2-гетероарил-5,11-дигидро-6н-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4] диазепин-6-оны, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении обратной транскриптазы вич-1

 

Описываются новые 2-гетероарил-5,11-дигидро-6Н-дипиридо[3,2-b;2',3'-e] [l, 4] диaзeпин-6-оны, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1 общей формулы I, где R¹ R² и Аr имеют указанное в п.1 формулы изобретения значение, и их фармацевтически приемлемые соли. Соединения формулы I и их соли могут представлять собой активное вещество фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей активностью в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1. 2с. и 3 з.п.ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к новым производным дипиридодиазепинонов, обладающим биологической активностью, более конкретно к 2-гетероарил-5,11-дигидро-6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e] [1,4] диазепин-6-онам, их фармацевтически приемлемым солям и фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей активностью в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1.

Известны производные дипиридо-диазепинонов, которые могут представлять собой активное вещество фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей активностью в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1 (см. заявку EPO 429987 A3, C 07 D 471/14, A 61 K 31/55, 1991).

Задачей изобретения является расширение арсенала производных дипиридо-диазепинонов, обладающих ингибирующей активностью в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1.

Данная задача решается предлагаемыми 2-гетроарил-5,11-дигидро-6H- дипиридо-[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-оны общей формулы (I) где R¹ означает атом водорода или алкил с 1 - 3 атомами углерода; R² означает алкил с 1 - 4 атомами углерода или циклоалкил с 3-6 атомами углерода; Ar означает группу формулы (а) - (д) где R³ означает водород, метил, этил, ацетил или аминокарбонил, каждый из R⁴, R⁵ и R⁶ означает водород; или один из R⁴, R⁵ и R⁶ означает метил, ацетил, этоксикарбонил, карбоксигруппу, аминокарбонил или цианогруппу, а два других заместителя оба означают водород; каждый из A, B, D и E является метиновой группой, одна из которых может быть замещена алкилоксигруппой с 1 - 3 атомами углерода, или их фармацевтически приемлемыми солями.

В первую группу предпочтительных диазепинонов общей формулы (I) входят соединения, у которых R¹ означает атом водорода, алкил с 1 - 3 атомами углерода; R² - алкил с 1 - 3 атомами углерода или циклоалкил с 3-4 атомами углерода;
Ar - группу формулы (а) - (д), где R³ означает водород, метил или этил; каждый из R⁴, R⁵ и R⁶ означает водород; или один из R⁴, R⁵ и R⁶ означает метил, ацетил, этоксикарбонил, аминосульфонил или цианогруппу, а два других заместителя оба означают водород; каждый из A, B, D или E является метиновой группой, одна из которых может быть замещена алкилоксигруппой с 1 - 3 атомами углерода, или их фармацевтически приемлемые соли.

Во вторую группу предпочтительных диазепинонов общей формулы (I) входят соединения, у которых
R¹ означает метил;
R² означает алкил с 2-3 атомами углерода или циклоалкил с 3-4 атомами углерода;
Ar означает группу формулы (а), (б) или (в), где R³ означает водород или метил; каждый из R⁴, R⁵ и R⁶ означает водород; или один из R⁴, R⁵ и R⁶ означает метил, ацетил, этоксикарбонил, аминокарбонил или цианогруппу, а два других заместителя обозначают водород; или
Ar означает группу формулы (г) или (д), где R³ означает водород или метил; каждый из R⁴, R⁵ и R⁶ означает водород;
каждый из A, B, D и E является метиновой группой, одна из которых может быть замещена алкилоксигруппой с 1 - 3 атомами углерода, или их фармацевтически приемлемые соли.

В третью группу предпочтительных диазепинонов общей формулы (I) входят соединения, выбранные из группы, состоящей из:
5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(3-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e] [1,4]диазепин-6-она;
11-циклопропил-5,11-дигидро-5-метил-2-(3-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-она;
11-циклопропил-5,11-дигидро-5-метил-2-(4-пиразолил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-она; и
5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(4-пиразолил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e] [1,4]диазепин-6-она;
и их фармацевтически приемлемых солей.

Соединения общей формулы (I) могут представлять собой активное вещество фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей активностью в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1, которая помимо фармацевтически приемлемого носителя содержит предлагаемые соединения в профилактически или терапевтически эффективном количестве.

Предлагаемые соединения можно получать широко известными способами. Так, например, соединение общей формулы (II)

где R¹ и R² имеют вышеуказанные значения и R⁷ является уходящей группой, например, хлором, бромом, иодом или трифторметансульфонилоксигруппой, подвергают взаимодействию с соединением трибутилолова формулы (III)
Ar-SnBu₃, (III)
где Ar имеет вышеуказанное значение, в присутствии катализатора, предпочтительно палладиевого катализатора, такого, как тетракис(трифенилфосфин)-палладий(O), тетракис(трифениларсин)палладий(O), тетракис(три-2-фурилфосфин)палладий(O) или хлористый бис(трифенилфосфин)палладий (II).

Реакцию обычно проводят в атмосфере инертного газа, аргона или азота, и в инертных растворителях, таких, как 1,4-диоксан, тетрагидрофуран, N,N-диметилформамид, N-метилпирролидинон и им подобные, обычно при температуре между комнатной и точкой кипения растворителя. В некоторых случаях могут быть использованы соединения триметилолова, соответствующие соединениям трибутилолова формулы (III).

Другой способ заключается в том, что соединение вышеприведенной общей формулы (II) подвергают взаимодействию с цинкорганическим соединением формулы (IV),
Ar-ZnCl, (IV)
где Ar имеет вышеуказанное значение, которое можно получить при прибавлении хлористого цинка к литийорганическому соединению формулы (V),
Ar-Li, (V)
где Ar имеет вышеуказанное значение.

Реакцию обычно проводят аналогично вышеописанному способу, т.е. в атмосфере инертного газа, как аргон или азот, и в присутствии палладиевого катализатора, такого, как тетракис(трифенилфосфин)палладий(O), тетракис(трифениларсин)палладий(O), тетракис(три-2-фурилфосфин)палладий(O) или хлористый бис(трифенилфосфин)палладий(II). Обычно используют инертные растворители, такие, как 1,4-диоксан, тетрагидрофуран, серный эфир и им подобные, и температуры реакции обычно находятся в интервале между комнатной температурой и точкой кипения растворителя.

Исходное соединение формулы (II) можно получить путем циклизации подходящего амида карбоновых кислот формулы (VI),

где R¹, R² и R⁷ имеют вышеуказанное значение, и Hal означает хлор, бром, фтор или иод.

Циклизацию обычно проводят путем превращения соединений формулы VI в соли щелочных металлов и последующей конденсации при температурах между 0^oC и точкой кипения реакционной смеси. Если R¹ означает алкил, металлирование требует по меньшей мере 1 моль металлирующего агента. Если, с другой стороны, R¹ является водородом, следует использовать, как минимум, 2 моль этого агента. Для металлирования предпочтительно используются гидриды лития, натрия или калия или алкилы лития, такие, как н-бутиллитий.

Реакцию циклизации обычно проводят в инертных растворителях, например, в тетрагидрофуране, 1,4-диоксане, диметоксиэтане, диглиме, триглиме, диметилформамиде, бензоле или анизоле. Циклизации также способствует нагревание амидов карбоновых кислот формулы (VI) в дипольных апротонных растворителях, предпочтительно в сульфолане или диметилсульфоне. Показана полезность использования каталитических количеств сильных кислот, к примеру, серной кислоты, соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, фосфорной кислоты, полифосфорной кислоты, метансульфокислоты или п-кислоты, полифосфорной кислоты, метансульфокислоты или п-толуолсульфокислоты. Нужная температура реакции находится между 110 и 220^oC.

