Способ стимулирования роста паренхиматозной ткани молочной железы животного

 

Использование: в ветеринарии, в частности при способах стимулирования роста паренхиматозной ткани молочной железы. Сущность изобретения: способ предусматривает введение через сосковый канал физиологического раствора гормонального вещества, представляющего собой эпидермальный и/или инсулиноподобный фактор роста, или соматропин, или простагландин, или трансформирующий фактор роста, или бычий лактоген. В качестве физиологически приемлемого экпициента используют масло или его эмульсию с соляным раствором. Введение осуществляют в период беременности или между началом полового созревания и первой беременностью 1 - 20-кратно с интервалом 1-10 дней в количестве 2,5 - 250 мг гормонального вещества, растворенного в объеме экпициента от 2,5 до 10 мл на одно отверстие соска. Общая вводимая доза составляет 25-5000 мг гормонального вещества, растворенного в 25-400 мл экпициента. 23 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к ветеринарии.

Цель изобретения повышение эффективности способа.

Изобретение характеризуется следующими примерами.

А. Эпидермальные факторы роста.

П р и м е р ы 1-2. 12 беременных нелактирующих коров кросс-бреды мясной породы последние 40-80 дней беременности находятся в бесстойловом содержании, их кормят рационом из сена люцерны и гранулированного концентрата и вводят 10 мл экципиента (неполный адъювант Фрeйнда, эмульгированный в равном объеме 0,9% стерильного солевого раствора) в каждую четверть вымени путем инфузии в молочную железу через сосочный канал на 1,3,5,7 и 9 день этого исследования. Инфузии проводят с использованием пластиковой канюли для инфузии в сосок длиной 3,2 см приблизительно 12 калибра с тупым опрокидывающимся концом.

Поскольку передняя и задняя половины вымени имеют неравные размеры, обработка для контрольных экспериментов была сделана между боковыми противоположными четвертями, а именно: передняя правая по отношению к передней левой и задняя правая по отношению к задней левой. Две четверти в каждой половине вымени были произвольно распределены между обработкой и ее контролем. При лечебных инфузиях используют экципиент, содержащий 25 мкг человеческого ЭФР (чЭФР), полученного от Г.Д.Сирлэжнд. Ко, Лтд, Англия (6 животных), или мышиного ЭФР (мЭФР), полученного от Коллаборатив Рисерч Корп. Лексингтон Ма (других 6 животных), чЭФР был приготовлен Сирлом путем экспрессии рекомбинантной ДНК и последующей дополнительной очистки путем фильтрации через фильтр 10000 МW для чистоты выше 90% как определено высоко эффективной жидкостной хроматографией. мЭРФ является культурой, Каталог N 40001 из подчелюстных слюнных желез мыши, его готовят по методу Саважа с сотр. 247, J.Biol chem. 7609 (1972) с чистотой 98% определенной на СДС-полиакриламидном геле.

До лечения соски каждого животного погружали в жидкость в течение 3 последовательных дней, каждый сосок был предварительно промыт 70%-ным этанолом в воде в день обработки. На 14-й день коров забивают и изымают их молочные железы. С каждого вымени (при необходимости из него сдаивают молоко) снимают кожу, разрезают вдоль средней подвешивающей связки, а затем на переднюю правую, переднюю левую, заднюю правую и заднюю левую части вымени. Каждую четверть вымени измельчают, гомогенизируют 200 г образца в 4-кратном объеме воды и измеряют общий объем каждого гомогената.

Для определения сухой массы каждой четверти вымени, помещают три аликвоты по 10 мл 1:5 разбавленного гомогената в предварительно взвешенную ванночку, сушат в течение ночи при 60^оС, а затем сушат и взвешивают до постоянной величины.

Для определения сухого веса обезжиренной ткани каждой четверти вымени экстрагируют три аликвоты по 5 мл неразбавленного гомогената по методу Андресона, 41 J. Anem. Sci 118 (1985) с тем исключением, что образцы помещают в предварительно взвешенные стеклянные центрифужные трубки 25х150 мм и экстрагируют в течение ночи 10 мл смеси этанол:эфир (3:1), затем центрифугируют (5 мин при 500 об/мин) и отсасывают надосадочный слой, для второй экстракции прибавляют дополнительно 10 мл аликвота этанол:эфир и сушат образец в атмосфере азота до постоянной массы.

