Способ лечения ожогов глаз

 

Изобретение относится к медицине офтальмологии и может быть использовано при лечении ожогов глаз у человека. Способ позволяет получить ускорение репаративной регенерации тканей в зоне повреждения при тяжелых ожогах глаз. Проводят трансплантацию культивированных in vitro эмбриональных клеток эпителия роговицы человека. Вводят последние в количестве 200000 клеток в 0,2 мл физиологического раствора непосредственно в коньюктиву вдоль границы ее некроза.

Изобретение относится к области медицины - офтальмологии и может быть использовано при лечении ожогов глаз у человека.

Известны способы лечения тяжелых ожогов глаз, где с целью восстановления перилимбального кровообращения и предупреждения развития симблефарона применяли пересадку различных гомотканей: трупной слизистой оболочки (1), трупной конъюктивы глаз (2).

Проведенные в Институте глазных болезней и тканевой терапии им. В.П.Филатова исследования убедили, что использование конъюктивы трупных глаз возможно только для покрытия небольших участков, а трансплантация трупной слизистой нередко заканчивается отторжением пересаженного лоскута и бурной воспалительной реакцией со стороны пораженного глаза (3).

В настоящее время в офтальмологии широкое применение имеют брефоткани.

При брефопластике антогонизм между тканями донора и реципиента проявляется в меньшей степени, чем при пересадке от взрослых доноров (4). Это особенно важно в тех случаях, когда со стороны глаза и организма реципиента имеются условия для проявления тканевой несовместимости (напр., после ожогов глаз).

Результаты исследований Ю.Е. Батманова, K.C. Егорова, Л.Н. Колесникова (5) показали положительное влияние амниона на течение патологического процесса при ожоговой болезни переднего отрезка глаза (прототип).

Эмбриональные ткани имеют более низкую степень дифференцировки, обладают слабо выраженными антигенными свойствами, высокой пластичностью и жизнеспособностью и являются полноценным трансплантационным материалом (6).

Техническим результатом предлагаемого изобретения является ускорение репаративной регенерации тканей в зоне повреждения при тяжелых ожогах глаз за счет использования суспензии эмбриональных клеток эпителия роговицы человека.

Технический результат достигается за счет трансплантации культивированных in vitro эмбриональных клеток эпителия роговицы человека путем введения последних непосредственно в конъюнктиву вдоль границы ее некроза.

Механизм действия эмбриональных клеток, не обладающих антигенной активностью, заключается в стимуляции регенерации сохранившихся при ожоге и малоповрежденных участков конъюнктивы.

Источником культуры эпителиальных клеток роговицы служит ткань роговицы 14-22-недельных эмбрионов человека, которые получены при проведении искусственного прерывания беременности по медицинским показаниям.

Аборты проводятся в государственном учреждении - Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии (НЦАГ и П) РАМН строго в соответствии с основами законодательства об охране здоровья граждан - статья N36, приказом МЗ РФ N302 от 28.12.93 г., рекомендациями ВОЗ, принятыми РФ, а также нормами этического Комитета и специально созданной комиссии по госпитализации.

Для получения клеточных культур используются только те эмбрионы человека, сыворотка крови которых, а также сыворотка крови их матерей, дали отрицательный результат при тестировании на сифилис, гепатит (В и С), вирус иммунодефицита человека, цитомегаловирус, вирус простого герпеса и, кроме того, ряда внутриклеточных бактерий (хламидии, микоплазма, уроплазма).

Получено разрешение на использование клеточных культур в офтальмологии (лицензия комитета здравоохранения Москвы, серия ЦЛМД, N 2803/2799 закрытого, акционерного общества "Институт биологической медицины", решение Московской городской Комиссии по лицензированию медицинской деятельности от 3.07.95).

Для широкого использования трансплантации культур фетальных клеток эпителия роговицы человека в офтальмологической практике принципиальное значение имеет наличие достаточных запасов заблаговременно заготовленных клеток, обладающих высоким уровнем сохранности. Решить эту проблему можно с помощью метода низкотемпературного консервирования, который позволяет сохранять биоматериал пригодным для трансплантации в течение многих лет (7).

На момент трансплантации культуры она представляет собой первичную монокультуру эпителиальных (100%) клеток с характерными признаками. Непосредственно перед трансплантацией суспензию клеток тщательно отмывали от культуральной среды, подсчитывали количество жизнеспособных клеток по исключению трепанового синего (как правило 95%) и суспензировали в минимальном объеме физиологического раствора.

