Ингибиторы синтазы оксида азота на основе меркапто- и селенопроизводных

 

Изобретение относится к медицине и касается фармакологически приемлемой композиции для ингибирования синтазы окиси азота у млекопитающего, которая включает меркапто- или селенопроизводное и фармацевтически приемлемый носитель, способа ингибирования синтазы окиси азота, избирательно ингибирующего индуцибельную изоформу синтазы окиси азота, и лечения различных состояний, где целесообразно ингибирование биосинтеза окиси азота путем введения млекопитающему меркапто- или селенопроизводного в чистой форме или в фармацевтически приемлемом носителе. Изобретение повышает эффективность лечения. 2 с. и 43 з.п.ф-лы, 10 ил. 6 табл.

Родственные заявки Данная заявка является частичным продолжением заявки на изобретение 08/410312, имеющей название "МЕРКАПТОПРОИЗВОДНЫЕ КАК ИНГИБИТОРЫ СИНТАЗЫ ОКСИДА АЗОТА", поданной в США 24 марта 1995, которая полностью включена в данную заявку в качестве ссылки.

Предпосылки создания изобретения Данное изобретение касается использования меркапто- и селенопроизводных в качестве ингибиторов синтазы оксида азота (СОА).

Свободный радикал окиси азота (NO) синтезируется из гуанидиновой группы L-аргинина семейством ферментов, называемых синтазой окиси азота (СОА). Изоформа мозга (мСОА) конститутивно присутствует в нервной ткани, и NO выделяется как нейромедиатор при активации различных рецепторов (например, NMDA-типа). NO в центральной нервной системе играет важную роль в формировании памяти.

Непрерывное образование NO конститутивной эндотелиальной изоформой СОА (экСОА). поддерживает сосудистую систему в длительном состоянии активной вазодилятации и снижает адгезию тромбоцитов и полиморфноядерных гранулоцитов (ПМЯГ) к поверхности эндотелия. Биологическая активность NO, образующейся при участии экСОА, первоначально была описана как происходящий из эндотелия фактор релаксации (ЭФР). Освобождение ЭФР in vivo и in vitro стимулируется механическим стрессом и различными гормонами и аутокоидами, такими как ацетилхолин, брадикинин, субстанция Р, вазопрессин, норадреналин, гистамин или фактор активации тромбоцитов.

Индуцибельная форма СОА (иСОА) экспрессируется в ответ на иммунологические стимулы во многих типах клеток, включая макрофаги, клетки гладкой мускулатуры сосудов и эпителиальные клетки, и продуцирует большие количества NO (наномоли NO по сравнению с пикомолями NO, образуемыми экСОА или мСОА). NO в высоких локальных концентрациях может действовать как цитостатическая и цитотоксическая молекула, действующая против грибковых, бактериальных, гельминтных и протозойных антигенов, а также опухолевых клеток. Ряд провоспалительных цитокинов и эндотоксинов (бактериальные липополисахариды, ЛПС) также вызывает экспрессию иСОА во многих других клетках, включая фибробласты, глиальные клетки, миоциты сердца, а также сосудистые и несосудистые гладкомышечные клетки.

В настоящее время существуют убедительные доказательства, что иСОА играет важную роль в патогенезе многих заболеваний.

Циркуляторный шок различной этиологии сочетается с глубокими изменениями гомеостаза NO в организме. На моделях эндотоксического шока на животных эндотоксин вызывает острое образование NO конститутивной изоформой СОА на ранней стадии, за которой следует индукция иСОА. Кроме того, сейчас полагают, что избыточная продукция NO может быть вовлечена в ряд состояний, включая состояния, которые влекут за собой системную гипотензию, такие как септический (токсический) шок и терапия некоторыми цитокинами. Следовательно, желательно игибировать синтазу окиси азота.

Более того, в связи с потенциально опасными последствиями избыточного ингибирования конститутивных ферментов СОА предпочтительно селективно ингибировать индуцибельную форму. Избыточное ингибирование конститутивной изоформы может приводить к гипертензии, тромбозу, токсическому действию на центральную нервную систему и повреждению тканей.