Определяют ДНК в каждой четверти вымени по методу Буртона, 12В Methods in Enzymol 163-66 (1968), используя аналитический раствор 15%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУК) в 2 н. HCl. В этих определениях аликвоты гомогената железы разбавляют водой 1:5 и повторно гомогенизируют. Используя трипликат 0,25 мл или 0,5 мл аликвот этих гомогенатов, каждый аликвот смешивают с 2 мл аналитического раствoра. Через 30 мин образцы центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин и полученные шарики промывают 2 мл 10%-ного раствора ТХУК в дистиллированной воде. После повторного центрифугирования полученные в результате шарики разбивают в 2 мл 0,5 н. хлорной кислоты и нагревают 30 мин при 70^оС для экстракции ДНК. Образцы центрифугируют и 1 мл каждого надосадочного слоя помещают в трубку 12х75 мм. После добавления 2 мл раствора 1,5 г дифениламина и 1,5 мл H₂SO₄ в 100 мл ледяной уксусной кислоты (и 0,1 мл 1,6%-ного водного ацетальдегида на 20 мл реагента непосредственно перед использованием) образцы взмучивают и инкубируют в течение ночи при 27^оС. Стандартом является ДНК тимуса коровы.

Результаты приведены в табл. 1 и 2.

Как видно из табл. 1 и 2, четверти вымени, в которые инфузировали чЭФР или мЭФР, были значительно больше и в них содержится больше ДНК, чем в контрольных четвертях с противоположной стороны, которые получали только экципиент и при обычно высоких уровнях статической значимости.

П р и м е р ы 3-6. Делят на 4 группы по 6 животных в каждой 24 беременных нелактирующих кросс-бродов мяcных коров. Влияние инфузии внутрь молочной железы человеческого ЭФР на четверть вымени у этих животных определялось по методике примера 1 с тем исключением, что (А) в качестве экципиента для грппы 1 использовали эмульсию Фрейнда, а для групп 2, 3 и 4 использовали эмульсию, содержащую 60 ч. кунжутового масла и 40 ч. 0,9%-ного стерильного солевого раствора для инъекций, содержащего 0,5% Твин-20, и (В) количество чЭФР, включенного в каждую обработку инфузией составляло 25 мкг для групп 1 и 2; 2,5 мкг для группы 3 и 250 мкг для группы 4. Определение ДНК проводили по методике примеров 1 и 2 с тем исключением, что начальный трипликат 0,5 аликвот гомогената экстрагируют 2 мл смеси этанол-эфир (3:1) в течение 1 ч, центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин, промывают 2 мл 70%-ного этанола в течение 10 мин, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин и отсасывают этанол перед смешиванием каждого аликвота с раствором ТХУК. Результаты для групп 1-4 приведены в табл. 3-6 соответственно.

Как видно из табл. 3-6, четверти вымени, инфузированные чЭФР, обычно значительно тяжелее и содержат больше ДНК, чем четверти с противоположных сторон, которые получали только экципиент.

П р и м е р ы 7-8. Произвольно разбивают на 3 группы по 8 животных в каждой 24 беременных нелактирующих кросс-бредов мясных коров. Действие инфузии внутрь вымени человеческого ЭФР на четверти вымени у этих животных определяли, как описано в примерах 1-2, но с тем исключением, что количество чЭФР, включенное в каждую обработку инфузией, составляло 25 мкг для группы 1, 250 мкг для группы 2 и 2,5 мкг для группы 3. Определяли массу железы и ДНК по методике примеров 1-2. Результаты при низкой дозе были смазаны набуханием некоторых желез (группа 3).

Результаты групп 1 и 2 приведены в табл. 7 и 8 соответственно.

