Способ получения лекарственного препарата на основе пантов оленя

 

Цель изобретения: повышение биологической активности, рациональное использование сырья, снижение трудоемкости и длительности. Сущность способа: механически удаляют шерстяной покров с пантов марала, изюбра или пятнистого оленя, затем производят дважды вальцевое измельчение пантов до частиц не более 0,1 мм, затем обрабатывают их 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой фильтрационным методом в течение 2-3 ч. Новым в способе является то, что измельчают вальцеванием сухие панты с кожным покровом до частиц 5-10 мм, затем повторно измельчают вальцеванием до частиц не более 0,1 мм и обрабатывают фильтрационным методом в течение 2-3 ч. 3 табл.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способов получения средств из пантов марала, изюбра или пятнистого оленя.

Известен способ получения "Пантокрина" жидкого путем измельчения до величины частиц 0,5 2 мм и экстракции пантов после удаления кожных покровов марала, изюбра или оленя пятнистого 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой и настаивания в течение 6 сут (В.И. Иванов, М.П. Сошнякина. "Панты и пантокрин". Чита, 1991 г.).

Однако данный способ позволяет получать "Пантокрин" недостаточной биологической активности, не позволяет рационально использовать сырье, трудоемок. Удаление кожного покрова путем обработки горячей водой приводит к денатурации белкового комплекса, к частичному вымыванию водорастворимых веществ пантов, а также к потере активности при длительной досушке. К тому же длительное (6 суток) извлечение действующих веществ 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой также приводит к снижению активности.

Целью изобретения является повышение биологической активности, рациональное использование сырья, снижение трудоемкости, длительности.

Поставленная цель достигается тем, что панты марала, изюбра или пятнистого оленя измельчают и обрабатывают 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой, причем измельчают вальцеванием сухие панты с кожным покровом до частиц 5 10 мм, затем повторно измельчают вальцеванием до частиц не более 0,1 мм и обрабатывают фильтрационным методом в течение 2 3 ч.

Отличие предлагаемого изобретения от известного заключается в том, что измельчают вальцеванием сухие панты с кожным покровом до частиц 5 10 мм, затем повторно измельчают вальцеванием до частиц не более 0,1 мм и обрабатывают фильтрационным методом в течение 2 3 ч.

Сравнение заявляемого решения с известным показывает, что впервые предложено измельчение сухих пантов с кожным покровом до частиц не более 0,1 мм и обработка фильтрационным методом в течение 2 3 ч, что позволяет повысить биологическую активность, рационально использовать сырье, снизить трудоемкость и длительность способа. С учетом изложенного следует считать заявляемое решение соответствующим критерию "существенные отличия".

Сущность способа заключается в следующем. Механически удаляют шерстяной покров с пантов марала, изюбра или пятнистого оленя, затем производят вальцевое измельчение пантов до частиц 5 10 мм и доизмельчение до частиц не более 0,1 мм. Затем обрабатывают их 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой фильтрационным методом в течение 2 3 ч.

Заявляемый способ позволяет получить "Пантокрин", содержащий экстрактивных веществ не менее 0,8% по сравнению с официальным препаратом, содержащим их 0,4 0,7% Было исследовано влияние предлагаемого пантокрина в сравнении с официальным пантокрином на течение иммобилизационного стресса. Препараты исследовали в дозах 0,45 и 1,8 мл/кг. Первая доза была взята как минимальная доза, обладающая в наших экспериментах активностью, а вторая как оптимальная терапевтическая доза для официального пантокрина. Эксперименты были выполнены на 72 мышах самцах линии СВА массой тела 19 21 г, которые были разбиты на 6 групп по 12 мышей. Две группы получали предлагаемый пантокрин, две официальный, и две группы служили контролем (стрессовым и интактным) и получали воду. Препарат вводили в течение 4 дней, предшествующих стрессу и 5-й раз за 1 ч до стрессирования. Иммобилизационный стресс вызывали подвешиванием животных за шейную складку на 22 ч. По истечению указанного времени мышей снимали и через 15 мин у них изучали ориентировочно-исследовательское поведение в открытом поле, эмоциональную реакцию по Броди (1953) подсчитывали количество лейкоцитов в периферической крови, после чего животных забивали и определяли вес надпочечников, селезенки и тимуса и рассчитывали весовые коэффициенты органов на 20 гр.массы тела, учитывали количество язв в желудке и по методу Добрякова (1976) подсчитывали выраженность стресса в баллах.

