Способ получения гидролизата мозговой ткани "церебролизат"

 

Изобретение относится к производству лекарственных препаратов, применяемых в медицинской практике, и касается способа получения отечественного препарата, аналогичного по механизму биологического действия препарату "Церебролизин" фирма Эбеве, Австрия. Цель изобретения упрощение технологии получения и разработка лекарственной формы отечественного препарата "Церебролизат". Для достижения этой цели гомогенизированное сырье кору головного мозга подвергают ферментативному гидролизу при рН 6,8 8,4 в течение 4 5 ч, затем отделяют балки осаждением спиртом, полученный гидролизат последовательно фильтруют через мембранные фильтры с размером пор 0,22 0,5 мкм и с порогом задержания веществ 5 15 кД. Спирт и воду отгоняют, добавляют консервант 0,3% фенола и проводят стерильную фильтрацию на мембранах 0,2 0,32 мкм. Процесс технологичен, полученный препарат обладает высокой клинической эффективностью. 1 табл.

Изобретение относится к способу получения отечественного препарата "Церебролизат", аналогичного по механизму биологического действия препарату "Церебролизин" фирмы Эбеве, получаемого путем ферментативного гидролиза головного мозга сельскохозяйственных животных. Описания технологии получения церебролизина в доступных источниках информации не обнаружено.

Способ является трудоемким за счет использования центрифугирования и проведения доочистки гидролизата активированным углем. Кроме того, получаемый продукт (гидролизат) не является лекарственной формой и не может быть применен в клинической практике, а его получение сопровождается накоплением большого количества неутилизируемых отходов в виде отработанного активированного угля.

Цель изобретения упрощение технологии получения за счет снижения трудоемкости способа и разработка лекарственной формы отечественного препарата "Церебролизат".

С этой целью получение препарата "Церебролизат" проводят путем ферментативного гидролиза гомогената коры мозга крупного рогатого скота при рН 6,8-8,4 и отделения белков путем осаждения этиловым спиртом, полученный гидролизат подвергают микрофильтрации на мембранах с диаметром пор 0,22-0,5 мкм и ультрафильтрации на мембранах с порогом задержания веществ 5-15 кД, а затем продукт концентрируют, фильтрацию проводят на мембранах 0,2-0,32 мкм. Выбранный размер пор (5-15 кД) обусловлен необходимостью удаления из препарата низкомолекулярных пептидов.

Сравнение предлагаемого способа с известным показывает, что общими существенными признаками для них являются: ферментативный гидролиз гемогената мозга животных, спиртовое осаждение белков с последующим отделением жмыха и удалением полипептидов, а также концентрирование. Однако, в отличие от прототипа, заявляемый способ предусматривает использование в качестве сырья коры головного мозга крупного рогатого скота, проведение ферментативного гидролиза в более щелочных условиях, отделение жмыха микрофильтрацией вместо центрифугирования, использование ультрафильтрации вместо обработки активированным углем для доочистки и осветления гидролизата, получение лекарственной формы путем добавления консерванта и проведения стерилизующей фильтрации.

Использование в качестве сырья коры головного мозга позволяет получить препарат, обладающий более направленным действием, поскольку не используются такие части мозга, как гипофиз, мозжечок и стволовая часть мозга. Проведение ферментативного гидролиза в нейтральной или слабо-щелочной среде обеспечивает оптимальные условия для работы сериновых эндопротеаз. Кроме того, при использовании в способе-прототипе более кислых значений рН увеличивается сухой остаток препарата за счет образования солей при подведении рН до нейтральных значений, что отрицательно сказывается на качестве препарата при доведении его до лекарственной формы. Использование микро- и ультрафильтрации позволяет повысить технологичность способа за счет замены трудоемких операций, а проведение заключительной стерилизующей фильтрации также направлено на получение лекарственной формы препарата "Церебролизат". Дополнительный эффект от применения предлагаемого способа проявляется и в повышении экологической чистоты производства за счет исключения их технологии активированного угля.