Для терапевтического использования были предложены различные ингибиторы синтазы окиси азота. Например, были предложены NG-метил-L-аргинин (L-NМА) и метиловый эфир NG-нитро-L-аргинина (L-НАМЭ). Тем не менее они обычно не избирательны, то есть они ингибируют как конститутивную, так и индуцибельную изоформы СОА в сходной степени. Другие ингибиторы СОА, предложенные для терапевтического использования, включают производные изотиомочевины и аминогуанидин. В тестах in vitro и in vivo было показано, что изотиомочевина ингибирует активность СОА и что немногие специфические соединения класса изотиомочевины являются относительно специфическими ингибиторами активности иСОА (см., например, Garry J. Southan et al., "Isothioureas: Potent inhibitors of Nitric Oxide Synthases with Variable Isoform Selectivity (Производные изотиомочевины: Потенциальные ингибиторы синтаз окиси азота с различной избирательностью в отношении изоформ)", British Journal of Pharmacology, Vol. 114, pp. 510-516, 1995; Csaba Szabo et al., "Beneficial Effects and Improved Survival in Rodent Models of Septic Shock with S-methylisothiourea Sulfate, a Potent and Selective Inhibitor of Inducible Nitric Oxide Synthase (Благоприятные эффекты и повышение выживаемости в моделях септического шока на грызунах при действии сульфата S-метилизотиомочевины, сильного и избирательного ингибитора индуцибельной синтазы окиси азота)", Proc Nail Acad Sci USA, Vol. 91, pp. 12472-12476 (Декабрь 1994); и заявка РКС WO 94/12165). На различных моделях in vitro и in vivo было обнаружено также, что аминогуанидин селективно ингибирует индуцибельную изоформу синтетазы окиси азота (см. , например, Chin-Chen Wu et al., "Aminoguanidine Attenuates the Delayed Circulatory Failure and improves Survival in Rodent Models of Endotoxic Shock (Аминогуанидин ослабляет отсроченную циркуляторную недостаточность и увеличивает выживаемость в моделях септического шока на грызунах", British Journal of Pharmacology, Vol. 113, pp. 001-007, Paper 78594 (1995); и Европейская заявка 0547558 А1).

Хотя ингибиторы синтазы окиси азота, обсуждавшиеся выше, могут оказаться имеющими терапевтическое значение, важно идентифицировать дополнительные соединения, которые ингибируют синтазу окиси азота. Желательно также идентифицировать дополнительные соединения, которые избирательно ингибируют индуцибельную изоформу фермента СОА. Поскольку избыточная продукция окиси азота играет определенную роль при многих различных нарушениях и состояниях, таких, например, как системная гипотензия, септический шок и терапия цитокинами, исключительно важно идентифицировать дополнительные соединения, способные ингибировать или даже избирательно ингибировать синтазу окиси азота. Это особенно важно исходя из того, что такие дополнительные соединения могут оказаться обладающими меньшими побочными эффектами и большей избирательностью в ингибировании индуцибельных ферментов синтазы окиси азота.

Сущность изобретения Настоящее изобретение направлено на создание фармакологически приемлемой композиции для ингибирования синтазы окиси азота у млекопитающих. Композиция включает меркапто- или селенопроизводное и фармацевтически приемлемый носитель, причем меркапто- или селенопроизводное присутствует в композиции в эффективном количестве для ингибирования синтазы окиси азота у млекопитающего.

Изобретение также направлено на создание способа ингибирования синтазы окиси азота у млекопитающего, который включает этап введения млекопитающему меркапто- или селенопроизводного в чистой форме или в фармакологически приемлемом носителе.

Меркапто- и селенопроизводное из композиции и способ определяются формулой, выбранной из группы, состоящей из: и или их солей, где R₁ является Н, алкилом, алкенилом, фенилом, алкиленом, алкениленом или фенилалкениленом или их замещенным производным.

Если R₁ является алкиленом или алкениленом, то R₁ по выбору может быть присоединен к амидиновым N, к Z или к Х в вышеприведенной формуле, содержащей R₁, с образованием 5-, 6- или 7-членного гетероциклического кольца, при условии, что, когда R₁ присоединяется к Z, то Z является алкиленом или алкениленом или их замещенным производным, а если R₁ присоединяется к X, то Х является либо CR₅, либо N.

R₂, R₃, R'₂, R'₃ независимо являются Н, низшими алкилами, алкенилами, алкиленами, аминогруппами, фенилами или фенилалкиленами, или их замещенными производными.

Если R₂ или R'₂ являются алкиленом или алкениленом, то R₂ или R'₂ по выбору могут присоединяться к иминному N, находящемуся на прилежащем амидиновом С, для образования 5- или 6-членного гетероциклического кольца.

