Средство для лечения и профилактики патологического разрастания соединительной ткани в паренхиматозных органах

 

Изобретение относится к области медицины. Перфторуглеродные соединения предложены в качестве средства для профилактики и лечения патологического разрастания соединительной ткани в паренхиматозных органах. Указанное средство может быть использовано при циррозе, фиброзе печени, пневмосклерозе, амилоидозе, узловом зобе и подобных заболеваниях. Предложенное средство более эффективно. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к медицине, а именно к профилактике и лечению патологического разрастания соединительной ткани в паренхиматозных органах.

Преимущественная область использования изобретения: прекращение и предупреждение дальнейшего развития соединительно-тканного перерождения паренхиматозных органов, в частности лечение больных циррозом печени.

Описание нами выполнено на примере цирроза печени, что вполне, как мы полагаем, корректно, так как патоморфологические особенности заболеваний, связанных с фибротическим перерождением паренхиматозных органов (таких, как селезенка, почки (амилоидоз), легких (пневмосклероз, бронхоэктатическая болезнь), молочная железа (матопатия)) схожи тем, что во всех этих случаях их патогенез заключен в патологическом (т.е. вредном в данном случае для организма) разрастании соединительной ткани.

Лечение циррозов печени является актуальной проблемой, не решенной по настоящее время.

Цирроз печени (хронический прогрессирующий склерозирующий гепатит) - тяжелое заболевание с высоким процентом летальности (Тареев Е.М., 1956). По данным М. П. Павловского (1959), на 9435 аутопсий в 0,62% случаев причиной смерти явился цирроз печени. Основной причиной этого заболевания считается болезнь Боткина, на почве которой цирроз развивается в 53-80% случаев (Тареев Е.М., 1956, Шубладзе А.К., 1955; Мусабаев И.К., 1961; Крутских Е.В. 1976).

А.С.Логинов с соавт. (1987) указывает, что с точки зрения морфолога цирроз печени - это конечная стадия эволюции многочисленных воспалительно-некротических и дегеративно-некротических патологических процессов паренхимы или желчевыводящей системы печени, характеризующаяся регенеративной и фибротической перестройкой структуры и сосудистой системы органа. Аномальная реконструкция дольковой архитектуры, присущая циррозу печени, может возникать вследствие длительно рецидивирующих мелкоочаговых или крупноочаговых некрозов паренхимы печени, либо в результате медленно прогрессирующего активного фиброзирования, распространяющегося из центра и периферии печеночной дольки, а также вследствие развития фиброзных септ в области деструкции портальных и перипортальных желчных протоков при длительной внутри- или внепеченочной обструкции тока желчи. Важнейшим условием образования псевдодолек - участков паренхимы, полностью или частично окруженных соединительно-тканными прослойками, является развитие активных (т.е. с активным фиброгенезом) и пассивных (т.е. в результате коллабирования соединительно-тканных волокон в зоне парензиматозного некроза) фиброзных септ между центральными венами и портальными трактами.

Образование таких септ препятствует упорядоченному регенеративному процессу с восстановлением нормальной структуры дольки. Регенераторное разрастание сохранившихся островков между септами приводит к образованию цирротических псевдодолек. Сдавление регенераторными цирротическими узелками терминальных разветвлений печеночных вен и ветвей воротной вены в портальных трактах является основной причиной портальной гипертензии. Прогноз цирроза печени в значительной степени определяется выраженностью и скоростью прогрессирования воспалительно-некротических процессов в паренхиме печени и сопровождающей их фиброзирующей реакции, т.е. степенью активности цирротического процесса (Логинов А.С. с соавт., 1987).

Как указывает Н.Х.Абуллаев (1968), образование соединительной ткани при некрозе печеночной паренхимы происходит комбинированно - внутри долек, из портальных полей и центрилобулярно. После гибели ткани печени возникают воспалительные и пролиферативные процессы, сопровождающиеся репарацией клеток печени и усиленной васкуляризацией ткани; основную роль в образовании фиброза играют клетки ретикулоэндотелиальной системы. Вышеописанные процессы сопровождаются гистотоксической гипоксией (угнетением дыхания печеночной ткани), в том числе и спустя 20-40 дней после прекращения воздействия патогена (CCl₄). В эти же сроки пролиферативные процессы, сменившие дистрофические после отмены патогена, начинают доминировать, то есть начинает формироваться собственно цирроз печени.

Согласно Правилам составления заявки на изобретение (раздел 12.4.2), "если изобретение относится к применению известного ранее ... вещества ... по новому назначению, то к его аналогам относят известные ... вещества ... того же назначения.

А. С. Логинов с соавт. (1987) сообщает о успешном применении при циррозе печени колхицина (по 1 мг. в день, циклами по 5 дней в неделю в течение 5 лет. Этот препарат используется в основном как противоопухолевый и обладает антимитотическим эффектом, т.е. приостанавливает деление всех клеток в организме, в том числе и фиброзных.

Согласно Е. В. Крутских (1976) и А.С.Логинову с соавт. (1987), лечение кортикостероидами является общепринятым методом патогенетической терапии прогрессирующих заболеваний печени. Основанием для их применения послужило антивоспалительное, антиаллергическое и антитоксическое действие, торможение образования фиброзной ткани, подавление иммунологических процессов (образование антител и аутоантител), ускорение синтеза белка, а также выраженное диуретическое действие.

Ввиду того, что кортикостероидные средства являются единственно известными средствами, применяющимися с целью торможения патологического разрастания соединительной ткани в зоне воспаления, то есть основного патогенетического начала циррозирования печени, их применение для лечения цирроза печени нами выбрано в качестве прототипа заявляемого изобретения.