Как видно из табл. 7-8, четверти вымени, инфузированные чЭФР, были тяжелее, чем четверти вымени с противоположных сторон, которые получали только экципиент.

П р и м е р 9. 48 беременных первотелок голштинской породы на протяжении последних 40 дней (приблизительно) выдерживали в загонах беспривязного типа, и для их откорма использовали рацион на основе люцернового сена и гранулированного концентрата. В каждую четверть вымени вводили 10 мл экципиента путем вливания в железу через молоковыводящий канал каждые три дня вплоть до отела, за исключением одного животного, которое обрабатывали человеческим ЭФР по описанной в этом примере методике всего лишь до срока, отстоящего от срока отела на 15 дней. Вливание проводили, используя пластиковую канюлю для сосковых вливаний длиной 3,2 см, калибром приблизительно 12 с тупым концом, полученную от фирмы "Иоргенсен лэборотриз", г. Лавлэнд, шт. Колорадо. Животные произвольно относили к каждой из следующих четырех групп обработки (по 12 животных каждая): (А) 250 мкг человеческого ЭФР, полученного от фирмы "Дж. Д.Сирл", Великобритания, солюбилизированного (62,5 мкг/мл) в стерильном 0,9% -ном солевом физиологическом растворе для инъекции, содержащем 0,5% "Твина-20", с последующим эмульгированием непосредственно перед употреблением в стерильном кунжутном масле, содержащем 5% "Арлацела А" (маннид-моноолеат) (3:2 масло физиологический раствор) при окончательной концентрации 25 мкг/мл чЭФР в эксципиент; (В) 250 мкг бычьего ИФР-1, полученного по методике примеров 14-16, очищенного, а затем солюбилизированного по методике, описанной в чЭФР; (С) 50 мг N-метионилового бычьего соматотропина (BST), полученного по методике примеров 40-41, с последующим разбавлением до 10 мг/мл в стерильном кунжутном масле; (D) контроль, использующий один лишь экципент (стерильное кунжутное масло).

У каждого животного все 4 четверти вымени получали обработку одного типа. Каждое вымя опрыскивали 70%-ным этанолом и вытирали насухо до обработки, затем после обработки погружали в раствор иода. Во время отела 4 животных из каждой группы обработки забивали и их молочные железы удаляли для проведения анализа, остальных 8 животных из каждой группы доили обычным образом утром и вечером на протяжении первых 105 дней лактации.

В течение этих 105 дней животное, получившее чЭФР вплоть до срока, за 15 дней до отела, давало в среднем на 9,6 кг молока в сутки (34,8%) больше, чем в среднем по группе из 8 контрольных коров. В среднем надой от коров, проходивших обработку до отела, не превышал надой от контрольных коров.

В. Инсулиноподобне факторы роста.

П р и м е р ы 10-12. 24 беременных, нелактирующих кросс-бредов мясных коров в течение последних 40-80 ней беременности содержат беспривязно, кормят сеном люцерны и гранулированным концентратом, им вводят 10 мл экципиента (эмульсии кунжутного масла того же типа, что использовано в примерах 4-6) в каждую четверть вымени с помощью внутривыменной инфузии через канал соска на 1, 3, 5, 7 и 9 дни этого исследования. Техника инфузии произвольно выбранных четвертей вымени для контрольной обработки и обработки по сравнению с контролем соответствует методике примеров 1 и 2.

При обработке инфузией вводят экципиент, содержащий бычий инсулиноподобный фактор роста-1 (БИФП-1), полученный экспрессией в Е.coli/Prla штамм 079 (рекомбинантной ДНК, кодирующей БИФР-1, сплавленный с "laм" сигнальной последовательности белковой стенки клетки В, секреции в периплазматическое пространство Е. Coli и извлечение), очистку проводят традиционными методами, включая гель-фильтрацию, катионный объем и высоко эффективную жидкостную хроматографию на обратимой фазе. Этот БИФР-1 имеет аминокислотную последовательность и вторичную структуру, как АМген человеческого ИФР-1, использованного в примере 13. В стандартных определениях миобласта L6 ИФР-1 его активность является по существу такой же (90-123%), какую показал в примере 13 чИФР. Количество БИФР-1 в каждой инфузии: группа 1 2,5 мкг, группа 2 25 мкг, группа 3 250 мкг. Животные были подготовлены и инфузированы, была определена масса четвертой части вымени и ДНК по методике примеров 3-6. Результаты для группы 1 приведены в табл. 9.