Z и Z' независимо являются алкиленами, алкениленами, циклоалкиленами или циклоалкениленами, или их замещенными производными.

Если R₂, R₃, R'₂ или R'₃ являются алкиленами или алкениленами, то R₂. R₃, R'₂ или R'₃ по выбору могут присоединяться к смежным Z или Z' с образованием 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включающего N, С и не более одного атома О или S, при условии, что вышеупомянутое гетероциклическое кольцо по выбору замещается низшими алкильными, алкокси-, гало-, гидрокси- или аминогруппами.

Х является N, NR₄, О, CR₅ или CR₄R₅; X' является N, NR'₄, О, CR'₅ или CR'₄R'₅; Y является S или Se.

R₄ и R'₄ независимо являются Н, алкилом, тиоалкиленом или тиоэфиралкиленом; R₅ и R'₅ независимо являются Н, алкилом, алкиленом, алкениленом, тиоалкиленом, тиоэфиралкиленом, аминогруппами или карбоксильными группами.

Если R₄ и R'₄ являются алкиленом, алкениленом, тиоалкиленом или тиоэфиралкиленом, R₄ или R'₄ по выбору могут быть присоединены к R₂, R₃, R'₂ или R'₃ с образованием 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включающего N, С и не более одного атома О или S, с условием, что R₂, R₃, R'₂ или R'₃ независимо являются алкиленами, алкениленами, аминогруппами, фенилами, фенилалкиленами или их замещенными производными, где замещенное производное является низшим алкилом или галорадикалом.

Краткое описание фигур графических материалов Фиг. 1 является графиком влияния меркаптоэтилгуанидина (МЭГ), меркаптопропилгуанидина (МПГ), NG-метил-L-аргинина (L-NMA) и метилового эфира NG-нитро-L-apгининa (L-НАМЭ) на продукцию нитрита иммуностимулированными макрофагами J774 (N=3-6); Фиг. 2 является графиком влияния меркаптоэтилгуанидина (МЭГ), меркаптопропилгуанидина (МПГ), NG-Meтил-L-apгининa (L-NMA) и метилового эфира NG-нитро-L-аргинина (L-НАМЭ) на продукцию нитрита иммуностимулированными клетками гладких мышц сосудов (N=3-6);
Фиг. 3 является графиком влияния меркаптоэтилгуанидина (МЭГ), меркаптопропилгуанидина (МПГ) и NG-метил-L-аргинина (L-NMA) на клеточное дыхание иммуностимулированных макрофагов J774(N= 3-6) при 100%, представляющих активность в контрольных пробах, т.е. в отсутствие любых ингибиторов;
Фиг.4 является графиком влияния меркаптоэтилгуанидина (МЭГ) на продукцию нитрита донором NO - соединением SIN-1 в среде для культивирования, содержащей 10% плодной сыворотки телят (N=3) при "С", представляющем активность в контрольных пробах, т.е. в отсутствие любых ингибиторов;
Фиг. 5 является графиком влияния меркаптоэтилгуанидина (МЭГ) и NG-метил-L-аргинина (L-NMA) на среднее артериальное кровяное давление (САД) у анестезированных крыс (N=3-5);
Фиг. 6 является графиком влияния меркаптоэтилгуанидина (МЭГ), NG-метил-L-аргинина (L-NMA) и метилового эфира NG-нитpo-L-apгининa (L-НАМЭ) на образование цитруллина гомогенатами эндотелиальных клеток, полученных из аорты быка;
Фиг. 7 является графиком влияния селеноэтилгуанидина (СЭГ), гуанидиноэтилдисульфида (ГЭД) и NG-метил-L-apгининa (L-NMA) на продукцию нитрита иммуностимулированными макрофагами J774(N=6);
Фиг. 8 является графиком влияния селеноэтилгуанидина (СЭГ), гуанидиноэтилдисульфида (ГЭД) и NG-метил-L-apгининa (L-NMA) на активность иСОА в гомогенатах легкого, приготовленных из легких, полученных от крыс, которым вводили бактериальный эндотоксин (N=6);
Фиг. 9 является графиком влияния селеноэтилгуанидина (СЭГ), гуанидиноэтилдисульфида (ГЭД) и NG-метил-L-apгининa (L-NMA) на активность экСОА, выделенной из соскобов интимы свежей аорты быка (N=6); и
Фиг. 10 является графиком влияния 2-аминоселеназолина (АСЗ), селенопропилгуанидина (СПГ) и селеноэтилгуанидина (СЭГ) на продукцию нитрита иммуностимулированными макрофагами J774(N=6).

