Способ посмертной диагностики острой ишемической недостаточности

 

Сущность изобретения: предлагаемый способ посмертной диагностики острой ишемической недостаточности путем определения активности ферментов и изоферментов в ткани сердца предусматривает выявление активности лактатдегидрогеназы, креатинкиназы и их изоферментов в 10 образцах ткани, полученных из различных отделов левого желудочка. О наличии острого ишемического повреждения кардиомиоцитов судят по степени различий в активности указанных ферментов и их изоферментов в исследованных образцах сердца. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности судебной, патологической анатомии и кардиологии и может быть использовано для посмертной диагностики острой ишемической болезни сердца.

Из известных способов диагностики смерти от ишемической болезни сердца (ИБС) наиболее близким к изобретению по сущности и достигаемому результату является способ, включающий исследование активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и ее изоферментов сердечной мышцы лиц, умерших скоропостижно от ИБС, и сопоставление полученных величин с активностью ЛДГ и ее изоферментов в миокарде трупов лиц, умерших от внесердечных причин механической травмы.

Недостатком указанного способа диагностики является то, что активность ЛДГ и ее изоферментный спектр в ткани миокарда определяется рядом факторов, не поддающихся строгому количественному учету. К ним относятся: падение активности ЛДГ и ее изоферментов в посмертном периоде, обусловленное активацией аутолитических процессов: прижизненное изменение активности ЛДГ и перестройка ее изоферментов в отдельных участках миокарда из-за хронически протекавших заболеваний сердечной мышцы, предшествовавших скоропостижной смерти; неодинаковая скорость падения активности ЛДГ и ее изоферментов в зависимости от условий хранения материала. К тому же, общая активность ЛДГ и отдельные ее изоферменты неодинаково реагируют на ишемическое повреждение кардиомиоцита общая активность ЛДГ и изофермент ЛДГ-2 могут снижаться, а ЛДГ-3 и ЛДГ-4, напротив увеличиваться. Все это приводит к тому, что достоверное изменение активности ЛДГ и ее изоферментов при использовании данного способа можно обнаружить только в зоне некроза, при этом не удается зафиксировать изменение этих показателей на донекротической стадии острого ишемического повреждения кардиомиоцитов при скоропостижной смерти.

Цель изобретения повышение точности способа диагностики.

Цель достигается тем, что согласно способу диагностики острого ишемического повреждения кардиомиоцита одновременно определяется активность двух "кардиоспецифичных" ферментов лактатдегидрогеназы, креатинкиназы и их изоферментов в 10 образцах ткани миокарда, взятых из 5 отделов левого желудочка. При этом величины активности используются для расчета показателя степени неоднородного распределения активности ферментов и изоферментов в левом желудочке (S₁), обусловленного ишемическим повреждением кардиомиоцитов сердечной мышцы, по формуле S_i=lE₁-E₂l+lE₂-E₃l+lE₃-E₄l+lE₄-E₅l+ +lE₅-E₆l+lE₆-E₇l+ lE₇-E₈l+lE₈-E₉l+lE₉-E₁₀l; где S_i показатель, характеризующий степень неоднородного распределения активности фермента или изофермента в ткани левого желудочка; Е активность фермента или изофермента; lE₁-E₂l абсолютное значение разности величин активности фермента в рядом расположенных участках левого желудочка; 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10 N исследованных участков сердечной мышцы.

Если величины S_i, обнаруженные при исследовании образцов миокарда лиц, умерших скоропостижно, превышали значения S_ср.ибс. и S_{ср.контр.} (получены при исследовании миокарда трупов лиц, умерших скоропостижно от ИБС S_ср.ибс. и погибших от несовместимых с жизнью повреждений S_{ср.контр.} по 10 наблюдений в каждой группе), то делался вывод о наличии в исследуемом миокарде острого ишемического повреждения кардиомиоцитов.

Способ осуществляли следующим образом.