Для получения соединения формулы II, где R⁷ является трифторметансульфонилоксигруппой ("трифлат"), необходимо сначала получить соединение, где R⁷ является метоксигруппой. Образующееся в результате промежуточное соединение подвергают затем деметилированию при обработке подходящей кислотой, как, например, концентрированная бромистоводородная кислота или трехбромистый бор. Образующееся при этом промежуточное соединение с гидроксильной группой подвергают затем превращению в трифлат при обработке ангидридом трифторметансульфокислоты, обычно в присутствии слабого основания, как, например, N,N-диизопропилэтиламин или триэтиламин.

Амиды карбоновых кислот формулы (VI), используемые в качестве исходных веществ, получают, например, при аминировании амидов 2-хлорникотиновой кислоты формулы (VII),

где R¹, R⁷ и Hal имеют вышеуказанное значение, с помощью первичных аминов формулы (VIII)
H₂N-R², (VIII)
где R² имеет вышеуказанное значение.

Реакция может быть также проведена в присутствии неорганических или органических вспомогательных оснований, таких, как триэтиламин, N,N-диметиламин или карбонаты натрия или калия. Реакцию можно проводить без растворителя; некоторое преимущество, однако, дает использование инертных органических растворителей при температурах между 0^oC и 175^oC, предпочтительно при температуре кипения. Подходящие инертные растворители, которые могут быть использованы, включают избыток первичного амина общей формулы VIII, простые эфиры с открытой цепью или циклические, такие, как тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, диметоксиэтан, диглим; ароматические углеводороды, такие, как бензол, толуол, ксилол, хлорбензол или пиридин; спирты, такие, как метанол, этанол, изопропанол; дипольные апротонные растворители, такие, как диметилформамид; 1,3-диметил-2-имидазолидинон, 1,3-диметил-тетрагидро-2(1H)-пиримидинон и сульфолан.

Промежуточные соединения формулы (VII), где R¹ означает алкил, могут быть получены алкилированием 2-хлорникотиновой кислоты формулы (IX)

где R⁷ и Hal имеют вышеуказанное значение, соединением формулы (X)
R¹X, (X)
где R¹ означает алкил, и X является соответствующей уходящей группой, например, X означает остаток реакционноспособного сложного эфира, атом галогена, группу OSO₂OR¹, метансульфонилокси- или этансульфонилоксигруппу или ароматическую сульфонилоксигруппу, в присутствии акцепторов протона, например, аминов, таких, как триэтиламин, диазабициклоундецен, 4-(диметиламино)пиридин, или гидроокисей щелочных или щелочноземельных металлов, таких, как едкий натр, едкое кали, гидроокись кальция, карбонатов щелочных или щелочноземельных металлов или бикарбонатов, таких, как карбонаты натрия или калия или бикарбонат калия.

Амиды 2-хлорникотиновой кислоты общей формулы (IX) могут быть получены путем конденсации соответствующим образом замещенного хлорангидрида 2-хлорникотиновой кислоты с соответствующим образом замещенным 3-амино-2-галогенопиридином в хорошо известных условиях реакции.

Все другие исходные вещества, необходимые для приготовления соединений формулы (II), известны из литературы, они могут быть приобретены или могут быть получены с применением методик, известных из литературы.

Соединение формулы (II), где R² и R⁷ имеют вышеуказанное значение, а R¹ означает алкил, может быть получено путем превращения соединения формулы (XI)

R² и R⁷ имеют вышеуказанное значение, в соответствующее соединение, содержащее щелочной или щелочноземельный металл в положении 5, и последующей реакции соединения со щелочным металлом с соединением вышеуказанной формулы (X)
R¹X
где R¹ и X имеют вышеуказанное значение. Вместо превращения соединения формулы (XI) его соответствующую соль со щелочным металлом на первой стадии, алкилирование соединения формулы (XI) может быть также осуществлено при реакции с соединением формулы (X) в присутствии аминов, таких, как триэтиламин, диазабициклоундецен или 4-(диметиламино)пиридин, или карбонатов и бикарбонатов щелочных металлов, таких, как карбонаты натрия и калия или бикарбонат натрия.

Превращение соединения формулы (XI) в соответствующее соединение со щелочным или щелочноземельным металлом может быть осуществлено при реакции соединения формулы (XI) с гидратом окиси щелочного или щелочноземельного металла, таким, как гидрат окиси лития, гидрат окиси бария, едкий натр или едкое кали, с алкоголятом щелочного металла, таким, как метилат натрия или трет-бутилат калия, с амидом щелочного металла, таким, как амид натрия или амид калия, или с гидридом щелочного металла, таким, как гидрид натрия или гидрид калия. Реакцию обычно проводят в присутствии подходящего органического растворителя при температурах между -78^oC и +60^oC, предпочтительно при комнатной температуре. Инертные органические растворители, такие, как диметилформамид, диметилсульфоксид, тетрагидрофуран, диметоксиэтан, толуол или пиридин, предпочтительны, если гидриды щелочных металлов используют в качестве металлирующих агентов, в то же время, если используют гидрат окиси щелочного или щелочноземельного металла, может быть также применена водная смесь с органическим растворителем, таким, как метанол или тетрагидрофуран. Для превращения полученного таким образом замещенного щелочным или щелочноземельным металлом 5,11-дигидро-6H-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-она в соединение общей формулы (II), раствор суспензии соединения, содержащего щелочной или щелочноземельный металл, подвергают непосредственно, т. е. без выделения, реакции с соединением формулы V при -20^oC или при повышенной температуре, вплоть до точки кипения растворителя или реакционной среды, любой, которая ниже. Замещение происходит почти исключительно по атому азота положения 5 дигидродипиридодиазепинона, даже если R² в исходном веществе формулы (XI) является атомом водорода, в том случае, когда используют один эквивалент основания и один эквивалент соединения формулы (X).

Промежуточные соединения формулы (XI) могут быть получены при циклизации соответствующим образом замещенных соединений формул (VI). Этот способ предпочтителен в тех случаях, когда способность к циклизации может быть ослаблена, если R¹ означает алкил.

Соединение формулы (II), где R¹ и R⁷ имеют вышеуказанное значение, а R² означает алкил, может быть также получено путем превращения 5,11-дигидро-6H-дипиридо[3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-она формулы (II), где R² является водородом, в соответствующую металлическую соль формулы (XII)

где M представляет щелочной металл, такой, как литий, натрий, калий, рубидий или цезий, или M представляет группу MgHal⁺, где Hal означает атом хлора, брома или иода, и последующего алкилирования соединением формулы (XIII)
R²X, (XIII)
где R² и X имеют вышеуказанное значение.

Превращение промежуточного соединения формулы (II) в соответствующее соединение, содержащее щелочной металл, формул (XII) может быть осуществлено при реакции соединения формулы (II), где R² является водородом, с алкиллитием (к примеру, с н-бутиллитием или трет-бутиллитием), можно в присутствии тетраметилэтилендиамина, с диалкиламидом лития (например, диизопропиламидом лития, дициклогексиламидом лития и изопропил-циклогексиламидом лития), с ариллитием (например, фениллитием), с гидратом окиси щелочного металла (например, гидратом окиси лития, натрия или калия), с гидридом щелочного металла (например, гидридом натрия или калия), с амидом щелочного металла(например, амидами натрия или калия) или с реагентом Гриньяра (например, метилмагнийиодид, этилмагнийбромид или фенилмагнийбромид). Один эквивалент основания требуется для образования соединений формулы (XII). Металлирование принято проводить в инертном органическом растворителе при температурах между -78^oC и точкой кипения данной реакционной смеси. Если для металлирования используют алкиллитий, ариллитий, диалкиламид лития или реагент Гриньяра, предпочтительными растворителями являются простые эфиры, такие, как тетрагидрофуран, серный эфир или диоксан, можно в смеси с алифатическими или ароматическими углеводородами, такими, как гексан или бензол, и процесс может быть проведен при температурах между -20 и +80^oC. Когда металлирование осуществляется с помощью гидрида щелочного металла или амида щелочного металла, в дополнение к растворителям, упомянутым ранее, возможно также использовать ксилол, толуол, ацетонитрил, диметилформамид и диметилсульфоксид, когда же применяют гидрат окиси щелочного металла, можно также использовать спирты, такие, как этанол, метанол, и алифатические кетоны, такие, как ацетон, а также смеси этих растворителей с водой.