В этом исследовании две более высокие дозы БИФР-1 (группы 2-3) не вызывают значительного увеличения роста при обработке четвертей вымени по сравнению с контролем. Однако наблюдался значительный рост неинфузированных четвертей. При повторении процедур, описанных для групп 1-3, результаты остаются практически такими же. Объединяя результаты первоначального исследования и его повтора, было отмечено, что как обработка, так и контроль показывают следующий рост четвертей вымени (см. табл.10).

Показанное увеличение роста контрольных четвертей вымени происходит даже несмотря на то, что уровни БИФР-1 в плазме не увеличивались во время исследования.

Результаты по существу такие же, когда эти тесты повторяли с использованием других беременных нелактирующих мясных коров, сгруппированных на основе практически равных начальных объемов вымени, которые меняются по возможности сильно от этих результатов испытаний.

П р и м е р 13. Когда молочным или мясным телкам или беременным коровам инфузируют суммарно от 125 до 12,5 мг бычьего инсулиноподобного фактора-11 роста, очищенного практически от всех других бычьих пептидов, результаты являются практически такими же, как в примерах 10-12 значительное увеличение массы и ДНК в обработанных четвертях вымени.

С. Сочетание ИФР и ЭФР.

П р и м е р 14. 30 смешанно-бредных овец в течение последних 35-45 дней беременности кормили рационом из сена люцерны и кормов для овец и вводили им 2,5 мл экципиента (эмульсия Фрейнда того же типа, что и в примерах 1-2 для 15 овец, физиологический 0,9%-ный солевой раствор для других 15 овец) в каждую половину вымени путем инфузии в молочную железу через сосочный канал в 1,3,5, 7 и 9 дни этого исследования. Инфузии проводят с использованием тефлоновых капсул длиной 3,2 см, калибр 16 с тупым опрокидывающимся концом, полученным от Ч.Р.Бард, Инк. А-Cath канюля для размещения постоянных катетеров.

Произвольно были выбраны половинки вымени для обработки, при которой экципиент содержит дополнительно 2,5 мкг мышинного ЭФР того же типа, что использован в примерах 1-2, и 2,5 мкг человеческого ИФР-1, полученного экспрессией рекомбинантной ДНК и дродаваемого АМген Байолоджикал Корп. Соузанд Аакс, СА (Каталог N 04111, группа 407, чистота более 90% по данным высоко эффективной жидкостной хроматографии). Другая половина вымени каждого животного является контрольной и в нее инфузируют только один экципиент. Перед обработкой соски каждого животного были погружены в течение 7 последовательных дней и каждый сосок был предварительно промыт 70%-ным этанолом в воде в день обработки.

На 13 день овец умерщвляют и извлекают их молочные железы С каждого вымени (при необходимости молоко сдаивают) снимают кожу и разделяют его вдоль средней связующей связки на правую и левую половины вымени. Каждую половину вымени гомогенизируют в 4-кратном объеме воды и измеряют общий объем каждого гомогената.

Для определения сухой массы каждой половинки вымени три 10 мл аликвота разбавленного 1:5 гомогената помещают в предварительно взвешенные ванночки, сушат в течение ночи при 60^оС, а затем сушат до постоянной массы.

Для определения массы сухой обезжиренной ткани каждой половинки вымени экстрагируют три 5 мл аликвота неразбавленных гомогенатов по методу Андерсена, 41 J. Anim. Sci. 118 (1975) с тем исключением, что образцы помещают в предварительно взвешенные стеклянные центрифужные трубки 25х165 мм и экстрагируют в течение ночи 10 мл смеси этанол:эфир (3:1), затем центрифугируют (5 мин при 500 об/мин) и отсасывают надосадочный слой, для второй экстракции прибавляют дополнительные 10 мл аликвота смеси этанол:эфир, и образец сушат в атмосфере азота и взвешивают до тех пор, пока не получат постоянную массу.

