Способ стимуляции посттравматической частичной регенерации хвоста и конечностей у млекопитающих

 

Способ относится к биологии, а именно к экспериментальной медицине, и может быть использован для изучения патогенеза регенерации. Цель - повышение воспроизводимости путем стандартизации условий стимулирования. Сущность изобретения состоит в том, что поврежденный орган заключают на 10 - 12 дней в капсулу, заполненную 0,2%-ным раствором трипсина, который меняют через равные промежутки времени. Положительный эффект способа состоит в том, что достигают более выраженной стимуляции регенерации по сравнению с прототипом.

Изобретение относится к биологии, а именно к экспериментальной медицине.

Известен способ лечения гнойных и длительно незаживающих ран с использованием протеолитических ферментов в эксперименте. Крысам наносили рану площадью 250 см² в межлопаточной области. Для стимуляции заживления опытным животным 1 раз в сутки накладывали на рану марлевые повязки, смоченные 0,2% -ным раствором трипсина или суспензией иммобилизованного трипсина-профезима. Продолжительность стимуляции определялась сроками полного заживления раны. В результате было установлено, что в опытных группах животных эпителизация кожного дефекта наступает быстрее, чем в контроле. Однако, этот способ не позволяет создать у всех животных одинаковые условия протекания процесса заживления ран, так как степень контакта влажной марлевой салфетки с различными участками раневой поверхности и скорость ее подсыхания будут варьировать. Кроме того, ежедневная смена повязки сопровождается дополнительным механическим травмированием раневой поверхности. Отмеченные недостатки не позволяют использовать указанный способ в качестве модели посттравматической регенерации наружных органов у млекопитающих, поскольку он не обеспечивает полную воспроизводимость результатов.

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ стимуляции регенерации наружных органов (хвост, конечности) у 2-дневных крысят, заключающийся в том, что раневую поверхность культи погружают на 3-5 мин в раствор хлористого кальция и посыпают кристаллическим трипсином 5-6 раз в сутки в течение 15 дней. Результаты проведенных исследований с применением этого способа стимуляции показали, что у опытных животных при ампутации хвоста восстановление недостающей части позвонка происходит в 100% случаев, а при ампутации задней конечности выше дистального эпифиза бедра - хрящ на конце костной культи сформировался только в 33,3% случаев.

Отсутствие полной воспроизводимости результатов при использовании способа-прототипа обусловлено тем, что он не позволяет создать у всех опытных животных одинаковые условия протекания процесса регенерации, поскольку концентрация трипсина в различных участках раневой поверхности неодинакова, время воздействия трипсина на раневую поверхность у всех животных различное и зависит от случайных факторов (осыпание, слизывание животными и т.п.), а также не устранено дополнительное механическое и ферментативное воздействие на раневую поверхность в результате зализывания животными раневого дефекта.

Целью изобретения является повышение воспроизводимости результатов моделирования посттравматической регенерации наружных органов у млекопитающих.

Указанная цель достигается тем, что в заявляемом способе обеспечивается стандартизация условий течения регенерационного процесса путем постоянного омывания раневой поверхности поврежденного органа раствором трипсина в течение 10-12 дней с периодической заменой его через равные промежутки времени.

Заявляемое техническое решение отличается от прототипа тем, что в нем стандартизованы условия протекания посттравматической регенерации наружных органов - постоянное омывание всей раневой поверхности раствором трипсина заданной концентрации в течение определенного времени.

П р и м е р 1. У 15 (10 опытных и 5 контрольных) двухдневных белых беспородных крысят ампутировали кончик хвоста длиной 3 мм. После остановки кровотечения хвост у опытных животных заключали в герметичную капсулу емкостью 1,5 мл, заполненную 0,2%-ным трипсином в физиологическом растворе. Смена раствора производилась через каждые 3 ч. Стимуляция продолжалась у одной половины опытных животных 7-9 сут, а у второй половины - 10-12 сут. Контрольные животные никаким воздействиям не подвергались. При гистологическом анализе ампутированных кончиков хвостов было установлено, что линия ампутации у всех животных проходит через тело позвонка.

Результаты. Через месяц в контрольной группе животных ни в одном из 5 случаев ампутирования часть позвонка не восстановилась. В опыте при стимуляции раствором трипсина в течение 7-9 сут полное восстановление поврежденного позвонка произошло у четырех крысят из пяти (80% случаев), а при стимуляции в течение 10-12 сут - у пяти крысят (100% случаев).

П р и м е р 2. У 20 (12 опытных и 8 контрольных) белых беспородных крысят в возрасте 21 дня ампутировали при помощи ножниц 2/3 концевой фаланги среднего пальца задней конечности. Срез производился перпендикулярно продольной оси фаланги пальца. После остановки кровотечения конечность у опытных животных заключали в герметичную капсулу емкость 1 мл, заполненную 0,2%-ным трипсином в физиологическом растворе. Смена раствора производилась через каждые 3 ч. Стимуляция осуществлялась в течение 10-12 сут. У контрольных животных раневая поверхность никаким воздействиям не подвергалась.

Результаты. Через 36 дней после операции у всех опытных животных на ампутированной фаланге сформировался хорошо развитый коготок. В контрольной группе животных коготок в виде небольших бугорков развился лишь у 4-х крысят (50% случаев).

П р и м е р 3. У 20 (10 опытных и 10 контрольных) белых беспородных крысят в возрасте 21 дня удален циркулярный полнослойный лоскут кожи шириной 5 мм на хвосте на расстоянии 1,5 см от его конца. После остановки кровотечения хвост у опытных животных заключали в герметичную капсулу емкостью 1,5 мл, заполненную 0,2%-ным трипсином в физиологическом растворе. Смена раствора производилась через каждые 3 ч. Продолжительность стимуляции 10-12 сут. Контрольные животные никаким воздействиям не подвергались.

Результаты. У всех опытных крысят к концу месяца произошло полное закрытие кожного дефекта. В контрольной группе животных в 100% случаев наблюдался некроз кончика хвоста на 7-10-е сут после операции.

Формула изобретения

СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОЙ ЧАСТИЧНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ ХВОСТА И КОНЕЧНОСТЕЙ У МЛЕКОПИТАЮЩИХ, включающий резекцию органа и использование трипсина, отличающийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости путем стандартизации условий стимулирования, резерцированный орган помещают в 0,2% -ный раствор трипсина на 10 - 12 сут, при этом его концентрацию постоянно поддерживают.