Детальное описание изобретения
Изобретение направлено на создание фармакологически приемлемой композиции для ингибирования синтазы окиси азота у млекопитающего. Композиция включает меркапто- и селенопроизводные и фармацевтически приемлемый носитель, причем меркапто- или селенопроизводные присутствуют в составе в эффективном количестве для ингибирования синтазы окиси азота у млекопитающего. Изобретение также направлено на способ ингибирования синтазы окиси азота у млекопитающих, который включает стадию введения млекопитающему меркапто- или селенопроизводного в чистой форме или в фармацевтически приемлемом носителе.

Подходящие меркапто- или селенопроизводные для использования в композиции или способе могут быть получены в соответствии с методами синтеза, изложенными в следующих статьях, которые включены сюда полностью в качестве ссылки:
(1) Joseph X. Khim et al., "Ионобменные исследования реакций трансгуанилации. I. Перестройка S,2-аминоэтилтиомочевины в 2-меркаптоэтилгуанидин и 2-аминотиазолин", Journal of the American Chemical Society, V. 79, pp. 5663-5666. 5 ноября 1957;
(2) David G. Doherty et al., "Синтез аминоалкилизотиоурониевых солей и их превращение в меркаптоалкилгуанидины и тиазолины", Journal of the American Chemical Society, V. 79, pp.5667-5671, 5 ноября 1957;
(3) Joseph X. Khim et al., "Ионобменные исследования реакций трансгуанилирования. II. Перестройка 3-аминопропилизотиомочевины и N-замещенных аминоэтил- и аминопропилизотиомочевин в меркаптоалкилгуанидины и 2-аминотиазолины или пентиазолины", Journal of the American Chemical Society, V. 80, pp.3342-3349, 5 июля 1958;
(4) David G. Doherty et al., "Синтез D- и L-изомеров дигидробромидов 2-аминобутилизотиомочевины и их превращение в гуанидотиолы, дисульфиды и тиазолины", Journal of Organic Chemistry, V. 28, pp.1339-1342, 1963.

(5) Shih-Hsi Chu et al., "Потенциальные антирадиационные агенты. II. Селеновые аналоги гидробромида 2-аминоэтилизотиоурония и родственных соединений", Journal of the American Chemical Society, V. 27, pp.2899-2901, Август 1962.

(6) Tohru Hino et al., "Радиопротекторные агенты. I. Исследование N-алкилированных 2-(2-аминоэтил)тиопсевдомочевин и 1,1-(дитиоэтилен)дигуанидинов", Chemical & Pharmaceutical Bulletin, V. 14, 11, pp.1193-1201, Ноябрь 1966.

Подходящие меркаптопроизводные также могут быть получены в соответствии с примерами, данными в конце этого детального описания изобретения.

Меркаптано- или селенопроизводное для композиции и способа определено формулой, выбранной из группы, состоящей из:

и

или его солью, где: R₁ является алкилом, алкенилом, фенилом, алкиленом, алкениленом или фенилалкениленом или их замещенным производным.

Если R₁ является алкиленом или алкениленом, то R₁ по выбору может быть присоединен к амидиновым N, к Z или к Х в вышеприведенной формуле, содержащей R₁, с образованием 5-, 6- или 7-членного гетероциклического кольца с тем условием, что, когда R₁ присоединяется к Z, то Z является алкиленом или алкениленом или их замещенным производным, а если R₁ присоединяется к X, то Х является либо CR₅, либо N.

R₂, R₃, R'₂, R'₃ независимо являются Н, низшими алкилами, алкенилами, алкиленами, алкениленами, аминогруппами, фенилами или фенилалкиленами, или их замещенными производными.

Если R₂ или R'₂ являются алкиленами или алкениленами, то R₂ или R'₂ по выбору могут присоединяться к иминному N, находящемуся на смежном амидиновым С, с образованием 5- или 6-членного гетероциклического кольца;
Z и Z' независимо являются алкиленами, алкениленами, циклоалкиленами или циклоалкениленами, или их замещенными производными;
Если R₂, R₃, R'₂ или R'₃ являются алкиленами или алкениленами, то R₂, R₃, R'₂ или R'₃ по выбору могут присоединяться к смежным Z или Z' с образованием 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включающего N, С и не более одного атома О или S, при условии, что вышеупомянутое гетероциклическое кольцо по выбору замещается низшими алкильными, алкокси-, гало-, гидрокси- или аминогруппами.