Определяют ДНК в каждой половинке вымени по методу Бартона, Biochemistry 63215 (1956), используя аналитический раствор 15%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУК) и 1 н. HCl. В этих определениях аликвоты гомогената железы оттаивают, разбавляют 1:5 водой и повторно гомогенизируют. Используя трипликат 0,5 мл аликвот этих моногенатов, каждый аликвот смешивают с 2 мл аналитического раствора. Через 30 мин образцы центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин и полученные шарики промывают 2 мл 10%-ного растворов ТХУК в дистиллированной воде. После повторного центрифугирования полученные шарики разрывают в 2 мл 0,5 н. хлорной кислоты и нагревают 30 мин при 70^оС для экстракции ДНК. Образцы центрифугируют и 1 мл каждого полученного в результате надосадочного слоя помещают в трубки 12х75 мм. После добавления 2 мл раствора 1,5 г дифениламина и 1,5 мл H₂SO₄ в 100 мл ледяной уксусной кислоты (и 0,1 мл 1,6% -ного водного ацетальдегида на 20 мл реагента непосредственно перед использованием) образцы взмучивают и инукубируют в течение ночи при 20^оС. Стандартом является ДНК тимуса коровы.

Результаты приведены в табл. 11.

П р и м е р 15. Испытывали 8 небеременных телок голштинской породы в возрасте около 18 мес. на влияние инфузии внутрь молочной железы сочетания бычьего ИФР-1 и человеческого ЭФР в соответствии с процедурами, использованными в примерах 10-12, с тем исключением, что (А) объем экципиента в каждой инфузии составлял 2,5 мл и (В) каждая инфузия содержала 6,25 мкг БИФР-1 и 625 мг чЭФР того же вида, что в примерах 10-12 и 1 и 2 соответственно. Результаты представлены в табл. 12.

Данные табл. 12 показывают, что масса влажной, сухой и обезжиренной четверти вымени голштинской телки, обработанной в соответствии с изобретением, значительно больше, чем четверти вымени с противоположной стороны, которые получали только экципиент при высоком уровне статистической достоверности.

П р и м е р 16. Определяют влияние инфузии внутрь молочной железы сочетания бычьего ИФР-1 и человеческого ЭФР на 8 беременных нелактирующих кросс-бредных мясных коровах в течение последних 40-80 дней их беременности по методикам, описанным в примерах 10-12. Каждая обработка инфузии содержит 25 мкг чЭФР того вида, что использован в примерах 1 и 2, и 250 мкг б-ИФР-1, того вида, что использована в примерах 10-12.

Результаты приведены в табл. 13.

Как видно из табл. 13, четверти вымени, получавшие сочетание б-ИФР-1 и чЭФР были значительно тяжелее и содержали больше ДНК, чем их контрольные четверти вымени с противоположной стороны при высоком уровне статистической достоверности.

П р и м е р ы 17-18. 18 беременных первотелок голштинской породы на протяжении последних 40-60 дней до ожидаемого срока отела содержали в загоне беспривязного типа на рационе из люцернового сена и гранулированного концентрата и им вводили 10 мл экципиента (стерильного кунжутного масла) в каждую четверть вымени путем вливания в молочную железу через молоковыводящий канал каждый третий день при указанном ниже числе обработок. Первотелок в группах 1 и 3 обрабатывали не позже, чем за пять дней до отела, обработки в группах 2 и 4 продолжали и в течение последних пяти дней. Обработки с употреблением митогенного вещества проводились в обе четверти вымени с одной стороны каждого животного. Только экципиент вводили в обе четверти вымени на противоположной стороне животного. Все вливания проводили с использованием инфузионной канюли (производства фирмы "Иоргенсен Лэборотриз"), использованного в примерах 1-2 типа. Каждый сосок опрыскивали 70%-ным этанолом и вытирали насухо перед обработкой, после обработки погружали в раствор иода.