Для превращения полученной таким образом соли щелочного металла в соединение формулы (II), где R² означает алкил, раствор суспензии соединения, содержащего щелочной металл, подвергают реакции непосредственно, т.е. без выделения продукта реакции, с соединением вышеприведенной формулы (XIII) при температурах между -20^oC и точкой кипения реакционной смеси, предпочтительно при комнатной температуре.

Соединения формулы (I) могут быть при желании превращены в их нетоксичные, фармацевтически приемлемые соли, получаемые в результате присоединения кислоты или основания общепринятыми методами; например, при растворении соединения формулы (I) в подходящем растворителе и обработке раствора одним или более молярными эквивалентами нужной кислоты или основания в соответствии с необходимостью. Изобретение также включает такие соли.

Примерами неорганических и органических кислот, которые могут образовывать в результате присоединения нетоксичные, фармацевтически приемлемые соли с соединением формулы (I), являются следующие: соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, азотная кислота, метансульфокислота, винная кислота, фумаровая кислота, уксусная кислота и им подобные. Примерами неорганических и органических оснований, которые могут образовывать в результате присоединения нетоксичные, фармацевтически приемлемые соли с соединением формулы (I), являются следующие: едкий натр, едкое кали, гидрат окиси магния, аммиак, трометамин и им подобные. Соединения формулы (I) могут образовывать соли при присоединении одного молярного эквивалента кислоты или основания в соответствии с необходимостью.

Как уже указывалось выше, соединения формулы (I) проявляют ингибирующую активность в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1. Ингибируя обратную транскриптазу ВИЧ-1, они в конечном итоге ингибируют или подавляют способность вируса интегрировать его геном в геном потенциальных клеток организма-хозяина, что, в свою очередь, ингибирует или подавляет репликацию вируса. При введении в подходящих лекарственных формах, отдельно или в комбинации с другими противовирусными средствами, иммуномодуляторами, антибиотиками, препаратами, уменьшающими опасность заражения, или вакцинами, эти соединения, таким образом, полезны для профилактики или лечения заражения, вызванного ВИЧ-1. Другим аспектом изобретения, поэтому, является метод профилактики или лечения заражения, вызванного ВИЧ-1, который предусматривает введение человеку, подвергающемуся действию инфекции или инфицированному ВИЧ-1, профилактически или терапевтически эффективного количества нового соединения формулы 1, как описано выше.

Используемый здесь термин "заражение, вызванное ВИЧ-1" подразумевает репликацию ВИЧ-1 в организме человека.

Используемый здесь термин "лечение заражения, вызванного ВИЧ-1" заключает в себе частичное или полное ингибирование или подавление репликации ВИЧ-1 в организме человека, в котором репликация вируса уже начала происходить.

Используемый здесь термин "профилактика заражения, вызываемого ВИЧ-1" заключает в себе полную профилактику осуществления репликации вируса в организме человека, который подвергся воздействию ВИЧ-1, но в котором репликация вируса еще не начала происходить.

Соединения настоящего изобретения являются эффективными средствами для лечения заражения, вызванного ВИЧ-1, благодаря их способности частично или полностью ингибировать или подавлять репликацию ВИЧ-1 в инфицированном организме человека.

При использовании для лечения заражения, вызванного ВИЧ-1, соединения настоящего изобретения могут быть введены либо до, либо после начала клинических проявлений заражения, вызванного ВИЧ-1, таких, как комплекс, относящийся к СПИД (ARC), или СПИД.

Соединения настоящего изобретения эффективны для профилактики вызываемого ВИЧ-1 заражения у людей, благодаря способности этих соединений предотвращать осуществление репликации вируса в организме человека, который подвергся воздействию ВИЧ-1, но в котором репликация вируса еще не начала происходить.

Соединения формулы (I) могут вводиться в разовой или дробных дозах через рот, парентерально или топическим способом. Подходящая доза для приема внутрь для соединения формулы (I) может быть в интервале от 100 мг до 3 г в день. Предпочтительная доза для приема внутрь соединения формулы (I) может быть максимально переносимой дозой, которая находится обычно в интервале между около 200 мг и 2 г в день. В лекарственных формах для парентерального введения подходящая единичная доза может содержать от 0.1 до 250 мг данных соединений, предпочтительно от 1 мг до 200 мг, в то время, как для топического введения предпочитают готовые лекарственные формы, содержащие от 0.01 до 1% активного ингредиента. Следует, однако, учитывать, что вводимые дозы будут меняться от больного к больному и что дозировка для каждого отдельного больного будет зависеть от суждения клинициста, который будет использовать в качестве критерия для установления подходящей дозировки размеры и состояние больного, а также реакцию больного на лекарство.

Когда соединения настоящего изобретения должны быть введены через рот, они могут быть введены как лекарства в виде фармацевтических препаратов, которые содержат их в сочетании с совместимым фармацевтическим носителем. Таким носителем может быть инертный органический или неорганический носитель, подходящий для введения через рот. Такими носителями являются, например, вода, желатин, тальк, крахмал, стеарат магния, аравийская камедь, растительные масла, полиалкиленгликоли, вазелин и тому подобные носители.

Фармацевтические препараты могут быть приготовлены общепринятым способом, и готовые лекарственные формы могут быть твердыми, например, таблетки, драже, капсулы и тому подобные, или жидкими, например, растворы, суспензии, эмульсии и тому подобные. Фармацевтические препараты могут быть подвергнуты таким общепринятым для них операциям, как стерилизация. Далее, фармацевтические препараты могут содержать обычные вспомогательные лекарственные вещества, такие, как предохраняющие средства, стабилизаторы, эмульгаторы, вещества, улучшающие вкус, увлажняющие агенты, буферы, соли для изменения осмотического давления и тому подобные. Твердые носители, которые могут быть использованы, включают, например, крахмал, лактозу, маннит, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, тальк, двуокись кремния, вторичный кислый фосфат кальция и высокомолекулярные полимеры (такие, как полиэтиленгликоль).

Для парентерального применения соединение формулы (I) может быть введено в водном или неводном растворе, в суспензии или эмульсии в фармацевтически приемлемом масле или смеси жидкостей, которые могут содержать бактериостатические агенты, антиоксиданты, предохраняющие средства, буферы или другие растворимые вещества для придания раствору одинакового с кровью осмотического давления, сгущающие агенты, суспендирующие агенты или другие фармацевтически приемлемые добавки. Добавки этого типа включают, например, тартратный, цитратный и ацетатный буферы, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, комплексообразующие вещества (как, например, этилендиаминтетрауксусная кислота), антиоксиданты (такие, как бисульфит натрия, метабисульфит натрия и аскорбиновая кислота), высокомолекулярные полимеры (такие, как жидкие полиэтиленоксиды) для регулирования вязкости и полиэтиленовые производные ангидридов сорбита. Если необходимо, прибавляют также предохраняющие средства, такие, как бензойная кислота, метиловый или пропиловый эфир п-аминобензойной кислоты, хлористый алкилдиметилбензиламмоний и другие четвертичные аммониевые соединения.