Прототипом изобретения является применение гормональных препаратов (кортикостероидов) для предупреждения разрастания соединительной ткани в паренхиме печени при ее цирротическом перерождении (Крутских Е.В., 1976; Логинов А.С. с соавт., 1987).

Существенные признаки прототипа: 1. Способ применения прототипа Кортикостероиды (преднизолон, например) при диагностированном циррозе печени вводятся парентерально в поддерживающей дозе 5-15 мг в сутки в течение 6-38 месяцев (Крутских Е.В., 1976; Логинов А.С. с соавт., 1987).

2. Гистологические данные при применении прототипа.

Как указывает Н.Х.Абдулаев (1068, 1989), при хроническом отравлении крыс CCl₄ (по 0,12 мл/100 г массы тела в течение 40-60 дней), начиная с 60-го дня, в паренхиме печени (наряду с проявлениями, касающимися непосредственного действия яда - авт.) несколько усиливаются возникшие ранее явления разрастания соединительной ткани с пролиферацией желчных протоков. Далее автор указывает, что "... Введение с 65-го дня после прекращения отравления CCl₄ по 80-й день преднизолона, в отличие от контроля, ... лишь несколько уменьшает степень выраженности морфологических изменений. В обеих группах опытов отмечаются некоторая дискомплексация печеночных клеток, отчетливая гидропическая дистрофия, значительная пролиферация купферовских клеток, изменение тинкториальных свойств гепатоцитов и разрастание соединительно-тканных волокон. Отличие при введении преднизолона в период репарации ... заключается лишь в меньшей выраженности приведенных изменений".

Признаки, совпадающие с существенными признаками заявляемого изобретения.

1. Прототип применяется для торможения соединительно-тканного перерождения печени при ее циррозировании.

2. Прототип применяется при диагностированном циррозе печени.

Критика прототипа.

Вопрос, насколько десенсибилизирующая и противовоспалительная терапия глюкокортикоидами способствует задержке прогрессирования болезни и удлиняет жизнь больных циррозом печени, остается дискуссионным (Крутских Е.В., 1976); сведения о их эффективности разноречивы.

По одним источникам, при применении преднизолона описанным способом трехлетняя выживаемость составляет около 60%, без его применения - около 20% (Крутских Е.В., 1976; Логинов А.С. с соавт., 1987).

Вместе с тем, по мнению других исследователей, улучшение клинических и биохимических показателей у больных с активным циррозом печени, леченных преднизолоном, не сопровождается прекращением прогрессирования болезни и не удлиняет продолжительность жизни, даже укорачивая ее при декомпенсированном циррозе (Далгат Д.М., 1974; Логинов А.С., 1987).

Исследователи указывают также на многочисленные осложнения, сопровождающие терапию стероидами: передозировка препарата из-за нарушенной функции печени; нервно-психические нарушения, боли в сердце, повышение АД, остеопороз, отеки, поражения легочной ткани, стероидный диабет, язвенная болезнь (Л. И.Егорова, 1969; Далгат Д.М., 1974; Логинов А.С. с соавт., 1987).

С нашей точки зрения, наиболее существенным недостатком применения прототипа является невозможность прекращения или очевидного замедления разрастания соединительной ткани (т. е. прогредиентной пролиферации стромы), возникшей в зонах некроза гепатоцитов и предупреждения, таким образом, развития цирротического перерождения печени (Абдулаев Н.Х., 1968, 1989).

Недостатком прототипа можно также считать необходимость длительного его применения и невозможность превентивного его применения, т.е. применения в том случае, когда обязательно (к примеру, после перенесенного вирусного гепатита или отравления четыреххлористым углеродом) возникнет соединительно-тканное перорождение органа.

Таким образом, известные средства, предназначенные для предупреждения и прекращения соединительно-тканного перерождения печени, не обладают достаточной эффективностью.

Целью изобретения является прекращение и предупреждение дальнейшего соединительно-тканного перерождения паренхиматозных органов при их диагностированном или достоверно предполагаемом поражении, в частности лечение больных хроническим прогрессирующим склерозирующим гепатитом (циррозом печени), пневмосклерозом, бронхоэктатической болезнью, узловым зобом, мастопатией, амилоидозом почек и другими заболеваниями с аналогичным патоморфогенезом.

Поставленная цель достигается тем, что в отличие от способа прототипа при диагностированном или достоверно предполагаемом соединительно-тканном перерождении паренхиматозного органа (в частности, печени), для прекращения и предупреждения развития данного патологического процесса в организм, например, через кровеносное русло периодически вводится препарат, содержащий перфторуглерод в виде эмульсии; при этом предпочтителен перфторуглерод с возможно длительным периодом полувыведения (месяцы, а не дни и недели) и возможно большей способностью к поглощению кислорода и углекислого газа.

Периодичность и доза введения препарата должны зависеть a) от периода полувыведения его из паренхиматозного органа (это зависит от времени элиминации препарата, от времени элиминации макрофагов и исчезновения вторичных гранулем); b) от общего состояния пациента; c) от активности патологического процесса в органе (что выявляется инструментальными методами исследования, в частности, соноскопией и биопсией).

К примеру, при диагностированном циррозе печени, развившемся после вирусного гепатита, при сохранной ее функции и отсутствии механической желтухи, мы считаем показанным ежегодное введение эмульсии перфторуглеродного соединения, содержащей перфторуглерод с максимально длительным периодом полувыведения (из апробированных и разрушенных к клиническому применению таким может быть перфторпапаметилциклогексилпиперидин, входящий в официальный препарат "Перфторан" в количестве 6,5 об.%, с периодом полувыведения 90 дней; при этом перфтордекалин в состав применяемого (заявляемого) препарата может не вводиться ввиду незначительного (7 дней) периода полувыведения и непригодности его, вследствие этого, для осуществления заявляемых целей изобретения.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.