Х является N, NR₄, О, СR₅ или СR₄R₅; X' является N, NR'₄, О, CR'₅ или CR'₄R'₅; Y является S или Se.

R₄ и R'₄ независимо являются Н, алкилами, тиоалкиленами или тиоэфиралкиленами; R₅ и R'₅ независимо являются Н, алкилами, алкиленами, алкениленами, тиоалкиленами, тиоэфиралкиленами, аминогруппами или карбоксильными группами.

Если R₄ и R'₄ являются алкиленами, алкениленами, тиоалкиленами или тиоэфиралкиленами, то R₄ или R'₄ по выбору могут быть присоединены к R₂, R₃, R'₂ или R'₃ с образованием 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включающего N, С и не более одного атома О или S, при условии, что R₂, R₃, R'₂ или R'₃ независимо являются алкиленами, алкениленами, аминогруппами, фенилами, фенилалкиленами или их замещенными производными, где замещенное производное является низшим алкилом или галорадикалом.

При использовании здесь термин "соль" относится к любой дополнительной соли, полученной из любой фармацевтически приемлемой органической или неорганической кислоты. Примеры подходящих кислот включают хлористоводородную (соляную), бромистоводородную, серную, азотную, хлорную, фумаровую, малеиновую, фосфорную, гликолевую, молочную, салициловую, янтарную, толуол-п-сульфоновую, виннокаменную, уксусную, лимонную, метансульфоновую, муравьиную, бензойную, малоновую, нафталин-2-сульфоновую и бензолсульфоновую кислоты. Кроме того, при использовании здесь любой алкил или алкилен может быть неразветвленным, разветвленным или циклическим, а "гало" включает бром, хлор, фтор и иод.

Как отмечено выше, R₁ является Н, алкилом, алкенилом. фенилом, алкиленом, алкениленом или фенилалкиленом или их замещенным производным. Если нужно, это производное R₁ может быть замещено одной или более алкокси-, гало-, гидрокси-, амино- или нитрогруппами. Кроме того, как отмечено выше, R₂, R₃, R'₂ и R'₃ независимо являются Н, низшими алкильными, алкенильными, алкиленовыми, алкениленовыми, амино-, фенильными или фенилалкениленовыми радикалами, или их замещенными производными. По желанию производные R₂, R₃, R'₂ и R'₃ могут быть замещены низшими алкилами или галорадикалами.

Если заместители R₄, R₅, R'₄ или R'₅ являются тиоалкиленами, то тиоалкилен предпочтительно имеет формулу [-(CH₂)_n-SH], где n независимо равно от 1 до 4. Если R₄, R₅, R'₄ или R'₅ являются тиоэфиралкениленами, то тиоэфиралкенилен предпочтительно имеет формулу [-(CH₂)_n-S-R₆], где R₆ независимо является низшим алкилом, а n независимо равно от 1 до 4.

Заместители Z и Z' меркапто- или селенопроизводных независимо являются алкиленами, алкениленами, циклоалкиленами или циклоалкениленами или их замещенными производными. Если используется такое замещенное производное, заместитель может включать алкокси-, гало-, гидрокси-, амино- или нитрогруппу.

Предпочтительная подгруппа меркапто- или селенопроизводных включает меркапто- или селенопроизводные, где: R₁ является Н или низшим алкилом; R₂ является Н; R₃ является Н; R'₂ является Н; R'₃ является Н; Х является NR₄; X' является NR'₄; R₄ и R'₄ независимо являются Н, метиловым или этиловым радикалами; а Z и Z' независимо являются алкиленами. Несколько не ограничивающих примеров включают меркаптоэтилгуанидин, меркаптопропилгуанидин, S-метилмеркаптоэтилгуанидин, S-метилмеркаптопропилгуанидин, селеноэтилгуанидин, имеющий структурную формулу:

селенопропилгуанидин, имеющий структурную формулу:

и гуанидиноэтилдисульфид. Другая предпочтительная подгруппа меркапто- или селенопроизводных образуется, если: ₁ является Н, R₂ является Н; R₃ является Н; R'₂ является Н; R'₃ является Н; Х является NR₄; X' является NR'₄; R₄ является Н; R'₄ является Н; и Z и Z' независимо являются C_1-6 алкиленами. Не ограничивающие примеры включают меркаптоэтилгуанидин, меркапто-пропилгуанидин, селеноэтилгуанидин, селенопропилгуанидин и гуанидиноэтилдисульфид.

