Способ изготовления единого бруцеллезного антигена для ра, рск и рдск
Использование: биотехнология, промышленное производство единого бруцеллезного антигена. Сущность изобретения: способ изготовления единого бруцеллезного антигена включает культивирование штамма 19 в глубинных условиях в жидкой питательной среде, содержащей перевар Хоттингера, глицерин, глюкозу, NaCl, дрожжевой экстракт и воду. Концентрирование и очистку выросшей бакмассы проводят на ультрафильтрационной установке при помощи аппаратов разделительных с использованием 0,5% фенолизированного физраствора, а инактивацию антигена - в биореакторе при температуре 80oC 60 минут. При этом длительность процесса сокращается с 72 до 24 ч. Способ изготовления единого бруцеллезного антигена позволяет повысить качество и снизить себестоимость конечного продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК.
Известен способ получения антигена бруцеллезного с использованием технологии культивирования на плотной питательной среде в четвертях. Однако существующий способ изготовления обладает рядом недостатков: культивирование ведется на дорогостоящей, сложной в изготовлении плотной питательной среде; время культивирования до 72 ч; необходимость использования большого количества стеклянной посуды; потребность в большом количестве площадей и оборудования; опасность возможного контакта персонала с возбудителем бруцелл. Длительность и многооперационность процесса делает изготовление бруцеллезного антигена трудоемким и конечный продукт из-за высокой себестоимости является неконкурентноспособным. Целью изобретения является повышение качества, снижение себестоимости и исключение возможности контакта обслуживающего персонала с бруцеллезной культурой. Цель достигается изменением технологии изготовления антигена, а именно: культивирование проводится на жидкой питательной среде в биореакторах с дальнейшей очисткой и концентрированием культуры на ультрафильтрационных колонках. При этом уменьшается количество операций и исключается возможный контакт обслуживающего персонала с бруцеллезной культурой. Время изготовления антигена сокращается до 24 ч. Способ осуществляется в биореакторе следующим образом. Культивирование проводят в биореакторе на жидкой питательной среде следующего состава, Перевар Хоттингера 25 Глицерин 1 Глюкоза 1 NaC 0,5Дрожжевой экстракт сухой 0,5
или нативный 15 20
Вода водопроводная до 100
В готовой питательной среде содержится аминного азота 145 160 мг% pH 6,8 7,1. Жидкая питательная среда стерилизуется фильтрацией через фильтр пластины типа СФ. Глубинное культивирование в биореакторе осуществляется по следующему полученному нами в результате экспериментов алгоритму управления:
температура культивирования 370,5oC;
концентрация водородных ионов (pH) в пределах 6,8 7,2;
уровень парциального давления растворенного в культуральной жидкости кислорода на фазе приспособления 20 25 pO2 нас;
фаза логарифмического роста 40 45 pO2 нас
стационарная фаза 30 35 pO2 нас. Поддержание технологических параметров осуществляется следующими управляющими воздействиями:
температура термостатной водой;
pH подачей титрантов;
кислорода подачей воздуха на аэрацию и изменением скорости вращения мешалки. Выращенную на жидкой питательной среде в биореакторе культуру Brucella abortus шт. 19 далее концентрируют в 6 7 раз при помощи ультрафильтрационных колонок. К концентрату в биореакторе добавляют 0,5% фенолизированный физраствор с pH 7,0 7,2 до половины первоначального объема с целью отделения микробных клеток от остатков питательной среды. После перемешивания культуры ее концентрируют вторично в 3 4 раза до концентрации 180 200 млрд/см3, затем инактивируют в биореакторе при 801oC в течение 60 мин при постоянном перемешивании и сливают в стерильные 16 л баллоны, которые выдерживают в холодильнике при температуре 2 6oC не менее 10 сут. Разведение концентрированной суспензии проводят стерильным 0,5% фенолизированным физраствором. Активность антигена в РА устанавливают по национальной бруцеллезной агглютинирующей сыворотке против Бруцелла абортус, содержащей в 1 мл 1000 МЕ антител. Активность антигена в РСК устанавливается при его титровании по квадратной схеме с национальной стандартной бруцеллезной агглютинирующей сывороткой. Сравнительные данные по используемому и предлагаемому способам изготовления единого бруцеллезного антигена приведены в таблице. Преимуществом предлагаемого способа является повышение качества, снижение себестоимости, исключение контакта обслуживающего персонала с бруцеллезной культурой за счет использования глубинного культивирования в биореакторах на жидкой питательной среде с последующей очисткой и концентрированием на ультрафильтрационных колонках.
Формула изобретения
Глицерин 1
Глюкоза 1
NaCl 0,5
Дрожжевой экстракт сухой 0,5
или дрожжевой экстракт нативный 15 20
Вода водопроводная До 100а
РИСУНКИ
Рисунок 1