Известное назначение и свойства перфторуглеродных соединений.

Перфторуглеродные соединения (ПФОС) применяются в эмульгированном виде как синтетические переносчики кислорода и углекислого газа в кровеносном русле и используются при лечении: a) кровопотери [Голубев А.М., 1993, Иваницкий Г.Р., 1983;. Крылов Н.П., 1983; Кузнецова И.Н., 1993); b) травмы мозга (Усенко Л.В., 1993), c) инфаркта миокарда (Голубев А.М., 1993; Крылов Л.Н., 1994); d) нарушения мозгового кровообращения (В.И.Воровьев с соавт., 1993);
e) гнойных ран и промывании полостей организма (В.И.Воробьев с соавт., 1993);
f) вирусного гепатита (Светлов В.Н. с соавт., 1995);
g) других заболеваний, сопровождающихся нарушением органной микроциркуляции и периферического кровообращения, изменением тканевого метаболизма и газообмена (гнойно-септическое состояние, инфекции и др.) (В.И.Воровьев с соавт., 1993);
h) для противоишемической защиты донорских органов (В.И.Воробьев с соавт., 1993).

В клинической практике уже применяется перфторан, один из препаратов группы ПФОС, разрешенный к применению фармкомитетом России как препарат, предназначенный в вышеперечисленных случаях (Крылов Л.Н., 1994, 1995).

Исследования, направленные на изучение химических, физических и биологических свойств ПФОС, проводятся во многих лабораториях мира (Иваницкий Г. Р., 1983; Крылов Н.П., 1983, 1994, 1995).

В 1981 году разработан препарат "Фторэм" на основе эмульсии перфтордекалин/перфтортрибутиламин (ПФТБА). Данная эмульсия обладает повышенной стабильностью и длительным нахождением в органах за счет присутствия ПФТБА.

Рассмотрим известное назначение и свойства перфторуглеродных соединений на примере перфторана (Иваницкий Г.Р., 1983; Крылов Н.П., 1983).

Перфторан (и его аналоги, содержащие ПФ) был создан и применялся как кровозаменитель, то есть вещество, проявляющее свои лечебные функции при введении в кровеносные сосуды и пребывании в кровеносном русле (Иваницкий Г. Р., 1983).

К лечебным функциям перфторана его разработчики и специалисты, изучавшие различные аспекты его клинического и экспериментального применения (В.И. Воробьев с соавт., 1993), относят
a) газотранспортную функцию (переносчик CO₂ и O₂) из кровеносного русла в ткани и из тканей в кровеносное русло;
b) реологическую функцию (т.е. средство, уменьшающее вязкость и ее агрегацию крови и улучшающее прохождение частиц крови сквозь капиллярную сеть);
c) увеличение резистентности эритроцитов к осмотическому и кислотному гемолизу;
d) уменьшение коронарно-сосудистого сопротивления;
e) улучшение сердечного выброса;
f) воздействие на кровоток в магистральных сосудах, снижение в них сопротивления;
g) увеличение заряда на поверхности клеточных мембран.

Разработчики указывают, что ... "Перфторуглеродные соединения оказывают на организм два воздействия. С одной стороны, они улучшают газодинамику в системах обмена кислорода на углекислый газ (Иваницкий Г.Р., 1983); ... "с другой - частично, растворяясь в мембранах клеток и органоидах, временно изменяют их вязкоупругие свойства, обеспечивая тем самым консервацию органов, защищая их от деструктивных ишемических повреждений". Перфторуглероды хорошо растворяют газы от 50 об.% O₂ и до 200% CO₂, но в динамике плохо их отдают, поэтому основной проблемой инженерии газотранспортных эмульсий на перфторуглеродах является не только задача как закачать кислород в кровяное русло, а как заставить перфторуглеродную эмульсию эффективно его отдавать, обеспечивая его распространение по всем системам организма без искажения фазового портрета их взаимодействия (Иваницкий Г.Р., 1993).

Вместе с тем известно, что хотя при введении перфторана суммарная кислородная емкость крови и напряжение кислорода в артериальной крови увеличиваются незначительно, в тканях напряжение кислорода увеличивается существенно (на 30-40%), поскольку физически растворенный в перфторане кислород (в отличие от химически связанного с гемоглобином крови) практически полностью поглощается тканями (Крылов Н.П., 1983). Субмикронный размер частиц перфторана позволяет ему (в отличие от эритроцитов крови) легко проникать в зоны с нарушенной микроциркуляцией, эффективно осуществлять транспортировку кислорода и удаление активно адсорбируемого в этих зонах углекислого газа (Ронкина Т.И., 1993.) Эти же авторы сообщают о способности макрофагов фагоцитировать перфторсодержащие соединения с образованием скоплений.

Реакция тканей и органов на введение эмульсий ПФОС, в первую очередь реакции печени, требует отдельного рассмотрения.