В дополнение к меркапто- и селенопроизводным, обсуждавшимся выше, если необходимо, селенопроизводное в композиции и способе может быть изоселеномочевиной. Изоселеномочевины имеют общую формулу:

Не ограничивающие примеры изоселеномочевин включают аминоэтилизоселеномочевину (АЭ-Se-M), аминопропилизоселеномочевину (АП-Se-M) и 2-аминоселеназолин (A-Se-3).

АЭ-Se-M и АП-Se-M могут вызывать эффект ингибиторов СОА через внутримолекулярные перестройки с образованием селеноэтилгуанидина (СЭГ) и селенопропилгуанидина (СПГ) соответственно. В тестах с этими соединениями изоселеномочевины растворы любого соединения вызывали восстановление "Альдритиола-2" (2,2'-дитиопиридина, 2-дипиридилдисульфида), реагента, используемого для измерения свободных тиольных (-SH) и свободных селенольных (-SeH) групп. Это восстановление было быстрым при нейтральных рН, но более медленным при более низких уровнях рН. Более того, концентрации АЭ-Se-M и АП-Se-M в растворе, измеренные путем жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД), уменьшались со скоростями, которые сходным образом зависели от рН. Эти данные позволяют предположить, что АЭ-Se-M и АП-Se-M перестраиваются с образованием других видов, преимущественно селеноалкилгуанидинов, в соответствии с данными Чу и Маутнера (S.H.Chu and H.G.Mautner, Journal of the American Chemical Society, 27, 2899-2901 (1962).

Меркапто- или селенопроизводные в чистой форме или в фармацевтически приемлемом носителе будут полезны при лечении состояний и нарушений, при которых существует польза от ингибирования фермента синтетазы окиси азота и селективного ингибирования индуцибельной изоформы. Например, меркапто- или селенопроизводные могут быть использованы для лечения циркуляторного шока, включая его различные аспекты, такие как сосудистая и миокардиальная дисфункции, метаболических нарушений, включая ингибирование митохондриальных ферментов и метаболизма лекарств, опосредованного цитохромом Р450, и синдрома множественной дисфункции органов, включая респираторный дистресс-синдром взрослых. Циркуляторный шок может быть результатом грамотрицательного или грамположительного сепсиса, травмы, кровотечения, ожога, анафилаксии, иммунотерапии цитокинами, печеночной недостаточности, почечной недостаточности или синдрома системной воспалительной реакции.

Меркапто- и селенопроизводные также могут быть полезны для пациентов, получающих терапию цитокинами, такими как TNF, IL-1 и IL-2, или терапию цитокининдуцирующими агентами, либо адъювантами для кратковременной иммуносуппрессии при трансплантационной терапии. Кроме того, меркапто- и селенопроизводные могут быть полезны для ингибирования синтеза NO у пациентов, страдающих от воспалительных состояний, при которых избыток NO способствует патофизиологии состояния, таких, например, как респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ) и миокардит.

Существуют также доказательства того, что фермент синтаза NO может быть вовлечен в патофизиологию аутоиммунных и/или воспалительных состояний, таких как артрит, ревматоидный артрит и системная красная волчанка (СКВ), и инсулинзависимый diabetes mellitus, и поэтому меркапто- и селенопроизводные могут оказаться полезными при лечении этих состояний. Более того, сейчас уже ясно, что существует множество дополнительных воспалительных и невоспалительных заболеваний, которые связаны с избыточной продукцией NO. Примеры таких физиологических нарушений включают: воспалительные заболевания кишечника, такие как илеит, язвенный колит и болезнь Крона; воспалительные поражения легких, такие как астма и хроническое обструктивное заболевание дыхательных путей; воспалительные поражения глаз, включая дистрофию роговицы, трахому, онхоцеркоз, увеит, симпатический офтальмит и эндофтальмит; хронические воспалительные поражения десен, включая периодонтит; хронические воспалительные поражения суставов, включая артрит и остеоартрит, туберкулез, проказу, саркоидный гломерулонефрит и нефроз; поражения кожи, включая склеродерматит, псориаз и экзему; воспалительные заболевания центральной нервной системы, включая хронические демиелинизирующие заболевания, такие как рассеянный склероз, деменция, включая нейродегенерацию, связанную со СПИД и болезнью Альцгеймера, энцефаломиелит и вирусный или аутоиммунный энцефалит; аутоиммунные заболевания, включая иммуннокомплексный васкулит, системную волчанку и эритематозы; и заболевания сердца, включая ишемическую болезнь сердца и кардиомиопатию. Другие заболевания, при которых может помочь использование меркапто- и селенопроизводных, включают недостаточность надпочечников; гиперхолестеринемию; атеросклероз; болезни костей, связанные с повышенной резорбцией костей, например остеопороз, преэклампсию, эклампсию, уремические осложнения; хроническую печеночную недостаточность, невоспалительные заболевания центральной нервной системы (ЦНС), включая инсульт и ишемию мозга; и различные формы рака.