Экспериментальная установка "открытое поле" представляла из себя камеру размером 40 х 40 х 20 см с квадратным полом и стенками белого цвета. Пол камеры разделенный на 16 квадратов, в каждом квадрате имел круглое отверстие диаметром 3 см. Сверху камера освещалась электрической лампой накаливания мощностью 100 Вт, расположенной на высоте 1 м от пола камеры. Мышь помещалась в один из углов камеры и в течение 2-х мин регистрировали количество пересеченных горизонтальных квадратов, количество заглядываний в отверстия, количество вставаний на задние лапки, количество умываний (груминг) количество дефекаций по количеству фекальных шариков. Рассчитывался коэффициент Г/О, который представлял из себя отношение горизонтальной активности к норковому рефлексу (заглядыванию в отверстия). Эмоциональная реакция оценивалась по методу Броди (1953), при котором полуколичественным способом оценивалась реакция на 4 вида воздействий захват в клетке, где животное постоянно живет, захват в руку после помещения животного на плоскую поверхность, реакция на приближение пинцета, реакция на толчок пинцетом, при этом дополнительно регистрировались дефекация с мочеиспусканием, писк и мышечное напряжение (всего 7 реакций). Каждая реакция оценивалась по 4-х балльной системе, после чего все баллы суммировались, давая общую оценку эмоциональной реакции. О достоверности различий судили проверкой вероятности нулевой гипотезы по методу Стьюдента-Фишера. Результаты исследования приведены в табл. 1 и 2.

Как следует из приведенных данных предлагаемый пантокрин оказывает более выраженное антистрессовое действие на внутренние органы по сравнению с официальным препаратом. Что же касается поведения в открытом поле у животных, перенесших иммобилизационный стресс, то оба препарата оказали умеренное действие на показатели поведения, однако обращает на себя внимание, что заявляемый препарат оказал более выраженное нормализующее действие на эмоциональную реакцию и на коэффициент Г/О, являющийся отношением горизонтальной активности к норковому рефлексу.

Было исследовано влияние заявляемого пантокрина и официального препарата на формирование и воспроизведение условного рефлекса пассивного избегания, выработанного на фоне действия скополамина в дозе 2,5 мг/кг подкожно, за 15 мин до выработки рефлекса. Как известно, введение скополамина в дозе 1 5 мг/кг приводит к амнезии навыков, выработанных в ближайшее время после его введения. Препараты исследовали в дозе 1,8 мг/кг, как оптимальной терапевтической дозе. Эксперименты были выполнены на 70 мышах самцах линии СВА массой тела 19 21 г, которые были разбиты на 4 группы. Одна группа получала предлагаемый пантокрин, одна официальный, и две группы служили контролем (скополаминовым и интактным) и получали воду. Препараты вводили в течение 4 дней, предшествовавших стрессу, и 5-й раз за 1 ч до обучения.

За 15 мин до выработки условного рефлекса всем мышам кроме интактного контроля вводился скополамин в дозе 2,5 мг/кг подкожно. Методика условного рефлекса пассивного избегания (Я. Буреш, О. Бурешова, Дж. П. Хьюстон. "Методика и основные эксперименты по изучению мозга и поведения". М. "Высшая школа", 1991 г. с. 183) основана на подавлении врожденного рефлекса предпочтения темного пространства, имеющегося у грызунов. Экспериментальная установка представляла из себя камеру, состоящую из двух отсеков большого светлого и малого темного. Животное помещалось в светлый отсек и через некоторое время в силу врожденного рефлекса переходило в темный, после чего отверстие, соединяющее оба отсека, перекрывалось дверкой и на пол темного отсека, представляющий собой решетку из параллельных чередующихся электродов подавали электрический ток импульсами продолжительностью 50 Мс, частотой 5 Гц и амплитудой 50 мА, через 10 с дверку открывали и животное могло выскочить в светлый отсек с обычным полом. В результате описанной процедуры у животного вырабатывался условный рефлекс избегания темного пространства.

Выработку рефлекса проверяли через 24 ч. Для этого животное помещали в светлый отсек в угол камеры, противоположный от входа, и наблюдали в течение 3 мин. Регистрировали время первого захода в темный отсек (латентное время захода ЛТ), суммарное время пребывания в темном отсеке, количество животных с выработанным рефлексом. Хорошо выработанным рефлекс считался в том случае, если в течение всех 3 мин наблюдения животное не совершало перехода от светлого отсека в темный. Если латентное время захода превышало 150 с, это считалось признаком наличия рефлекса. Животные, которые после помещения в светлый отсек сохраняли неподвижность и не приближались к входу в темную часть камеры, при подсчете результатов не учитывались. Об эффекте препарата судили по разнице в долях животных с выработанным рефлексом между отдельными группами мышей. О достоверности различий судили по методу Фишера для сравнения долей (Г.Н. Зайцев. Математическая статистика в экспериментальной ботанике. М. "Наука", 1984, с. 258).

Результаты исследования представлены в табл. 3.

Как явствует из табл. 3, заявляемый препарат значительно превосходит официальный по положительному влиянию на процессы обучения и памяти при их нарушении в результате действия скополамина.

Представленные данные на примере двух экспериментов показывают, что заявляемый пантокрин по своей биологической активности превосходит существующий препарат.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ПАНТОВ ОЛЕНЯ, включающий удаление шерстяного покрова с пантов марала, изюбра или пятнистого оленя, измельчение, обработку раствором 50%-ного этилового спирта и 0,5%-ной уксусной кислоты, фильтрацию, отличающийся тем, что измельчают панты с кожным покровом до частиц 5 10 мм, затем измельчают до частиц не более 0,1 мм, а фильтруют целевой продукт в течение 2 3 м ч.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3