Способ определения количества пепсина
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
2)103О
Союз Соеетокик
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 17.Х1.1966 (№ 1113326/28-13) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 0811.1968. Бюллетень № 7
Дата опубликования описания 5.IV.1968
Кл. 30h, 2/04
МПК А 61k
УДК 576.8.093.4 (088.8) Комитет по делам изобретений и открытий при Сосете Министров
СССР
Аьтор изобретения
Н. П. Пятницкий
Заявитель
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ПЕПСИНА
Известен способ определения количества пепсина в препаратах, его содержащих, согласно которому готовят раствор эталона и раствор испытуемого препарата и этими растворами (порознь) воздействуют на пробу молока, предварительно стабилизированную ацетатным буфером (водным раствором смеси ледяной уксусной кислоты и едкого натра), замеряя при этом продолжительность свертывания молока и определяя расчетным путем количества фермента (в условных единицах).
Для определения количества пепсина в весовых единицах и упрощения способа раствор испытуемого препарата и раствор эталона перед воздействием на пробу молока стабилизируют ацетатным буфером, при этом в раствор эталона одновременно со стабилизатором вводят глицерин. В качестве раствора эталона следует использовать раствор аморфного пепсина.
Способ состоит в следующем.
Готовят ацетатный буфер из 92 г ледяной уксусной кислоты и 45 г едкого натра, для чего их растворяют в дистиллированной воде, доводя общий объем до 1000 мл. Хранят приготовленный раствор в закрытом виде. Затем из 20 мг чистого аморфного пепсина, который помещают в 200 мл колбу, приготовляют раствор. Для этого приливают 50 мл ацетатного буфера и 50 мл дистиллированной воды. Рас. творяют пенсии, приливают 80 мл глицерина, размешивают и доводят до метки дистиллированной водой. В 1 мл приготовленного раствора содержится 0,1 мг чистого свиного пепсина. Раствор эталона стоек при хранении в темноте и на холоде.
Готовят молочно-ацетатную смесь, т. е. пробу свежего коровьего молока, которую смешивают пополам с ацетатным буфером (рН не должен быть ниже 5) и ставят на хо-. лод. После отстоя сливок смесь сливают сифоном. Срок хранения этой смеси на холоде около двух недель. Затем приготавливают раствор испытуемого препарата.
В зависимости от вида препарата пепсина (сывороточного, пищевого или медицинского) меняется методика приготовления раствора.
Так, препарат сывороточного пепсина отвешивают в количестве 1 г, растворяют в колбе литрового объема, приливая в нее 100 мл ацетатного буфера, после чего дистиллированной водой объем содержимого доводят до метки.
Концентрация приготовленного раствора составляет 0,1%.
Приготовление раствора препаратов пищевого пепсина и медицинского отличается дозировкой этих препаратов, соответственно составляющей 2 г и 5 г, что в свою очередь обеспечивает получение растворов 0,2 и 0,5%30 ной концентрации.
211030
Х=—
Л = =0,0795 лг/мл.
0,1 70
Составитель М. И. Андреева
Редактор В. Ф. Чулкова Текред Л. К. Малова Корректоры: О. Б. Тюрина и С. А. Башлыкова
Заказ 579!2 Тираж 580 Подписное
IJI-!ИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типографии, пр. Сапунова, 2
От растворов эталона и испытуемого препарата отливают в пробирки по 0,1 мл, причем температура растворов должна быть равиа
25 С. В другие пробирки наливают по 5 мл молочно-ацетатной смеси, Затем раствор эталона и раствор испытуемого препарата порознь приливают в пробирки с молочной смесью. Замечают время начала испытания и время появления на стенках пробирок едва заметных хлопьев казеина. Продолжительность свертывания молока в параллельных определениях может отличаться на 2 — 3 сек.
Затем расчетным путем определяют содержание пепсина в испытуемом препарате.
Для этого полученные данные подставляют в формулу где Х вЂ” количество пепсина в 1 мл испытуемого раствора, в мг;
У вЂ” количество пепсина в растворе эталона в мг; а — продолжительность створаживания молока под действием эталона в сек;
6 — продолжительность створаживания молока под действием испытуемого раствора в сек.
Пример 1. Анализировали препарат сывороточного пепсина. При этом получили а — 70 сек, b — 88 сек.
Если У = 0,1 /о, то
Так как готовили 0,1 /о-ный испытуемый раствор, то содержание пепсина в сухом препарате составляет 7,95 о/о.
Пример 2. Анализировали препарат медицинского пепсина. Полученные данные составили а — 70 сек, b — 140 сек; так как
У = 0,1%, то
Л= -=005 мг/мл.
0,1 70
Содержание пепсина в сухом препарате (был приготовлен 0,5/о-ный раствор) равно 1/о.
Предм ет изобретения
1. Способ определения количества пепсина в препаратах его содержащих путем раздельного воздействия раствора эталона и раствора испытуемого препарата на пробу молока, стабилизированного ацетатным буфером (водным раствором смеси ледяной уксусной кислоты и едкого натра), с последующим замером продолжительности свертывания молока и расчетом количества пепсина, отличающийся тем, что, с целью определения количества пепсина в весовых единицах (миллиграммах) и упрощения способа, раствор испытуемого препарата и раствор эталона перед воздействием на пробу молока стабилизируют ацетатным буфером, при этом в раствор эталона одновременно со стабилизатором вводят глицерин.
2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что, в качестве раствора эталона используют раст35 вор аморфного пепсина.