Соединения этого изобретения могут также быть введены в виде растворов для использования через нос и могут содержать в дополнение к соединениям данного изобретения подходящие буферы, регуляторы тонуса, средства, предохраняющие от микробов, антиоксиданты и повышающие вязкость средства в водном растворителе. Примерами агентов, используемых для повышения вязкости, являются поливиниловый спирт, производные целлюлозы, поливинилпирролидон, полисорбаты или глицерин. Прибавляемые средства, предохраняющие от микробов, могут включать хлористый алкилдиметилбензиламмоний, тимеросал (этилртутьтиосалицилат натрия), хлорбутанол или фенилэтиловый спирт.

Дополнительно соединения, предусмотренные изобретением, могут быть введены с помощью суппозитория.

Соединения данного изобретения могут быть введены либо отдельно, либо в комбинации с другими противовирусными средствами, иммуномодуляторами, антибиотиками, препаратами, уменьшающими опасность заражения, или вакцинами. Например, соединения этого изобретения могут быть введены в комбинации с одним или более из известных нуклеозидных аналогов ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ, таких, как азидотимидин (AZT), дидезоксиинозин (ddI) и дидезоксицитидин (ddC), других ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ или ингибиторов протеазы ВИЧ.

Как установлено ранее, соединения, предусмотренные изобретением, ингибируют ферментативную активность обратной транскриптазы ВИЧ-1. Основываясь на испытании этих соединений, как описано ниже, видно, что они ингибируют РНК-зависимую ДНК-полимеразную активность обратной транскриптазы ВИЧ-1.

Известно (данные не приведены), что они также ингибируют ДНК-зависимую ДНК-полимеразную активность обратной транскриптазы ВИЧ-1.

При использовании анализа обратной транскриптазы (RT), описанного ниже, соединения могут быть испытаны на способность ингибировать РНК-зависимую ДНК-полимеразную активность обратной транскриптазы ВИЧ-1. Некоторые специфические соединения, описанные в примерах, приведенных ниже, были испытаны таким образом. Результаты этого испытания приводятся в табл. 1.

Анализы обратной транскриптазы (RT).

Теория анализа:
Среди ферментов, в пользу которых кодирует вирус иммунного дефицита человека (ВИЧ-1), находится обратная транскриптаза (1), названная так потому, что она транскрибирует копию ДНК с матричной РНК. Эта активность может быть количественно измерена при анализе свободного от клеток фермента, который был описан ранее (2) и основывается на наблюдении, что обратная транскриптаза способна использовать синтетическую матрицу [poly r(C), инициированную oligo d(G)] для воспроизведения радиоактивно меченной, осаждаемой кислотой нити ДНК, используя ³H-дезоксигуанозин-5'-рифосфат в качестве субстрата. Анализ, описываемый ниже, использует фермент дикого типа, который является преобладающей формой фермента, наблюдаемого у больных, зараженных ВИЧ-1. Использование мутантных обратных транскриптаз (Y181C и Y181L, приготовленных путем сайт-специфического мутагенеза, при котором остаток тирозина в кодоне 181 был заменен остатками цистеина или лейцина соответственно) и аналогичных условий анализа, позволяет оценить эффективность соединений при ингибировании этих мутантных ферментов.

Материалы:
а) Приготовление фермента дикого типа.

Фермент обратная транскриптаза из штамма вируса лимфаденопатии вируса иммунного дефицита человека (ВИЧ-1) (1) был выделен из бактериального штамма JM109 (3) экспрессией клона ДНК pBRTprtl+ (2), который находится под контролем lac-промотора в векторе экспрессии plBl21 (4). Культуру, выращиваемую в течение ночи в среде 2XYT (37^oC, 225 об/мин) (5), к которой добавляется 100 мкг/мл ампициллина для положительной селекции, инокулируют при разбавлении 1:40 в среду M9, к которой добавлено 10 мкг/мл тиамина, 0,5% КАЗ-аминокислот и 50 мкг/мл ампициллина (5). Культуру инкубируют (37^oC, 225 об/мин) до достижения оптической плотности 0,3 - 0,4 при 540 нм. В это время добавляют репрессорный ингибитор ИПТГ (изопропил-b-D-тиогалактопиранозид) до концентрации 0,5 мМ, и смесь инкубируют еще в течение 2 ч. Бактерии осаждают центрифугированием, заново суспендируют в буфере из 50 мМ трис(гидроксиметил)аминометана, 0,6 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты, 0,375 М хлористого натрия и гидролизуют при прибавлении лизоцима (1 мг/мл) в течение 30 мин во льду. Клетки растворяют при прибавлении 0.2% нонидета P-40 и помещают в 1М хлористый натрий.

После удаления нерастворимого остатка центрифугированием белок осаждают при прибавлении 3 объемов насыщенного водного раствора сульфата аммония. Фермент осаждают центрифугированием, повторно суспендируют в буфере для обратной транскриптазы (50 мМ трис(гидроксиметил)аминометан, pH 7.5, 1 мМ этилендиаминтетрауксусная кислота, 5 мМ дитиотреитол, 0.1% нонидет P-40, 0.1 М хлористый натрий и 50% глицерин) и хранят при -70^oC для дальнейшего использования.

б) Состав 2X концентрированной исходной реакционной смеси
Исходный реагент - Концентрация 2X смеси
1 М трис(гидроксиметил)аминометан, pH 7.4 - 100 мМ
1 М дитиотреитол - 40 мМ
1М хлористый натрий - 120 мМ
1% нонидет P-40 - 0,1%
1 М хлористый магний - 4 мМ
[poly r(C)/oligo d(G)] (5:1) - 2 мкг/мл
³H-дезоксигуанозин-5'-трифосфат (81 мкМ) - 0.6 мкМ
Методика анализа:
2X концентрированную исходную реакционную смесь пропорционально разбавляют и хранят при -20^oC. Смесь стабильна, ее размораживают для использования в каждом анализе. Анализ фермента был приспособлен к системе, состоящей из планшета для микротитрования с 96 ячейками, и был описан ранее (6). Трис(гидроксиметил)аминометан (50 мМ, pH 7.4), растворитель (растворитель, разбавленный так, чтобы соответствовать разбавлению соединения) или соединения в растворителе распределяются в планшетах для микротитрования с 96 ячейками (10 мкл/ячейка; 3 ячейки/соединение). Обратную транскриптазу ВИЧ-1 размораживают, разбавляют в 50 мМ трис(гидроксиметил)аминометане с pH 7.4 таким образом, чтобы 15 мкл разбавленного фермента содержали 0.001 E (одна единица означает такое количество фермента, которое превращает 1 микромоль субстрата в минуту при 25^oC), и в каждую ячейку помещают по 15 мкл. По 20 мкл 0.12 - 0.5 М этилендиаминтетрауксусной кислоты добавляют в первые три ячейки планшета для микротитрования. Этилендиаминтетрауксусная кислота хелатирует присутствующий Mg⁺⁺ и предотвращает обратную транскрипцию. Эта группа служит фоном полимеризации, вычитаемым из всех стальных групп. По 25 мкл 2X реакционной смеси прибавляют во все ячейки и подвергают инкубированию при комнатной температуре в течение 60 мин. Анализ завершают, осаждая ДНК в каждой ячейке с помощью 50 мкл 10% трихлоруксусной кислоты (10% в/о) в пирофосфате натрия (1% в/о). Планшет для микротитрования подвергают инкубированию в течение 15 мин при 4^oC и осадок помещают на фильтр N 30 из стекловолокнистой бумаги (Schleicher & Schuell), используя для сбора полуавтоматическое устройство Скэтрон. Фильтры затем промывают дополнительным количеством трихлоруксусной кислоты (5%), содержащей пирофосфат натрия (1%), промывают водным этанолом (70%), сушат и помещают в сцинтилляционные пробирки (6). В каждую пробирку помещают 2 мл смеси для сцинтилляции и подсчитывают на счетчике бета-частиц Бекмана. Расчет процента ингибирования проводят по следующей формуле:

Литература
1. Benn, S., et al., Science, 230:949, 1985.