По данным А.М.Голубева (1993)..."одноразовое внутривенное введение эмульсий ПФОС при моделировании острой токсичности ведет к появлению в цитоплазме гепатоцитов и клеток Купфера мелких вакуолей. Их появление регистрируется через сутки после введения эмульсии. Через 5-7 дней вакуоли исчезают. Не отмечено образования макрофагальных (первичных) гранулем. Функциональное значение клеток иммунокомпетентной системы в условиях введения эмульсий ПФОС в организм животных заключается в следующем. Макрофаги фагоцитируют частицы ПФОС, формируют первичные гранулемы, принимают участие в формировании вторичных гранулем. Микрофаги (лейкоциты) осуществляют фагоцитоз частиц ПФОС преимущественно в первые сутки эксперимента, участвуют в формировании клеточных реакций на повреждение. Лимфоциты образуют розетки вокруг макрофагов, фагоцитировавших ПФОС, принимают участие в образовании вторичных гранулем, отвечают стимуляцией "B" зависимых зон фолликулов селезенки и лимфатических узлов; отмечается выход лимфоцитов из коркового слоя вилочковой железы. На определенных стадиях существования макрофагов, фагоцитировавших ПФОС, наблюдаются некоторые различия активности фермента. В период фагоцитоза происходит некоторое повышение активности окислительно-восстановительных ферментов, обеспечивающих энергетические процессы, что свидетельствует об активации макрофагов и в результате фагоцитоза частиц ПФОС. В эти сроки не отмечается повышения активности гидролитических ферментов, свидетельствующее о химической инертности перфторированных углеродов. В последующем в макрофагах возрастает количество гликогена, РНК; частицы ПФОС, локализующиеся в цитоплазме макрофагов, обладают суданфилией. Трансформированные макрофаги (эпителиоидные клетки) вторичных гранулем характеризуются значительной активностью как окислительно-восстановительных, так и гидролитических ферментов (кислой фосфатазы, эстераз). По всей видимости, это обусловлено формированием местных иммунных реакций в связи с элиминацией компонентов погибающих макрофагов первичных гранулем.

Морфогенез гранулем, образованных макрофагами, фагоцитировавших ПФОС , включает несколько фаз. Первичные гранулемы, состоящие только из макрофагов, фагоцитировавших ПФОС, формируются в печени, селезенке, лимфатических узлах, костном мозге, надпочечниках, легких, вилочковой железе в течение первой недели после массивного внутривенного введения ПФОС. В последующие 2-4 месяца первичные гранулемы замещаются лимфоцитами и трансформированными макрофагами, которые не содержат в цитоплазме вакуолей, различаемых с помощью светового микроскопа. Следует отметить, что этот процесс активнее выражен при использовании эмульсий, приготовленных на основе ПФМЦП, ПФД/ПФМЦП, и вялый вторичный грануломотоз регистрируется при применении ПФТБА. Постепенно эпителиоидные клетки полностью замещают первичную гранулему, с образованием вторичных гранулем, которые подвергаются регрессу. Важным является тот факт, что на месте вторичных гранулем не образуется соединительной ткани, практически в гранулемах отсутствуют фибробласты, не наблюдается образования коллагена. Аргирофильные волокна, формирующиеся вокруг гранулем и между клетками гранулем, подвергаются фрагментации. Регрессирующие вторичные гранулемы постепенно замещаются элементами паренхимы (гепатоцитами в печени, лимфоцитами в селезенке, лимфатических узлах, вилочковой железе). Эта уникальная биологическая реакция, вероятно, отражает уникальную химическую инертность перфторорганических соединений. Следует отметить, что в одном и том же органе можно видеть гарнулемы, находящиеся на различных этапах развития"... . Отметим, что А. М.Голубев (1993) описывает возникновение вторичных гранулем со сниженным образованием участков со сниженным коллагенозом практически во всех перенхиматозных органах (легких, печени, вилочковой железе, надпочечниках, лимфоузлах, селезенке и проч.).

О способности макрофагов фагоцитировать перфторсодержащие соединения с образованием скоплений в паренхиматозных органах сообщает также И.Т. Ронкина (1993).

В силу недавней разработки ПФОС спектр их применения все еще не исследован полностью и расширяется по мере апробации.

В частности, ранее никем не исследовалось применение ПФОС как средства коррекции патологических процессов при соединительно-тканным перерождении паренхиматозных органов и, в частности, циррозе печени.

Перфторуглеродные соединения ранее, как было указано выше и как это следует из перечня научно-технической литературы, применялись исключительно как динамические переносчики кислорода, то есть как а) движущиеся с током крови; б) находящиеся вне клеток.

Прежде чем указать на новизну применения ПФОС для указанной выше цели, следует упомянуть о принципиальном различии известного способа применения ПФОС и нашего (это не относится к отличительным от прототипа признакам, но это необходимо для аргументации того факта, что известное ранее вещество применяется по новому назначению).

Исследователи (экспериментаторы и клиницисты) в качестве побочного эффекта применения эмульсии перфторуглерода обнаружили, как указывалось выше, что эмульгированный перфторуглерод (частички размером меньше микрона) обладает способностью длительное время кумулироваться в паренхиматозных органах, будучи инкорпорированным в фагоцитах (макрофагах) (Голубев А.М., 1993; Ронкина И.Т., 1993).

Известно также, что макрофаги при этом образуют скопления ("вторичные гранулемы" - [Голубев А.М., 1993]), вокруг которых даже через 2-4 месяца не образуется соединительная ткань (Голубев А.М., 1993).

Известно также, что при некрозе клеток любого органа вокруг зоны некроза через определенное время развивается участок перифокального воспаления со скоплением макрофагов, образующих гранулемы, организующиеся в последующем (в срок около 1-2 месяцев) в соединительную ткань. Это, в первую очередь, относится к постнекротическому циррозу печени (Абдулаев Н.Х., 1968; Логинов А. С. с соавт., 1987).

Вместе с тем никем ранее не заявлялось и не использовалось применение перфторуглеродных соединений для профилактики патологического разрастания соединительной ткани, с целенаправленным использованием способности частичек ПФ быть фагоцитированными макрофагами, с образованием первичных и вторичных макрофагальных гранулем (см. Описание прототипа). Это свойство ПФ считалось отрицательным, и разработчики стремились от него избавиться.

Так, Седова Л.А. с соавт. (1993) не рекомендовала многократное применение ПФ-препаратов ввиде их накопления в РЭС и в тканях органов.