Фармацевтические формы меркапто- и селенопроизводных могут включать формы, пригодные для орального, ректального, назального, местного (включая трансбуккальный и подъязычный), вагинального или парентерального (включая внутримышечное, подкожное и внутривенное) введения, или для введения путем ингаляции или инсуффляции. Композиции могут в случае необходимости быть представлены в виде удобных дискретных дозированных единиц и могут быть приготовлены любыми способами, хорошо известными в области фармации. Все эти фармацевтические способы включают стадию соединения активного вещества с жидкими носителями или мелко размельченными твердыми носителями или с обоими при необходимости, а затем, если нужно, формование продукта в желаемой форме.

Удобные фармацевтические формы, подходящие для орального введения, могут быть представлены: в виде дискретных единиц, таких как капсулы, крахмальные облатки или таблетки, каждая из которых содержит предварительно заданное количество активного ингредиента; в виде порошков или гранул; или в виде раствора, суспензии или эмульсии. Активный ингредиент может также быть представлен в виде болюса или пасты или быть в чистом виде, т.е. без носителя. Таблетки и капсулы для орального приема могут содержать общепринятые добавки, такие как связующие вещества, наполнители, смазывающие вещества, разрыхлители или увлажняющие вещества. Таблетки могут быть изготовлены путем прессования или отливки в форме, по выбору с одним или более дополнительными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть изготовлены путем прессования в подходящих машинах активного ингредиента в свободно текущей форме, такой как порошок или гранулы, по выбору смешанного со связующим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавляющим, смазывающим, поверхностно-активным или диспергирующим агентом. Литые таблетки могут быть приготовлены путем разливки по формам в подходящей машине смеси порошкообразных соединений, смоченной инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть покрыты оболочкой в соответствии с способами, хорошо известными в данной области техники. Жидкие оральные препараты могут быть в форме, например, водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров или могут быть представлены в виде сухих продуктов для смешивания с водой или другим подходящим растворителем перед использованием. Такие жидкие препараты могут содержать общепринятые добавки, такие как суспендирующие агенты, эмульгирующие агенты, неводные растворители (которые могут включать пищевые масла) или консерванты. Таблетки могут по выбору быть изготовлены так, чтобы обеспечить медленное или регулируемое выделение содержащегося в них активного ингредиента.

Формы для парентерального введения включают: водные и неводные стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатики и растворенные вещества, которые делают состав изотоничным крови предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загущающие агенты. Составы могут быть представлены в разовой дозировке или в контейнерах для множественных доз, например запаянных ампулах и флаконах, и могут храниться в замороженно-высушенном (лиофилизированном) состоянии, требующем лишь добавления стерильного жидкого носителя, например физиологического раствора, воды для инъекций, непосредственно перед употреблением. Альтернативно могут быть представлены формы для длительной инфузии. Растворы и суспензии для инъекций могут быть приготовлены extempora из стерильных порошков, гранул и таблеток вышеописанного типа.

Формы для ректального введения могут быть представлены в виде суппозиториев с обычными основами, такими как масло какао или полиэтиленгликоль. Формы для местного применения во рту, например, трансбуккально или сублингвально, включают лепешки, содержащие активный ингредиент в корригентной основе, такой как сахароза и акация или трагакант, и пастилки, содержащие активный ингредиент в такой основе, как желатин и глицерин или сахароза и акация. Для интраназального введения соединения, являющиеся предметом изобретения, могут быть использованы в виде жидкого аэрозоля, или распыляемого порошка, или в форме капель. Капли могут быть составлены на водной или неводной основе, содержащей также один или более диспергирующий агент, солюбилизирующие агенты или суспендирующие агенты. Жидкие аэрозоли удобно получать из упаковок под давлением.