Приведенная совокупность отличительных признаков заявляемого способа в литературе не описана и создает новый положительный эффект, следовательно, разработанный способ удовлетворяет критериям "Новизна" и "Изобретательский уровень".

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Дефростированный или свежий головной мозг без стволовой части и мозжечок измельчают и гомогенизируют в воде с нейтральным или слабо щелочным значением рН (6,8-8,4) и подвергают гидролизу сериновой эндопептидазой грибкового происхождения при температуре от 40 до 50^оС в течение 4-5 ч. По окончании гидролиза реакционную массу при перемешивании нагревают до 90-95^оС и выдерживают при этой температуре в течение 50 мин. После охлаждения до комнатной температуры в раствор добавляют 2,5 объема спирта и через 2 ч инкубации смесь последовательно фильтруют через мембранные фильтры с размерами пор 0,22-0,5 мкм и с молекулярным весом отсечения 5-15 кД. Спирт и воду отгоняют. Для приготовления лекарственной формы препарата, после добавления консерванта, проводят стерильную фильтрацию на мембранных фильтрах с диаметром пор 0,22-0,32 мкм.

П р и м е р 1. 1 кг мозга без основания мозга и мозжечка пропускают через мясорубку. Гомогенат готовят в воде в соотношении 1:1 (мас./об) в размельчителе ткани с вращающимся ножом. рН гомогената доводят щелочью до 7,4. Гомогенат нагревают до 40^оС и при перемешивании добавляют 50 г сериновой эндопротеазы. Инкубацию проводят в течение 5 ч при постоянном перемешивании и температуре 40±1^оС. По окончании протеолиза температуру реакционной смеси доводят до 95^оС и выдерживают при этой температуре в течение 40 мин. После охлаждения до 20^оС к раствору добавляют 5 л спирта, инкубируют 2 ч, затем проводят микрофильтрацию через мембранные фильтры с размерами пор 0,32 мкм. Осветленный, стерильный продукт подвергают ультрафильтрации через мембранные фильтры с молекулярным весом отсечения веществ 10 кД. Спирт и воду отгоняют. Конечный объем смеси составлял 200 мл. К продукту добавляют консервант 0,3% фенола. Лекарственную форму Церебролизата получают путем повторной стерильной фильтрации смеси и последующим разливом препарата в ампулы объемом 1-20 мл. Аминокислотный состав препарата указан в таблице.

П р и м е р 2. Получение препарата проводят согласно примеру 1, но с использованием микрофильтрационных мембран с размером пор 0,22 мкм, а ультрафильтрацию проводят на мембранах с порогом задержания веществ 15 кД. Аминокислотный состав полученного препарата идентичен полученному по примеру 1.

Препарат прошел клиническое изучение в ведущих неврологических центрах РСФСР и показал свою высокую эффективность для лечения травм и заболеваний центральной нервной системы: инсультов, нарушений мозгового кровообращения, энцефалопатий, детского церебрального паралича. Рекомендован для использования в медицинской практике.

Формула изобретения

Способ получения гидролизата мозговой ткани, включающий ферментативный гидролиз гомогената мозга крупного рогатого скота с последующим выделением целевого продукта путем отделения белковых фрагментов и концентрирования, отличающийся тем, что в качестве сырья используют кору мозга, ферментативный гидролиз проводят в интервале рН 6,8 8,4, полученный после спиртового осаждения гидролизат подвергают микрофильтрации на мембранах с размером пор 0,22 0,5 мкм и ультрафильтрации на мембранах с порогом задержания веществ 5 15 кД, а стерилизующую фильтрацию проводят на мембранах с размером пор 0,2 - 0,32 мкм после концентрирования продукта.

РИСУНКИ

Рисунок 1

TK4A - Поправки к публикациям сведений об изобретениях в бюллетенях "Изобретения (заявки и патенты)" и "Изобретения. Полезные модели"

Страница: 806

Напечатано: (73) Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген”

Следует читать: (73) Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производст венное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген” Министерства здравоохранения Российской Федерации

Номер и год публикации бюллетеня: 19-2004

Код раздела: PD4A

Извещение опубликовано: 20.12.2004        БИ: 35/2004

---