2. Farmeri, W.G. et al., Science, 236:305, 1987.

3. Yanisch-Perron, C., Viera, J., and Messing, J., Gene, 33:103, 1985.

4. International Biotechnologies, Inc., New Haven, CT 06535.

5. Maniatis, T., Fritsch, E.F., and J. Sambrook, eds. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982.

6. Spira, T., et al., J. Clinical Microbiology, 25:97, 1987.

Для подтверждения того, что соединения, активные согласно данным анализа обратной транскриптазы, способны также ингибировать репликацию ВИЧ в живой системе, полученные в соответствии с изобретением соединения были также подвергнуты испытанию в анализе культуры (синцитиев) T-лимфоцитов человека, описанном ниже. Результаты этого исследования представлены в табл. 1.

Анализ синцитиев (культуры T-лимфоцитов человека).

Теория анализа:
Образование синцитиев является характерной чертой in vitro культур CD4+ T-лимфоцитов, инфицированных ВИЧ-1. В этом анализе T-лимфоциты подвергают обработке соединением, являющимся предполагаемым ингибитором репликации, а затем их инфицируют ВИЧ-1. После инкубирования культуру проверяют на образование синцитиев. Отсутствие или сокращение числа синцитиев служит мерой оценки способности исследуемых соединений ингибировать репликацию ВИЧ.

Метод анализа:
Клетки-мишени, обозначенные c8166, являются субклоном клеток лимфомы человека T-лимфоцитного происхождения, их получают с начальной плотностью 5·10⁴ в 100 мкл в культуральной среде RPMI 1640 (+10% плодной бычьей сыворотки) в плоскодонных чашках с 96 ячейками. В состав включают подобранное количество исследуемого соединения, растворенного в диметилсульфоксиде. Через 24 ч 50 - 100 доз, вызывающих эффект у 50% испытываемых культур, штамма лимфотрофического вируса T-лимфоцитов человека (HTLV-IIIB) ВИЧ-1 (2) инокулируют в каждую культуру. Контрольные культуры получают соединение или только вирус. Через 4 дня после заражения вирусом культуры визуально исследуются на частоту и распределение индуцированных вирусом гигантоклеточных синцитиев. Процент ингибирования исследуемым соединением определяется при сравнении с контрольными значениями. Подтверждение наличия или отсутствия репликации вируса осуществляют путем сбора свободных от клеток культуральных жидкостей от всех экспериментальных групп для определения наличия или отсутствия заразного потомства через индукцию образования синцитиев во вторичных культурах T-лимфоцитов человека через 3 дня.

Литература
1. M.Somasundaran and H.L Robinson, Science, 242, 1554 (1988).

2. G. M. Shaw, R.H. Hahn, S.K. Arya, J.E. Groopman, R.C. Gallo and F. Wong-Staal, Science, 226, 1165 (1984).

Для того, чтобы оценить специфичность активности ингибирования фермента соединениями, предлагаемыми данным изобретением, некоторые из соединений были испытаны с использованием известных, как таковых, методов анализа на способность ингибировать обратную транскриптазу вируса кошачьей лейкемии и ДНК-альфа-полимеразу из зобной железы теленка. Ни одно из испытанных таким образом соединений не обладало какой-либо ингибирующей активностью по отношению к этим ферментам. Эти результаты показывают, что ингибирующая активность по отношению к ферментам у соединений, предлагаемых данным изобретением, направлена довольно специфически против обратной транскриптазы ВИЧ-1.

Для грубой оценки цитотоксичности соединений, предлагаемых изобретением, несколько таких соединений были испытаны при анализе бромистого 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-тетразолия (МТТ), описанном ниже. Результаты этого испытания приведены в табл. 1. Соединения, имеющие относительно высокое значение концентрации для проявления 50%-ной цитотоксичности (ЦК₅₀). являются предпочтительными.

Анализ МТТ.

Теория анализа:
Анализ МТТ (бромистого 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил- тетразолия) основывается на расщеплении бромида тетразолия метаболически активными клетками, приводящем к синей окраске, соответствующей с высокой точностью количеству вещества. Этот анализ был описан ранее (1), но был оптимизирован для испытаний, описанных здесь.

Метод анализа:
В анализе в качестве линии клеток-мишеней использована линия клеток H9 (2), полученная в виде суспензии линии клеток лимфомы человека, выращенной в среде RPMI 1640 с добавлением 10%-ной плодной бычьей сыворотки. Клетки (100 мкл) помещают в ячейки микробиологического планшета в концентрации 10⁵ клеток в мл в присутствии меняющихся концентраций ингибитора. Клетки инкубируют при 37^oC в увлажняемом термостате в атмосфере углекислого газа. Через 5 дней в каждую ячейку прибавляют 20 мкл МТТ (5 мг/мл в RPMI 1640, обработанный ультразвуком, профильтрованный через 0.2 мк фильтр и хранившийся при 4^oC). После 4 ч дополнительного инкубирования при 37^oC в каждую ячейку прибавляют 60 мкл тритона-X и тщательно перемешивают, чтобы помочь растворению кристаллов. В каждую ячейку прибавляют 5 мкл абсолютного этанола и полученную смесь инкубируют 30 мин при 60^oC и немедленно снимают показания с табло считывающего устройства (Dynatech) при длине волны 570 нм.

Полученные таким образом данные анализируют методом нелинейной регрессии для получения величин ЦК₅₀.

Литература
1. Mosmann, Tim, J. Immunol. Methods, 65:55, 1983.

2. Jacobs, J.P., J. Natl. Cancer Inst., 34:231, 1965.

Получение соединений формулы (I) поясняется следующими примерами.

Пример 1.

5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(4-пиразолил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e] [1,4]диазепин-6-он.

а) 4-(Трибутилстаннил)пиразол.

К раствору 4-иодпиразола (0,964 г) в тетрагидрофуране (20 мл), находящемуся под азотом и охлажденному до -60^oC, прибавляли трет-бутиллитий (1,7 М раствор в пентане, 9 мл) с такой скоростью, чтобы температура оставалась ниже -55^oC. Затем добавляли хлорид трибутилолова (1.2 мл) и смеси давали нагреться до комнатной температуры. Реакцию прекращали, добавляя воду, затем разбавляли этилацетатом, промывали водой, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. После хроматографии остатка на силикагеле (в этилацетате/гексане) получили 4-(трибутилстаннил)пиразол (0.288 г) в виде масла.

б) 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(4-пиразолил)-6H-дипиридо [3,2-b:2', 3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Смесь 4-(трибутилстаннил)пиразола (0.270 г), 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-трифторметансульфонилокси-6H-дипиридо [3,2-b: 2', 3'-e] [1,4]диазепин-6-она (0.292 г), хлористого лития (0.157 г) и хлористого бис(трифенилфосфин)палладия(II) (0.034 г) в диметилформамиде (2 мл) нагревали в запаянной трубке при 130^oC в течение 15,5 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и перемешивали 2 ч с водным раствором фтористого калия. Смесь разбавляли этилацетатом, промывали водой, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток разделяли на силикагеле (в этилацетате/гексане с градиентом), чтобы получить указанное в заглавии соединение, которое кристаллизовали из этилацетата/изопропилового эфира, т.пл. 194-196^oC.

Пример 2.