Эти животные давали нормальные надои каждое утро и вечером в течение первых 30 дней после отела, причем надои молока регистрировали отдельно для каждой четверти вымени. В среднем надой молока из обработанной половины вымени в группе 2 не превышало аналогичных показателей для контрольной половины вымени.

Как показано в табл.15, четверти вымени, в которых вливали комбинацию чЭФР и ИФР-1 не позже, чем за пять дней до отела, давали в среднем больше молока, чем противоположные им четверти, получившие только экципиент.

Д. Соматотропины.

П р и м е р ы 19-20. Разделяют на 2 группы 24 беременных нелактирующих кросс-бредных мясных коров на последних 40-80 днях их беременности, испытывают влияние инфузии внутрь молочной железы по методикам примеров 3-6 с тем исключением, что (А) объем экципиента в каждой инфузии составлял 5 мл и (В) каждая обработка инфузией содержала 1% цинковой соли П-метионильного бычьего соматотропина (БСТ) (группа 1 100 мг, группа 2 2-40 мг) полученного экспрессией рекомбинантной и очищенной ДНК. Результаты приведены в табл. 16-17.

Данные табл. 16-17 показывают, что увеличение ДНК и массы сухой, влажной и обезжиренной четверти вымени у беременных мясных коров, обработанных в соответствии с изобретением, значительно больше, чем у четверти вымени с противоположной стороны, которая получала только один экципиент, различие между обработкой и контролем возрастает при высоких уровнях статистической достоверности.

П р и м е р ы 21-22. В табл. 18 представлены величины надоев, которые давали первотелки группы 3 по примерам 29-30. В среднем надои из половин вымени, обработанных в группе 4, несколько превышают аналогичный показатель для контрольных половин вымени (2% р < 0,4).

Как видно из табл. 18, инфузия четвертей вымени с использованием BST не позже, чем за пять суток до отела привела к выработке в среднем существенно большего количества молока, чем из противоположных (в боковом направлении) четвертей.

Е. Трансформирующие факторы роста.

П р и м е р ы 23-26. Когда мясным и молочным телкам или беременным коровам инфузируют с использованием методик и дозировок примеров 3-6 человеческий фактор трансформации роста альфа-типа, полученный от Бехем Инк, Файн Кемикалс, Торранс, СА (каталог PGRO-30), результаты являются по существу, такими же, а именно: существенное и статиcтически достоверное увеличение массы и ДНК обработанных четвертей вымени.

Влияние инфузии внутрь молочной железы бычьего трансформирующего фактора роста альфа-типа (ТФР-α ) на последующее выделение молока.

Семи беременным телкам голштинской породы 10-кратно ежедневно вводят бычий ТФР-α причем начинают с инфузиями 50 дней до предполагаемого рождения. Лиофилизованный ТФР-α растворяют в 10 мл экципиента (физиологический солевой раствор) и вводят в дозе 250 мкг на четверть вымени, как описано ранее. Контрольные животные и контрольные половины (обе четверти вымени, противоположные обработанным четвертям вымени) не обрабатывают. Выделение молока измеряют в течение 23 недель периода лактации.

Как показано в табл.19, в четвертях вымени телок, обработанных ТФР-α получают существенно более высокие надои молока по сравнению с необработанными.

Г. Факторы роста, произведенные от молочной железы (MDGF).

П р и м е р ы 27-30. Когда молочным или мясным телкам (либо беременным, либо небеременным) или беременным мясным или молочным коровам инфузирют в течение последних 25-60 дней их беременности с использованием методик и дозировок примеров 3-6 фактор роста MDGF₁ или MDGF₂, наблюдается существенное и статически достоверное увеличение массы и ДНК у обработанных четвертей вымени.

С. Инсулин.

П р и м е р ы 31-33. Когда молочных или мясных телок или беременных мясных или молочных коров инфузируют по методикам примеров 3-6, 25, 100 или 250 мг на инфузию бычьего инсулина поджелудочной железы, полученного из Сигма Кемикал Ко, Сент Луис, МО (Каталог 1-5500) результаты являются подобными, а именно, значительное и статистически достоверное увеличение массы и ДНК обработанных четвертей вымени.