На аутопсии из каждого сердца вырезали 10 кусочков по два (эпи- и эндокардиальная зоны) из области верхушки, переднего, бокового и заднего отделов левого желудочка по окружности, проходящей через середину расстояния между двустворчатым клапаном и верхушкой, по одному из межжелудочковой перегородки на том же уровне, из передней левой сосочковой мышцы.

Навеску ткани гомогенизировали в стеклянном гомогенизаторе (соотношение ткань: буферный раствор Трис-HCl 50 ммоль/л; ЭДТА-5 ммоль/л, pH 7,4 1:10); гомогенат центрифугировали 1600g 30 мин, надосадочную жидкость использовали для определения активности ферментов.

Активность креатинкиназы (КК), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) определяли с помощью кинетических спектрофотометрических методов, используя коммерческие наборы фирмы "Labsysrems" Финляндия и "Boechringer" ФРГ. Изоферменты креатинкиназы разделяли с помощью ионнобменной хроматографии на DEAE-Sephadex A-50, изоферменты ЛДГ с помощью энзимэлектрофореза в полиакриламидном геле с последующим определением при участии феназинметосульфат-тетразолиевой реакции. Расчет процентного соотношения изоферментов ЛДГ проводили после денситометрии на приборе COS-200 фирмы "Beckman". Содержание креатина определяли с помощью известного метода. Активность ферментов рассчитывали на мг белка и мг креатина.

Рассчитывали S_i для 6 следующих показателей: активность лактатдегидрогеназы Е/мл белка; Е/мг креатина; содержание ЛДГ-5 в активность креатинкиназы Е/мг белка; Е/мг креатина; содержание КК-МБ в
П р и м е р. Наблюдение 33. Мужчина, 50 лет, скоропостижно умер на улице. Труп вскрыт через 20 ч.

Наблюдение 49. Мужчина, 49 лет, погиб в дорожно-транспортном происшествии от несовместимой с жизнью травмы. Труб вскрыт через 24 ч.

Результаты биохимического исследования образов миокарда и способ расчета S_i на примере наблюдения 33 представлены в табл.1 и 2. Аналогичным образом находили значения S_i для всех наблюдений.

Представленные в табл. 3 данные свидетельствуют о том, что величина S_i (наблюдение 33) превышает значения S_ср.ибс. и S_{ср.контр.} по всем методам, что является основанием для заключения об ишемическом повреждении кардиомиоцитов, приведшем к скоропостижной смерти. В случае наблюдения 49 величины S_i по всем методам оказываются ниже значений S_ср.ибс. и S_{ср.контр.}, что свидетельствует от отсутствии острого ишемического повреждения кардиомиоцитов в данном наблюдении.

Предлагаемый способ обеспечивает более высокую точность диагностики острого ишемического повреждения кардиомиоцитов, в связи с тем, что величина показателя S_i определяется только воздействием ишемии на активность ферментов и изоферментов, и на него не оказывает влияние посмертный аутолиз и условия хранения материала. В случае снижения ферментативной активности в образца ткани разница в активности ферментов и изоферментов в рядом расположенных участках не меняется. Определение активности двух ферментов и их изоферментов увеличивает точность способа, так как позволяет выявить зону ишемии по активности одного фермента в том случае, когда активность другого изменяется незначительно. К тому же, предлагаемая схема забора материала позволяет исследовать активность ферментов ЛДГ, КК и их изоферментов в тех областях левого желудочка, где наиболее часто возникают расстройства коронарного кровообращения.

Предлагаемый способ позволяет выявить изменения активности КК, ЛДГ и их изоферментов, свидетельствующие об остром ишемическом повреждении кардиомиоцитов, более чем в 50% случаев смерти от острой ишемической болезни сердца.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОСМЕРТНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОЙ ИШЕМИЧЕСКОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ сердца путем определения активности ферментов в ткани сердца, отличающийся тем, что определяют активность лактатдегидрогеназы, креатинкиназы и их изоферментов в 10 образцах ткани, полученных из 5 отделов левого желудочка, и по степени различия в активности ферментов и изоферментов судят о наличии острой ишемической недостаточности сердца.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3