5,11-Дигидро-11-этил-2-(1-этилпиразол-4-ил)-5-метил-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (пена, т.пл. 60-62^oC) было получено из 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-трифторметансульфонилокси- 6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e][1,4]диазепин-6-она и N-этил-4-иодпиразола по способу, аналогичному описанному в примере 1.

Пример 3.

5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(1-метилпиразол-4-ил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (т.пл. 65-67^oC) было получено из 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-трифторметансульфонилокси- 6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e] [1,4] диазепин-6-она и N-метил-4-иодпиразола по способу, аналогичному описанному в примере 1.

Пример 4.

5,11-Дигидро-11-н-пропил-2-(4-пиразолил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2', 3'-e] [1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (т. пл. 291-292^oC) было получено из 5,11-дигидро-11-н-пропил-2-трифторметансульфонилокси-6H- дипиридо[3,2-b:2', 3'-e] [1,4]диазепин-6-она и 4-(трибутилстаннил)пиразола по способу, аналогичному описанному в примере 1.

Пример 5.

5,11-Дигидро-5-метил-11-н-пропил-2-(4-пиразолил)-6H-дипиридо [3,2-b:2', 3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (т. пл. 206-207^oC) было получено из 5,11-дигидро-5-метил-11-н-пропил-2-трифторметансульфонилокси- 6H-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-она и 4-(трибутилстаннил)пиразола по способу, аналогичному описанному в примере 1.

Пример 6.

5,11-Дигидро-5-метил-11-циклопропил-2-(4-пиразолил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (т. пл. 233-235^oC) было получено из 5,11-дигидро-5-метил-11-циклопропил-2-трифторметансульфонилокси- 6H-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-она и 4-(трибутилстаннил)пиразола по способу, аналогичному описанному в примере 1.

Пример 7.

2-(1-Карбамилпиразол-3-ил)-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6H- дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-он
К раствору 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(4-пиразолил)-6H- дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e][1,4]диазепин-6-она (0.054 г) в хлороформе (5 мл) прибавляли трифосген (0,050 г) и диизопропилэтиламин (0,2 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре 4 дня. Затем прибавляли концентрированный раствор гидрата окиси аммония (10 капель) и смесь перемешивали 10 мин. Смесь разбавляли хлороформом, промывали водой, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (в этилацетате/этаноле) и получали указанное в заглавии вещество, которое подвергали кристаллизации из этилацетата/изопропилового эфира, т.пл. 175-180^oC.

Пример 8.

2-(1-Ацетилпиразол-4-ил)-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6H- дипиридо[3,2-b:2',3'-e1[1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (т. пл. 186-188^oC) было получено из 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(4-пиразолил)-6H- дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e] [1,4] диазепин-6-она при нагревании в уксусном ангидриде при кипении в течение 1 ч в присутствии уксуснокислого калия.

Пример 9.

5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(3-пиразолил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e] [1,41диазепин-6-он.

Смесь 5,11-дигидро-[1-(N,N-диметиламиносульфонил)пиразол-5-ил]- 11-этил-5-метил-6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e][1,4]диазепин-6-она (0,051 г) и гидразина гидрата (0,41 г) в этиловом спирте (0,5 мл) перемешивали при кипении в течение 3 дней. Охлажденную смесь разбавляли этилацетатом, промывали водой, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток разделяли с помощью препаративной хроматографии на пластинке (в этилацетате/гексане) и получали 0,020 г указанного в заглавии соединения в виде пены.

Пример 10.

5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(3-метилпиразол-4-ил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (т. пл. 113-115^oC) было получено из 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-трифторметансульфонилокси- 6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e][1,4]диазепин-6-она и 3-метил-4-(трибутилстаннил)пиразола по способу, аналогичному описанному в примере 1.

Пример 11.

5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(1-метилпиррол-2-ил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

а) (1-Метилпиррол-2-ил)трибутилолово
1-Метилпиррол (0.065 г) прибавляли к охлажденному (-35^oC) перемешиваемому раствору бутиллития (2,5 М, 0,32 мл) в безводном тетрагидрофуране (5 мл). Затем прибавляли N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамин (0,090 г) и смесь перемешивали 90 минут при -10 - -15^oC. Затем медленно прибавляли хлористое трибутилолово (0,26 г) и смеси давали нагреться до комнатной температуры, перемешивали 15 мин. Растворитель отгоняли и получали (1-метилпиррол-2-ил)трибутилолово, подходящее для использования в следующей реакции.

б) 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(1-метилпиррол-2-ил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Смесь (1-метилпиррол-2-ил)трибутилолова, полученного выше, 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-трифторметансульфонилокси-6H-дипиридо [3,2-b: 2', 3'-e] [1,4] диазепин-6-она (0,20 г), хлористого бис(трифенилфосфин)палладия(II) (0,010 г), хлористого лития (0,100 г) и безводного диметилформамида (5 мл) перемешивали при 90^oC в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли водой, экстрагировали хлористым метиленом, сушили (безводным сульфатом магния), фильтровали и концентрировали. Остаток сначала хроматографировали на колонке с силикагелем в этилацетате/гексанах (1:4), а затем в этилацетате/гексанах (1: 1), получали смесь двух продуктов. После окончательной очистки с использованием препаративной хроматографии на пластинке (этилацетат/гексаны, 1:1) получали 0,025 г указанного в заглавии соединения в виде пены, т.пл. > 60^oC.

Пример 12.

5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(3-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e] [1,4]диазепин-6-он.

а) 3-Бром-1-(триизопропилсилил)пиррол.

N-Бромсукцинимид (6.4 г) прибавляли в виде одной порции к перемешиваемому раствору 1-(триизопропилсилил)пиррола (8.00 г) в безводном тетрагидрофуране (80 мл) при -78^oC. Смесь перемешивали при этой температуре 2 ч, а затем смеси давали нагреться до комнатной температуры в течение ночи. Растворитель удаляли, к остатку прибавляли воду и продукт экстрагировали хлористым метиленом, экстракт сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (в гексанах) и концентрировали, получали 10,00 г 3-бром-1-(триизопропилсилил)пиррола в виде бесцветного масла.

б) [1-(Триизопропилсилил)пиррол-3-ил] трибутилолово было получено по способу, аналогичному описанному в примере 16.

в) 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-[1-(триизопропилсилил)пиррол- 3-ил]-6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e] [1,4]диазепин-6-он был получен по способу, аналогичному описанному в примере 16.

г) 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(3-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2', 3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Фтористый тетрабутиламмоний в тетрагидрофуране (1М, 0.36 мл) прибавляли к раствору 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-[1-(триизопропилсилил) пиррол-3-ил] -6H-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-она (0.17 г) в безводном тетрагидрофуране (10 мл). После перемешивания полученной смеси в течение 1 ч, последнюю разбавляли серным эфиром, промывали водой, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (в этилацетате/гексанах, 1:1), а затем подвергали кристаллизации из хлороформа/гексанов и получали 0,083 г указанного в заглавии соединения, т. пл. 173-174^oC.

Пример 13.

5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(2-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e] [1,4]диазепин-6-он.

а) (1-(трет-бутоксикарбонил)пиррол-2-ил)трибутилолово.

Диизопропиламид лития в безводном тетрагидрофуране (1,2М, 0,83 мл) медленно прибавляли к охлажденному (-78^oC) раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)пиррола (0,67 г) в абсолютном тетрагидрофуране (5 мл). После перемешивания в течение 3 ч медленно прибавляли хлорид трибутилолова (0,65 г), затем смеси давали нагреться до комнатной температуры в течение ночи. Растворитель удаляли и получали (1-(трет-бутоксикарбонил)пиррол-2-ил) трибутилолово, подходящее для использования в следующей реакции.