Г. Р. Иваницкий с соавт. (1993) как положительный исследовательский результат указывает на создание ПФ-препаратов второго поколения с более коротким периодом полувыведения (на основе перфтороктилбромида), чем предыдущие препараты (перфторан, на основе перфтордекалина); при этом наличие в препарате "перфторан" помимо перфтордекалина (период полувыведения 7 дней) перфторпапаметилциклогексилпиперидина (период полувыведения 90 дней) им считается необходимым злом, с которым надо мериться ввиду улучшения этим препаратом кислородопереносящей функции эмульсии при циркуляции ее в крови, а также уменьшения токсичности эмульсии.

Более того, исследователи пытаются бороться с поглощением частиц ПФ макрофагами, для увеличения времени циркуляции эмульсии ПФ в крови. Так, Т. К. Путятина (1993) рекомендует для предупреждения поглощения РЭС частиц ПФ применять предварительное введение жировой эмульсии, такой как липофундин.

В известной и доступной нам литературе, как было указано выше, не оговаривалось о целенаправленном использовании ПФОС для образования вторичных гранулем, состоящих из фагоцитировавших частички ПФОС макрофагов, в паренхиматозных орагнах (в частности, в печени), для предупреждения их соединительно-тканного перерождения.

Вместе с тем, положительный эффект от применения известного вещества (эмульсии ПФОС) по новому назначению обусловлен именно этим эффектом. Для его реализации необходимы следующие факторы.

1. Наличие в организме зоны хронического воспаления (частности, в паренхиматозных органах).

2. Наличие в организме фагоцитов (например, макрофагов), обладающих способностью фагоцитировать эмульгированные частички ПФОС.

3. Способность организма образовывать (в том числе в зоне хронического воспаления) первичные, а главное, вторичные гранулемы, состоящие из фагоцитов, фагоцитировавших частички ПФОС и ввиду этого не способных элиминироваться.

Способность частичек ПФОС возможно длительный срок задерживаться в фагоцитах, с образованием в зоне гранулем участков с самостоятельным газообменом на клеточном и межклеточном уровне (обмен O₂ ⇐⇒ CO₂), своего рода зон микроклимата вокруг гранулемы, что приводит, как было указано выше, к прекращению и торможению патологического роста соединительной ткани в паренхиме органов.

Таким образом, заявляемое изобретение отличается от известного тем, что впервые в практике известное ранее вещество применяется по новому назначению.

Отличительные признаки заявляемого изобретения от прототипа.

1. Заявляемое изобретение эффективнее, чем прототип, предупреждает дальнейшее соединительно-тканное перерождение паренхиматозных органов при их диагностированном поражении, в частности, при лечении хронического прогрессирующего склерозирующего гепатита (цирроза печени).

2. Заявляемое изобретение менее вредно, чем прототип.

3. Принцип действия заявляемого изобретения абсолютно отличается от принципа действия прототипа.

4. Заявляемое изобретение проще в применении, чем прототип, может применяться в меньшей периодичностью и, в конечном итоге, экономически выгоднее.

Примеры конкретного выполнения
Пример 1.

Проверка эффективности перфторуглеродных соединений для прекращения и предупреждения дальнейшего соединительно-тканного перерождения (циррозирования) печени нами выполнена в эксперименте in vivo.

Методика экспериментов.

В экспериментах использовано 30 белых нелинейных крыс (самки). Животные были разделены на 3 группы.

Во время предварительного этапа экспериментов в группах 1-2 создавалась модель цирроза печени путем ежедневного подкожного введения CCl₄ из расчета 0,1 мл на 100 г веса (Лопухин Ю.М., 1971). Группа 3 (интактные животные, которым не делали ничего) использовалась для сопоставительного контроля с группами 1 - 2.

Через 2, 3 и 4 месяца с момента начала моделирования цирроза у четырех разных животных из группы 1 - 2 посредством лапаротомии забирался биоптат печени на морфологическое исследование (выполнялось по Ван-Гизону для выявления соединительнойц ткани (Волкова О.В., 1971)). Одновременно, во время лапаротомии, выполнялось макроскопическое исследование органов брюшной полости.

В те же сроки выполнялось описание поведения, внешнего вида и общего состояния животных, эти данные сопоставлялись с данными интактных здоровых животных (группа 3).

После гистологического подтверждения постнекротического соединительно-тканного перерождения ткани печени (постнекротический цирроз печени) у животных 1 - 2 группы переходили к основному этапу эксперимента.

Основной этап эксперимента продолжался 4 месяца.

Животным основной (первой) группы в хвостовую вену вводили перфторан из расчета 8 мл на 1 кг веса (нижняя нормативная клиническая доза как кровозаменителя и дезагреганта (Крылов Н.П., 1994)). Введение перфторана в этой дозе повторяли три раза с интервалом 30 дней.

Состояние животных всех трех групп и результаты лабораторных исследований регистрировались каждые 4 недели и взаимосопоставлялись. В эти же сроки посредством лапаротомии забирались биоптаты печения (у двух разных животных каждые 4 недели) с последующим морфологическим исследованием. При лапаротомии регистрировалось состояние органов брюшной полости.

Через 30 дней после последнего введения перфторана и через 120 дней после начала основного этапа эксперимента животных выводили из опыта введением избыточной дозы каллипсола в/м, выполняли макро- и микроскопическое исследование внутренних органов. Одновременно выводили из опыта животных контрольной группы.

На основании данных макро- и микроскопического исследования внутренних органов, а также данных общего состояния животных в динамике выполнялся сопоставительный анализ результатов исследования.

Результаты исследования.

1. Результаты наблюдений во время моделирования цирроза печени.