Н. Плацентарные лактогены П р и м е р ы 34-36. Когда молочным или мясным телкам или беременным молочным или мясным коровам инфузируют по методикам примеров 3-6 суммарно 0,25, 10 или 250 мкг природного бычьего плацентарного лактогена, очищенного по методике Байтта, 119 Endocrin, 1343-50 (1986), получают очень похожие результаты, а именно: значительное и статистически достоверное увеличение массы и ДНК обработанных четвертей вымени.

Достигается усиление роста паренхиматозной ткани молочной железы, аналогичное обеспечиваемому соматотропином усилению (см. примеры 19-20). Исходя из биологической активности (например, связывание с рецептором соматотропина и усиление роста животного), бычий плацентарный лактоген здесь характеризуется как соматотропин-подобный пептид.

I. Простагландины.

П р и м е р ы 37-40. 24 беременных нелактирующих кросс-бредных коров мясной породы на протяжении последних 45-105 дней до отела содержали в загонах беспривязного типа на рационе люцернового сена и гранулированного концентрата. Им вводили 5 мл экципиента ("МСТ-масло", производство фирмы "Мид Джонсон корп. ", триглицерид со средней длиной цепи, который является липидной фракцией кокосового масла, содержащей из триглицеридов С₈ и С₁₀ жирных кислот: С₈ 67% С₁₀ 23% <С 6% >С₁₀ 4%) в каждую четверть вымени путем вливания в молочную железу через молоковыводящий проток на 1,3,5,7 и 9 день этого исследования. 48 передних и задних половин вымени были произвольно поделены на 4 группы, причем одну четверть каждой половины вымени обрабатывали, а ее противоположную (в боковом направлении) четверть вымени использовали в качестве контроля. При вливаниях в целях обработки экципиент содержал простагландин (РС) Е₁ или Е₂ фирмы "Сигма кемикл КО", Сан-Луи, шт. Миссури (каталожные N 86F-0406 и -0404). Количество РС в каждом вливании: группа 1 87,5 мкг продукта Е₂, группа 2 875 мкг продукта Е₂, группа 3 87,5 мкг продукта Е₁, группа 4 875 мкг продукта Е₁. Животных готовили и вливание проводили по методике примеров 17-18, эффект определяли по методике, описанной ранее, результаты для групп 1-4 приведены соответственно в табл. 20-23.

Как показано в табл. 20-23, четверти вымени, получающие простагландины, были устойчиво тяжелее и содержали больше ДНК, чем противоположные (в боковом правлении) контрольные четверти, получившие лишь экципиент.

Изобретение может быть использовано для обеспечения в соответствии с традиционно рассматриваемыми критериями увеличения паренхиматозной ткани молочной железы и соответствующей молочной продуктивности обработанных животных, которое будет сохраняться у животного в следующий период лактации.

Формула изобретения

СПОСОБ СТИМУЛИРОВАНИЯ РОСТА ПАРЕНХИМАТОЗНОЙ ТКАНИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЖИВОТНОГО путем введения через отверстия сосков и сосковый канал гормонального вещества, растворенного в эксципиенте, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности способа, в качестве гормонального вещества используют эпидермальный и/или инсулиноподобный факторы роста, или соматотропин, или простагландин, или трансформирующий фактор роста, или фактор роста, произведенный от молочной железы, или бычий плацентарный лактоген, а в качестве эксципиента используют физиологическое приемлемое масло или эмульсию масла и соляного раствора, причем введение осуществляют в период беременности или между началом полового созревания и первой беременностью 1 20 кратно с интервалом 1 10 дней в количестве от 2,5 мкг до 250 мг соответствующего гормонального вещества, растворенного в объеме эксципиента от 2,5 до 10 мл на одно отверстие соска, так что общая вводимая доза составляет от 25 мкг до 5000 мг гормонального вещества, растворенного в 25 800 мл эксципиента.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12