б) Смесь 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-трифторметансульфонилокси- 6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e][1,4]диазепин-6-она (0,2 г), (1-(трет-бутоксикарбонил)пиррол-2-ил)трибутилолова, полученного выше, тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,065 г), хлористого лития (0,127 г) и безводного диоксана (8 мл) кипятили в течение 4 ч. Растворитель затем отгоняли, а остаток растворяли в хлористом метилене, промывали водой, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (в этилацетате/гексанах, 1:1), а затем подвергали кристаллизации из этилацетата/гексанов. Трет-бутоксикарбонильную группу удаляли при перемешивании продукта конденсации 30 мин в эфире, насыщенном хлористым водородом. Растворитель отгоняли, а остаток очищали с помощью препаративной хроматографии на пластинке (в этилацетате/гексанах, 1:4), получали 0.022 г указанного в заглавии соединения в виде пены, т.пл. > 60^oC.

Пример 14.

2-(1-Ацетилпиррол-2-ил)-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он
Гидрид натрия (0,013 г, 60%-ная суспензия в масле) прибавляли к раствору 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(2-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e][1,4] -диазепин-6-она (0.100 г) в безводном диметилформамиде (3 мл) и перемешивали 30 мин. После охлаждения до 0^oC прибавляли хлористый ацетил (0.025 г) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры в течение ночи. Прибавляли воду и продукт экстрагировали хлористым метиленом, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток очищали путем препаративной хроматографии на пластинке (в этилацетате/гексанах, 1:1). После кристаллизации из этилацетата/петролейного эфира получали 0.018 г указанного в заглавии соединения, т.пл. 106-108^oC.

Пример 15.

2-(2-Ацетилпиррол-3-ил)-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он, т.пл. >80^oC.

Хлорокись фосфора (0.054 г) прибавляли к охлажденному (10^oC) безводному N, N-диметилацетамиду (0.031 г), смесь перемешивали 15 мин после удаления охлаждающей бани. Затем прибавляли дихлорэтан (2 мл) и полученную смесь охлаждали до 5^oC. 5,11-Дигидро-11-этил- 5-метил-2-(3-пирролил)-6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e][1,4]диазепин-6-он (0.10 г) в дихлорметане (5 мл) прибавляли в течение 10 мин, баню для охлаждения удаляли и смесь нагревали при кипении в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь выливали в избыток водного ацетата натрия и перемешивали в течение 2 ч. Продукт экстрагировали хлористым метиленом, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток очищали с помощью препаративной хроматографии на пластинке (в эфире) и получали 0.014 r указанного в заглавии соединения в виде пены, т. пл. >80^oC. Было выделено также 0.038 г 2-(2-ацетилпиррол-4-ил)-5,11-дигидро-11-этил- 5-метил-6H-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-она (пример 17), т.пл. 219-220^oC.

Пример 16.

5,11-Дигидро-2-[2-(этоксикарбонил)пиррол-4-ил] -11-этил-5-метил- 6H-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-он
а) Хлорангидрид трихлоруксусной кислоты (0.114 г) прибавляли к раствору 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(3-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e][1,4] -диазепин-6-она (0.052 г) в диглиме (2.5 мл), полученную смесь перемешивали при 100^oC в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали затем на лед, продукт экстрагировали хлористым метиленом, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (в этилацетате/хлористом метилене, 1:9) и получали 0,070 г 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-[2-(трихлорацетил)пиррол-4-ил] -6H- дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e]-[1,4] диазепин-6-она.

б) Продукт (0,065 г) по примеру 16а прибавляли к абсолютному этанолу (6 мл) и триэтиламину (0,035 г), полученную смесь перемешивали при 90^oC в течение 10 ч. Очистка, согласно примеру 16а, с последующей кристаллизацией из этилацетата/гексанов приводила к 0,048 г соединения, указанного в заглавии, т.пл. 209-210^oC.

Пример 17.

2-(2-Ацетилпиррол-4-ил)-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он
Соединение, указанное в заглавии, (т.пл. 219-220^oC) было выделено из реакционной смеси, как описано в примере 20.

Пример 18.

2-(2-Цианпиррол-3-ил)-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Раствор 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(3-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2', 3'-e] [1,4] диазепин-6-она (0.093 г) в диметилформамиде (1 мл) и ацетонитриле (1 мл) охлаждали до -50^oC, к раствору прибавляли в один прием 0,041 г хлорсульфонилизоцианата. Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали 2 ч, затем выливали в воду, экстрагировали хлористым метиленом, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток очищали с помощью препаративной хроматографии на пластинке (в эфире) и получали два чистых вещества. Кристаллизация каждого из этих чистых веществ из этилацетата/петролейного эфира приводила к 0,038 г соединения, указанного в заглавии, т.пл. 262-263^oC, и к 0,038 г 2-(2-цианпиррол-4-ил)-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-она, т.пл. 268-269^oC.

Пример 19.

2-(2-Цианпиррол-4-ил)-5.11-дигидро-11-этил-5-метил-6H-дипиридо [3,2-b: 2'.3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (т.пл. 268-269^oC) было выделено из реакционной смеси, как описано в примере 18.

Пример 20.

5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(1-метилпиррол-3-ил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Гидрид натрия (0,008 г, 60%-ная суспензия в масле) прибавляли к раствору 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(3-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e][1,4] диазепин-6-она (0,065 г) в безводном диметилформамиде (3 мл) и перемешивали 30 мин. Прибавляли йодистый метил (0,2 мл) и реакционную смесь перемешивали еще 2 ч. Прибавляли воду и продукт экстрагировали хлористым метиленом, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (в этилацетате/гексанах, 1:1), а затем очищали с помощью препаративной хроматографии на пластинке (в этилацетате/гексанах, 1: 1), получали 0,040 г соединения, указанного в заглавии, т.пл. 187-188^oC.

Пример 21.

2-(2-Карбоксипиррол-4-ил)-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6H-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Смесь 0,092 г 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-[2-(трихлорацетил) пиррол-4-ил] -6H-дипиридо[3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-она (пример 21а), карбоната калия (0,55 г) и воды (2,5 мл) перемешивали при 95^oC в течение 1,5 ч. Смесь охлаждали, подкисляли и промывали хлористым метиленом. Водную фазу фильтровали и получали 0,016 г соединения, указанного в заглавии, которое перекристаллизовывали из уксусной кислоты/гексанов, т.пл. 256-257^oC.

Пример 22.

2-(2-Карбамилпиррол-4-ил)-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6H-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Раствор 0.100 г 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-[2-(трихлорацетил) пиррол-4-ил] -6H-дипиридо[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-она (пример 21а) в безводном тетрагидрофуране (15 мл) охлаждали до -15^oC и пропускали через раствор газообразный аммиак в течение 15 мин. Смесь затем плотно закрывали и перемешивали при комнатной температуре 3 ч. После отгонки растворителя прибавляли воду и смесь промывали хлористым метиленом. Продукт отфильтровывали от водной фазы, сушили и перекристаллизовывали из диметилформамида/этанола, получали 0,056 г указанного в заглавии соединения, т.пл. 284-285^oC.

Пример 23.

5,11-Дигидро-5-этил-11-метил-2-(2-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e] [1.4]диазепин-6-он.

Смесь 2-хлор-5,11-дигидро-5-этил-11-метил-6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e] [1,4] диазепин-6-она (0,21 г), (трет-бутоксикарбонил)пиррола (0,25 г), уксуснокислого калия (0,20 г), хлористого бис(трифенилфосфин)палладия(II) (0,030 г) и 1-метил-2-пирролидинона (2,5 мл) нагревали в запаянной трубке при 140^oC в течение 14 ч. После удаления растворителя прибавляли воду и продукт экстрагировали хлористым метиленом, сушили (безводным сульфатом натрия), фильтровали и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (в этилацетате/хлористом метилене, 1:9) и далее очищали с помощью препаративной хроматографии на пластинке (в этилацетате/хлористом метилене, 1:9), получали после перекристаллизации из этилацетата/гексанов 0,020 г указанного в заглавии соединения, т.пл. 161-162^oC.

