ по сравнению с имеющимися позволяет прогнозировать развитие иммунопатологического компоФормула изобретения

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ БЕСПЛОДИЯ У МУЖЧИН путем исследования организма, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения нента бесплодия в ранние сроки при выявлении варикоцеле. Способ боле прост и не требует сложного медицинского оборудования и дефицитных реактивов. Апробация

5 предлагаемого способа проведена в урологическом и андрологическом отделениях

БСМП N. 2 им. В. И. Ленина, определения бесплодия при варикоцеле, исследуют комплекс анти генов системы

HLA и при выявлении в фенотипе А1 и от сутствии антигенов Ag и Сз прогнозируют бесплодие.