Через 1 неделю моделирования существенного изменения состояния животных не выявлено, за исключением некоторого уменьшения двигательной активности и потребления пищи.

Через 2 недели признаки интоксикации несколько увеличились, потребление пищи снизилось примерно на 10%, оборонительный рефлекс снизился у 5 животных, у них же стала дегче выдергиваться шерсть.

Через 3 недели данные внешнего осмотра без изменений. При лапаротомии макроскопически органы брюшной полости без патологии, печень и селезенка не изменена. Печень взята на гистологическое исследование.

При гистологическом исследовании печени наблюдалось ожирение гепатоцитов, мутное набухание их протоплазмы, отмечались соединительно-тканные прослойки как внутри долек, так и перипортально.

Через месяц с начала эксперимента отмечено уменьшение двигательной активности и оборонительного рефлекса у большей части животных. Аппетит животных снизился, средний вес уменьшился на 10% от исходного.

При гистологическом исследовании печени отмечались атрофические изменения, разрастание соединительной ткани становилось более отчетливым.

Через 6 недель состояние животных прежнее, у 20% из них выраженная мацерация вокруг уретры. При лапаротомии макроскопически органы брюшной полости без патологии, селезенка не изменена. Печень светлее нормы, отмечено появление зернистости (бугорки на печени розовато-желтого цвета D 0,2 mm), взята на гистологическое исследование.

При гистологическом исследовании печени значительно выражены явления некроза и некробиоза отдельных печеночных клеток. Вокруг вен большое количество крупных клеток с мутной протоплазмой и пикнотическим ядром. Сохранено перипортальное разрастание соединительной ткани.

Через 9 недель состояние животных прежнее, у половины из них выраженная мацерация вокруг уретры. При лапаратомии макроскопически органы брюшной полости без патологии, селезенка не изменена. Печень светлее нормы, стала более рыхлой и отечной, легко надрывается. Отмечено появление зернистости (бугорки на печени розовато-желтого цаета D 02, mm), взята на гистологическое исследование.

Через 12 недель состояние животных прежнее. При лапаротомии макроскопически органы брюшной полости без патологии, селезенка не изменена, асцита нет. Печень светлее нормы, стала более рыхлой и отечной, легко надрывается. Отмечено появление зернистости (бугорки на печени розовато-желтого цвета D 0,2 mm), взята на гистологическое исследование.

При гистологическом исследовании печени установлено, что дистрофические изменения в печеночных клетках продолжают оставаться, преобладают явления разрастания соединительной ткани, выявляются в большом количестве крупные двуядерные клетки.

Через 3 месяца после начала моделирования цирроза печени крысы первой и второй группы имеют следующие отличия от интактных (группа 3).

1. Снижен аппетит (примерно на 20%).

2. Постоянно собираются в кучку, несмотря на жару (в лаборатории 25^oC).

3. Не дерутся и не играют друг с другом.

4. Шерсть у половины взъерошена, неопрятная. У них же выраженная мацерация кожи вокруг уретры; они же наиболее вялые, оборонительный рефлекс снижен.

5. Средний вес крыс снизился на 20% от первоначального.

6. У большинства крыс при однообразной пище с начала эксперимента цвет кала стал светлее и колеблется от светло-коричневого до темно-желтого (в норме от темно-коричневого до черного).

При лапаротомии макроскопически органы брюшной полости без патологии, селезенка не изменена, асцита нет. Печень отечна, пастозна, легко надрывается, имеет белесоватые бугорки (D=0,2-0,3 mm), а также белесоватые пятна 1-3 мм, больше по краям.

При гистологическом исследовании печени в морфологической картине преобладают явления жировой и белковой дистрофии с постепенной перестройкой архитектоники печени в связи с разрастанием соединительной ткани.

Через 4 месяца состояние животных несколько ухудшилось в сравнении с данными третьего месяца; стали более вялые, оборонительный рефлекс слабовыражен, цвет кала от светло-желтого до темно-желтого.

При лапаротомии макроскопически органы брюшной полости без патологии, селезенка не изменена, асцита нет. Печень светлее нормы, стала более плотной, меньшего размера, легко надрывается. Зернистость стала более выраженной (бугорки на печени желтовато-белесоватые D=0,3-0,4 mm), белесоватые пятна стали больше и в большем количестве.

При гистологическом исследовании печени наряду с вышеописанными изменениями наблюдались утолщения центральных вен, сужение их просвета, а вокруг вен выявлялись очаги запустения.

2. Результаты основного этапа экспериментов.

Через 4 недели после введения перфторана стали очевидны первые различия между животными групп 1 и 2.

Состояние всех животтных группы 1 стало лучше, чем всех животных группы 2, - поведение их более активное, оборонительный рефлекс более выражен, поедают пищу на 20% больше, чем в группе 2 и чем месяц назад; шерсть стала гладкой и блестящей; уже не собираются в кучку, стали играться и дерутся друг с другом; цвет кала черный. Визуально не отличимы от животных группы 3. При макроскопическом осмотре органов брюшной полости печень несколько меньших размеров, чем в норме, цвет обычный; на краях печени сохранена зернистость D= 0,1-0,2 мм; белесоватых пятен нет; со стороны остальных органов патологии не выявлено.

При гистологическом исследовании печени соединительно-тканные прослойки, как внутри долек, так и перипортально, были представлены в виде узких тяжей; грубые нарушения архитектоники печени не выявлялись.

Состояние животных группы 2 стало лучше, чем месяц назад; однако хуже, чем в группах 1 и 3, - по-прежнему снижен оборонительный рефлекс и аппетит, шерсть неопрятная и взъерошенная; вялые.