Пример 24.

5,11-Дигидро-5,11-диметил-2-(2-пирролил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2', 3'-e] [1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (т.пл. 158-160^oC) было получено из 2-хлор-5,11-дигидро-5,11-диметил-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-она и (трет-бутоксикарбонил)пиррола по способу, аналогичному описанному в примере 23.

Пример 25.

11-Циклопропил-5,11-дигидро-5-метил-2-(3-пиррплил)-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заглавии соединение (т.пл. 254-255^oC) было получено из 11-циклопропил-5,11-дигидро-5-метил-2-трифторметансульфонилокси- 6H-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e] [1,4]диазепин-6-она и [1-(триизопропилсилил)пиррол-3-ил] трибутилолова по способу, аналогичному описанному в примерах 17 и 16.

Соединения из следующих примеров были получены по способу, аналогичному описанным выше, или с использованием соответствующих модификаций этого способа.

Пример 26.

5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-2-(4-пиразолил)-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e] [1,4]диазепин-6-он, т.пл. 213-214^oC.

Пример 27.

5,11-Дигидро-11-этил-2-(5-метоксииндол-2-ил)-5-метил-6H-дипиридо [3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-он, т.пл. 234,5-235,5^oC.

Пример 28.

5,11-Дигидро-11-этил-2-(индол-3-ил)-5-метил-6H-дипиридо [3,2-b:2',3'-e] [1,4]диазепин-6-он, т.пл. 241-241.5^oC.

Нижеследующие примеры иллюстрируют возможные составы предлагаемой фармацевтической композиции.

Пример 29.

Капсулы или таблетки (см. табл.).

Соединение, полученное по примеру 12, вносят в порошкообразную смесь из предварительно смешанных эксципиентов, как указано выше, за исключением смазывающего вещества. Затем вносят смазывающее вещество и полученную смесь прессуют в таблетки или заполняют ею твердые желатиновые капсулы.

Пример 30.

Парентеральные растворы.

Ингредиенты - Количество
Соединение по примеру 12 - 500 мг
Винная кислота - 1,5 г
Бензиловый спирт - 0,1% по весу
Вода для инъекций - Cколько требуется до 100 мл
Эксципиенты смешивают с водой, а затем добавляют соединение по примеру 12. Перемешивание продолжают до получения прозрачного раствора. Доводят pH этого раствора до 3.0, затем фильтруют в подходящие пузырьки или ампулы и стерилизуют при автоклавировании.

Пример 31.

Растворы для введения через нос.

Ингредиенты - Количество
Соединение по примеру 12 - 100 мг
Лимонная кислота - 1,92 г
Хлористый алкилдиметилбензиламмоний - 0,025% по весу
Этилендиаминтетрауксусная кислота - 0,1% по весу
Поливиниловый спирт - 10% по весу
Вода - Cколько требуется до 100 мл
Эксципиенты смешивают с водой и затем добавляют соединение по примеру 12, перемешивание продолжают до получения прозрачного раствора. Доводят pH раствора до 4,0 и затем фильтруют в подходящие пузырьки или ампулы.

Формула изобретения

1. 2-Гетероарил-5,11-дигидро-6Н-дипиридо[3,2-b:2',3'-e] [1,4]диазепин-6-оны общей формулы I

где R¹ означает атом водорода или алкил с 1 - 3 атомами углерода;
R² означает алкил с 1 - 4 атомами углерода или циклоалкил с 3 - 6 атомами углерода;
Ar - означает группу формулы (а) - (д)





где R³ означает водород, метил, этил, ацетил или аминокарбонил;
каждый из R⁴, R⁴ и R⁶ означает водород или один из R⁴, R⁵ и R⁶ означает метил, ацетил, этоксикарбонил, карбоксигруппу, аминокарбонил или цианогруппу, а два других заместителя оба означают водород;
каждый из А, В, D и E является метиновой группой, одна из которых может быть замещена алкилоксигруппой с 1 - 3 атомами углерода,
или их фармацевтически приемлемые соли.

2. 2-Гетероарил-5,11-дигидро-6Н-дипиридо-[3,2-b: 2', 3'-e] [1,4] диазепин-6-оны общей формулы I по п.1, где R¹ означает атом водорода, алкил с 1 - 3 атомами углерода, R² означает алкил с 1 - 3 атомами углерода или циклоалкил с 3 - 4 атомами углерода, Ar означает группу формулы (а) - (д), где R³ означает водород, метил или этил; каждый из R⁴, R⁵ и R⁶ означает водород или один из R⁴, R⁵ и R⁶ означает метил, ацетил, этоксикарбонил, аминокарбонил или цианогруппу, а два других заместителя оба означают водород, каждый из А, В, D или Е является метиновой группой, одна из которых может быть замещена алкилоксигруппой с 1 - 3 атомами углерода, или их фармацевтически приемлемые соли.

3. 2-Гетероарил-5,11-дигидро-6Н-дипиридо-[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-оны общей формулы I по п.1, где R¹ означает метил, R² означает алкил с 2 - 3 атомами углерода или циклоалкил с 3 - 4 атомами углерода, Ar означает группу формулы (а), (б) или (в), где R³ означает водород или метил, каждый из R⁴, R⁵ и R⁶ означает водород или один из R⁴, R⁵ и R⁶ означает метил, ацетил, этоксикарбонил, аминокарбонил или цианогруппу, а два других заместителя оба означают водород, или Ar означает группу формулы (r) или (д), где R³ означает водород или метил, каждый из R⁴, R⁵ и R⁶ означает водород, каждый из А, В, D и Е является метиновой группой, одна из которых может быть замещена алкилоксигруппой с 1 - 3 атомами углерода, или их фармацевтически приемлемые соли.

4. 2-Гетероарил-5,11-дигидро-6Н-дипиридо-[3,2-b:2',3'-e][1,4]диазепин-6-оны общей формулы I, выбранные из группы, состоящей из 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(3-пирролил)-6Н-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e][1,4]диазепин-6-оны; 11-циклопропил-5,11-дигидро-5-метил-2-(3-пирролил)-6Н-дипиридо[3,2-b: 2', 3'-e] [1,4] диазепин-6-оны; 11-циклопропил-5,11-дигидро-5-метил-2-(4-пиразолил)-6Н-дипиридо[3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-оны и 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(4-пиразолил)-6Н-дипиридо[3,2-b: 2',3'-e][1,4]диазепин-6-оны, и их фармацевтически приемлемых солей.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и активное вещество, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит соединение общей формулы I по пп.1 - 4 в профилактически или терапевтически эффективном количестве.

Приоритет по признакам:
18.02.94 - R¹ и R² имеют указанные в формуле изобретения значения, Ar означает группу формул (а), (б) и (в), где R³ означает водород, метил, этил, ацетил, каждый из R⁴, R⁵ и R⁶ означает водород или один из R⁴, R⁵ и R⁶ означает метил, ацетил, этоксикарбонил, аминокарбонил или цианогруппу, а два других заместителя оба означают водород; п.5 формулы изобретения, в котором активное вещество имеет радикалы с вышеприведенными значениями;
14.12.94 - Ar означает группу формул (а), (б) и (в), где R³ означает аминокарбонил, один из R⁴, R⁵ и R⁶ означает карбоксигруппу, а два других заместителя оба означают водород, или группу формулы (г) и (д), где А, В, D, Е, R³ и R⁴ имеют указанные в формуле изобретения значения, п.5 формулы изобретения, в котором активное вещество имеет радикалы с вышеприведенными значениями.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4