Способ лечения ожогов глаз осуществляется следующим образом; производят однократную инъекцию суспензии эпителиальных клеток под конъюнктиву глаза больного со свежим ожогом вдоль границы некроза конъюнктивы и склеры. Для инъекции использовали суспензию клеток с концентрацией 10⁶ клеток/мл. В таком виде суспензия эмбриональных клеток может храниться при 4-25^oC в течение 1-2 часов перед инъекцией. В экспериментах на кроликах на модели ожога глаза были отработаны дозы вводимых эмбриональных клеток. Доза 200.000 клеток в 0,2 мл физиологического раствора является оптимальной для достижения терапевтического результата.

Предлагаемый способ лечения осуществлен у 11 больных с щелочными ожогами конъюнктивы, склеры и роговицы III-IV ст. с наличием некроза и угрозой перфорации оболочек. У 9 больных получен выраженный положительный эффект: в зоне некроза был полностью восстановлен кровоток и предотвращена угроза перфорации. В 2 случаях наблюдалась слабая положительная динамика, что потребовало повторного введения суспензии эпителиальных клеток роговицы.

Клинический пример.

Больной С. 6 1970 г. р. И.Б.N2107 поступил в отдел травматологии и реконструктивной хирургии МНИИ ГБ им. Гельмгольца с диагнозом; щелочной ожог конъюнктивы и склеры III ст., роговицы III ст. через 4 дня после травмы. При биомикроскопии был обнаружен некроз конъюнктивы и склеры 3х2 мм в 2 мм от лимбальной зоны, субтотальная эрозия и помутнение роговицы. Больному произведена инъекция суспензий эмбриональных эпителиальных клеток роговицы в концентрации 200.000 клеток в 0,2 мл физ. раствора вдоль границы некроза конъюнктивы. Через 3 дня после инъекции в зоне некроза появились кровеносные сосуды, конъюнктива и склера приобрели розовую окраску, приостановилось дальнейшее расширение зоны некроза. Через 7 дней после лечения кровоток в зоне некроза конъюнктивы и склеры полностью восстановился, признаки воспаления слизистой купировались, отмечалась полная эпителизация роговицы и значительное уменьшение ее отека. Таким образом введение культуры эпителиальных человеческих клеток в зону повреждения способствовало стимуляции жизнедеятельности сохранившихся при ожоге и малоповрежденных участков конъюнктивы, роговицы и других отделов глаза, а также предупреждению перфорации склеры и роговицы у больного с тяжелым щелочным ожогом.

Резюмируя представленные данные можно сказать, что в результате трансплантации эмбриональных клеток эпителия роговицы человека при лечении тяжелых ожогов глаз получено ускорение репаративной регенерации в зоне некроза конъюнктивы и склеры без образования грубых рубцовых изменений.

Учитывая возможность постоянно располагать запасом донорского материала, поддерживая монослой клеток эпителия в клеточной культуре, а также эффективность и простую методику трансплантации предложенный способ лечения представляется перспективным в лечении ожогов глаз.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ, ПРИНЯТЫЕ ВО ВНИМАНИЕ.

1. Зенкина Л. В. "Лечение ожогов глаз методом трансплантации трупной слизистой ",- Вести, офтальмол.,1939,2,28.

2. Морозова О.Д. "Роговично-конъюктивальная пластика в хирургическом лечении симблефарона и рецидивирующего птеригиума",- Вести, офтальмол., 1971, 2, 24.

3. Пучковская Н. А., Шульпина Н.С.,Непомящая В.М." Патогенез и лечение ожогов глаз и их последствий", М., Медицина, 1973, 102- 103.

4. Беляев В. С. "Использование роговицы плодов и новорожденных для кератопластики в эксперименте и клинике". Автореферат Докт. дис.-М., 1965.

5. Батманов Ю. E.,Егорова K.C., Колесникова Л.Н. "Применение свежего амниона в лечении заболеваний роговицы",-Вести, офтальмол., 1990,5,17-18.

6. Краснов М. Д. , Беляев В. С. "Руководство по глазной хирургии". "Москва,1988, 106-114.

7. W.J.Tze, J.Tal "Successfull banking of pancreatic endocrine cells for transplantation". Metabolism, V. 39, N 7, 1990, p. 719-723.

Формула изобретения

Способ лечения ожогов глаз путем трансплантации гомотканей в область повреждения, отличающийся тем, что для трансплантации используют суспензию эмбриональных клеток эпителия роговицы человека в количестве 20000 клеток в 0,2 мм физиологического раствора, которую вводят непосредственно в конъюктиву.