При гистологическом исследовании печени явления разрастания соединительной ткани стали более отчетливыми, как перипортально, так в зоне "ложных долек"; печеночные клетки в состоянии жировой дистрофии; в целом имелись все признаки развивающегося цирроза печени.

Через 2 месяца после начала второго этапа различие в состоянии животных первой и второй группы стало очевидным.

Общее состояние животных второй группы практически не изменилось, за исключением того, что шерсть стала более гладкой; оборонительный рефлекс и аппетит по-прежнему снижены. При осмотре органов брюшной полости печень уменьшена в размерах, плотная, "жирная" на ощупь, поверхность мелко-зернистая, цвет кирпично-красный. При гистологическом исследовании в этой группе морфологически выявлены признаки формирующегося цирроза печени - сохранена нарушенность архитектоники печеночной ткани, наряду с участками регенерации печеночных клеток имеются признаки деформации ими портальных вен; сохранено грубое и деформирующее разрастание соединительной ткани перипортально в зонах некроза.

Вместе с тем состояние животных первой группы было по-прежнему не отличимо от состояния интактных животных. При осмотре органов брюшной полости - печень несколько уменьшена в размерах, цвет обычный, имеется мелкая зернистость, несколько уплотнена, но меньше, чем в группе 2. Остальные органы брюшной полости без патологии. При гистологическом исследовании печени участки жировой дистрофии печени были менее распространены и выражены, чем за месяц до этого, отмечено, что регенераторная перестройка печени развивалась с сохранением и восстановлением первоначальной архитектоники; соединительно-тканные тяжи стали более нежными и не деформировали портальные тракты.

Через 3 месяца после второго этапа состояние животных первой и второй групп оставалось без существенных изменений с сохранением тех же различий, что и за месяц до этого.

При осмотре органов брюшной полости животных второй группы существенной динамики не выявлено; печень "маслянистая" на ощупь, с мелкозернистой поверхностью, участки белесоватых пятен стали меньше в размерах, край печени более заострен, она стала несколько более плотная. Остальные органы брюшной полости без патологии. При гистологическом исследовании печени также существенных изменений в морфологическом статусе не отмечено, за исключением некоторого увеличения участков с жировой дистрофией. В целом морфологическая картина расценена как сформировавшийся и прогрессирующий постнекротический цирроз печени.

При осмотре органов брюшной полости животных первой группы со стороны печени отличий от животных группы 3 (выполнена контрольная лапаротомия трем животным группам 3) не выявлено, за исключением наличия на поверхности печени животных первой группы мелкой зернистости (d=0,05-0,1 mm). Остальные органы брюшной полости без патологии. При гистологическом исследовании печени морфологическая картина расценена как остаточные явления постнекротического фиброза печени, в целом, в сравнении с предыдущими данными, отмечена положительная динамика - участки жировой дистрофии единичные, архитектоника печени близка к нормальной.

Через 4 месяца после начала второго этапа эксперимента все животные первой и второй группы и 2 крысы из третьей группы выведены из опыта введением избыточной дозы каллипсола.

В течение четвертого месяца после второго этапа состояние животных второй группы стабилизировалось полностью, у части животных отмечено увеличение двигательной активности, аппетита, оживление оборонительного рефлекса.

При осмотре органов грудной полости патологии во всех трех группах не выявлено. При осмотре органов брюшной полости животных первой группы печень уплотнена и имеет более кирпичный оттенок, а край более заострен, чем в интактной группе, мелкая зернистость на поверхности печени и "маслянистость" печени сохранилась, хотя эти проявления несколько уменьшились в сравнении с трехмесячным периодом. В остальном органы брюшной полости без патологии. При гистологическом исследовании печени морфологическая картина по-прежнему соответствовала развивающемуся постнекротическому циррозу печени.

При осмотре органов брюшной полости животных второй группы в сравнении с интактной группой отмечено лишь наличие мелкой зернистости в отдельных местах печеночных долей и недостоверное уменьшение долей; в остальном органы брюшной полости без видимой патологии. При гистологическом исследовании печени зарегистрированы отдельно расположенные участки жировой дистрофии печени, перемежающиеся участками печени с явным признаками регенерации гепатоцитов с полным восстановлением нормальной печеночной архитектоники; в целом имелись очевидные различия с контрольной группой при сравнении коллагеновых структур паренхимы. Если в контрольной группе соединительно-тканные разрастания в паренхиме печени сдавливали портальные венулы и вены, образуя классические "ложные дольки", что в целом характеризовалось как постнекротический цирроз печени, то в опытной группе соединительная ткань была представлена в виде нежных тяжей вокруг гепатоцитов и вдоль портальных трактов и участков жировой дистрофии; архитектоника печени свидетельствовала о адекватной ее регенерации и возможности нормального дальнейшего функционирования.

Характеристика медико-экономической эффективности.

Результаты, полученные в ходе экспериментов, позволяют рекомендовать применение заявляемого изобретения для предупреждения и/или прекращения соединительно-тканного перерождения паренхиматозных органов, то есть заболеваний, считающихся патогенетически неизлечимыми; в частности - лечение больных циррозом и фиброзом печени.

Показанием к применению способа является диагностированное или достоверно предполагаемое развитие соединительно-тканного перерождения перенхиматозных органов (цирроз печени, пневмосклероз, возможно - узловой зоб, мастопатия, амилоидоз почек) и другие заболевания с аналогичным патоморфогенезом.

Научно-техническая литература
1. Абдулаев Н.Х., Каримов Х.Я. Печень при интоксикациях гепатотропными ядами. - Ташкент: Медицина, 1989, 96 с.

2. Вопросы экспериментальной и клинической хирургии печени, желчных путей и поджелудочной железы /Под ред. А.В. Гуляева. - М.: Медицина, 1974, 126 с.

3. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистохимии и гистологической техники. - М.: Медицина, 1971, 244 с.

4. Гицев В. Ю. , Граудина Ж.П. Культура тканей печени в гепатологии. - Новосибирск: Наука, 1986, 88 с.

5. Голубев А.М. Итоги и перспективы изучения влияния фторуглеродных кровезаменителей на биологические системы //Перфторуглеродные активные среды для медицины и биологии (новые аспекты исследований). Пущино: Российская академия наук, 1993, с. 88-93.

6. Голубев А.М., Маджидов М.Г. Фторуглеродная противоишемическая защита миокарда //Перфторуглеродные активные среды для медицины и биологии (новые аспекты исследований). Пущино: Российская академия наук, 1993, с. 180-186.

7. Далгат Д. М. Хирургия портальной гипертензии. - Махачкала: 1974, с. 244.

8. Егорова Л.И. Лечение глюкокортикоидами и АКТГ. - М., 1965.

9. Иваницкий Г.Р., Белоярцев Ф.Ф. О развитии фундаментальных и прикладных исследований в СССР по проблеме "Перфторуглероды в биологии и медицине" //Медико-биологические аспекты применения эмульсий перфторуглеродов. - Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР, 1983, с. 7-38.

10. Крутских Е.В. Цирроз печени. - Л.: Медицина, 1976, с. 176.

11. Крылов Н.П., Белоярцев Ф.Ф., Маевский Е.И., Мороз В.В. Возможности и перспективы применения фторуглеродных эмульсий как заменителей крови на этапах медицинской эвакуации //Медико-биологические аспекты применения эмульсий перфторуглеродов /Под ред. Ф. Ф. Белоярцева. - Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР, 1983, с. 58-67.

12. Крылов Л. Н., Мороз В.В. Опыт клинического применения перфторана - кровозаменителя на основе перфторуглеродов //Физико-химические и клинические исследования перфторорганических соединений. - Пущино: Российская академия наук, 1994, с. 33-50.

13. Кузнецова И.Н., Гербут К.А. Применение эмульсии перфторуглеродов для коррекции показателей физико-химического гомеостаза при инфузионной терапии геморрагического шока. //Перфторуглеродные активные среды для медицины и биологии (новые аспекты исследований). - Пущино: Российская академия наук, 1993, с. 101-108.

14. Логинов А.С., Блок Ю.Е. Хронические гепатиты и циррозы печени. - М.: Медицина, 1987, с. 270.

15. Морфологическая диагностика заболеваний печени /Под ред. В.В. Серова (СССР), К. Лапиша (ВНР). - М.: Медицина, 1989, с. 336.

16. Мусабаев И. К. Инфекционный гепатит (болезнь Боткина). - Ташкент, 1961.

17. Нормальная и патологическая цитология печени. - Л.: Наука, 1969, с. 197.

18. Павловский М.П. Портокавальные органоанастомозы в хирургии циррозов печени. Автореферат дисс. на соиск. уч. степ. к.м.н. - Львов, 1959.

19. Абдулаев Н.Х. Патохимия и патогенетическая терапия хронических гепатитов и циррозов печени. - Ташкент: Медицина, 1968, с. 240.

20. Проблемы экспериментальной и клинической хирургии печени и желчных путей /Под ред. Г.Е. Островитянова. - М.: Медгид, 1968, 240 с.

21. Путятина Т. К., Апросин Ю.Д., Афонин Н.И. Влияние липидно-жирового компонента на фармакокинетику перфторорганических соединений. //Перфторуглеродные аткивные среды для медицины и биологии (новые аспекты исследований). - Пущино: Российская академия наук, 1993, с. 145-150.

22. Ронкина Т.И., Глинчук Я.И., Сидоренко В.Г. и др. Реакция тканей глаза на интравитриальное введение перфторорганических соединений. //Перфторуглеродные активные среды для медицины и биологии (новые аспекты исследований). - Пущино: Российская академия наук, 1993, с. 70-82.

23. Светлов В.Н., Палагин В.А. Применение перфторана при осложненных формах вирусного гепатита (предварительное сообщение) //Физиологическая активность фторсодержащих соединений (эксперимент и клиника). Сборник научных трудов. - Пущино, 1995.

24. Седова Л.А., Пятовская Н.Н., Рахманкулова Л.Д., Николаенко Л.Н., Доронина Н.Н. Морфологическая и функциональная характеристика органов при многократном введении перфукола в эксперименте //Перфторуглеродные активные среды для медицины и биологии (новые аспекты исследований). - Пущино: Российская академия наук, 1993, с. 108-116.

25. Тареев Е.М. Болезнь Боткина. - М., 1956.

26. Усенко Л.В., Клигуненко Е.Н., Доронин А.Г. Экспериментальное обоснование использования перфторана в лечении тяжелой травмы головного мозга //Перфторуглеродные активные среды для медицины и биологии (новые аспекты исследований). - Пущино: Российская академия наук, 1993, с. 47-63.

27. Цирроз печени (клиника, диагностика, лечение). Сборник научных трудов. - Л., 1994, 186 с.

28. Экспериментальная гепатология. - Рига: Зинатия, 1985, с. 194.

29. Лопухин Ю.М. Экспериментальная хирургия. Медицина, 1871, 344 с.

30. Шубладзе А.К. Экспериментальное изучение ипидемиологического гепатита. - ЖМЭИ, 1955, т. 7, N 15.

Формула изобретения

1. Применение перфторуглеродных соединений в качестве средства для профилактики и лечения патологического разрастания соединительной ткани в паренхиматозных органах.

2. Применение перфторуглеродных соединений по п.1, в качестве средства для лечения соединительно-тканного перерождения печени.