Для введения путем ингаляции соединения, соответствующие изобретению, удобно получать из инсуффляторов, ингаляторных упаковок под давлением или других удобных средств получения аэрозольных спреев. Упаковки, находящиеся под давлением, могут содержать подходящий пропеллент, такой как дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан, двуокись углерода или другой подходящий газ. В случае аэрозоля под давлением дозировочная единица может быть определена путем обеспечения клапаном для подачи измеренного количества.

Альтернативно, для введения путем ингаляции или инсуффляции соединения, соответствующие изобретению, могут принимать форму сухих порошкообразных прописей, например порошкообразная смесь соединения и подходящей порошкообразной основы, такой как лактоза или крахмал. Порошкообразная композиция может быть представлена в форме разовой дозы, например в капсулах, картриджах, желатиновых или пластырных упаковках, из которых порошок может вводиться при помощи ингалятора или инсуффлятора.

Если необходимо, могут быть использованы вышеописанные формы, адаптированные для обеспечения непрерывного выделения активного ингредиента. Фармацевтические композиции, соответствующие изобретению, могут также содержать другие активные ингредиенты, такие как противомикробные агенты, иммуносупрессанты или консерванты.

Соединения, являющиеся предметом изобретения, могут также быть использованы в комбинации с другими терапевтическими агентами, например противовоспалительными агентами, в частности нестероидными противовоспалительными лекарствами (НСПВЛ), сосудорасширяющими простагландинами, включая простациклин и простагландин E₁, агентами для химиотерапии рака, включая цисплатин, донорами NO или ингаляционной терапией NO, или антагонистами PAF-рецепторов.

Следует понимать, что кроме ингредиентов, частично отмеченных выше, композиции, являющиеся предметом данного изобретения, могут включать другие агенты, обычные для данной области применения, имеющие отношение к типу композиции, о которой идет речь, например композиции, подходящие для орального введения, могут включать вкусовые агенты.

Предпочтительными формами с дробными дозировками являются формы, содержащие эффективную дозу активного ингредиента, как изложено ниже, или подходящую ее долю.

При каждом из ранее указанных состояний меркапто- или селенопроизводное может вводиться орально или путем инъекции в дозе от 0,1 до 250 мг/кг в день. Уровень дозы для взрослых людей обычно составляет от 5 мг до 17,5 г/день, предпочтительно от 5 мг до 10 г/день и наиболее предпочтительно от 100 мг до 3 г/день. Таблетки или другие формы представления, представленные в виде дискретных единиц, могут для удобства содержать количество, которое является эффективным при такой дозировке, или кратное количество, например, единицы, содержащие от 5 мг до 500 мг, обычно около 100-500 мг.

Фармацевтическая композиция предпочтительно вводится орально или путем инъекции (внутривенно или подкожно), и за точное количество, введенное пациенту, несет ответственность лечащий врач. Однако используемая доза будет зависеть от многих факторов, включая возраст и пол пациента, точную форму расстройства, которое нужно лечить, и его тяжесть. Путь введения также может изменяться в зависимости от состояния и его тяжести.

Следующие примеры даны с целью иллюстрации и не предназначены для ограничения объема формулы изобретения.

ПРИМЕР 1
Этот пример иллюстрирует влияние избранных меркаптопроизводных на индуцированное эндотоксином образование нитрита в макрофагах J774.2 и на индуцированное IL-1 и гамма-интерфероном образование нитрита в культивируемых гладкомышечных клетках аорты крысы. Клеточные линии макрофагов J774 были получены из Американской коллекции типовых культур (АКТК) и выращивались с использованием стандартных методов в модифицированной по Далбекко среде Игла (МДСИ) с добавлением 10% плодной сыворотки коров, глутамина, пенициллина (10000 ЕД/л) и стрептомицина (10000 ЕД/л). Клетки гладких мышц аорты крысы (КГАК) от крыс Вистар выделяли путем ферментативной диссоциации с использованием стандартных методик. Клетки идентифицировали положительно как гладкомышечные непрямым иммунофлуоресцентным окрашиванием на α-актин с использованием мышиных антител к α-актину и конъюгата флуоресцеинизотиоцианата с антителами против IgG мыши. Клетки КГАК выращивали в флаконах для культур тканей Т-75 в 50% питательной среды F12 и 50% модифицированной по Далбекко среды Игла с добавлением 10% плодной сыворотки коров, глутамина, пенициллина (10000 ЕД/л) и стрептомицина (10000 ЕД/л). Клетки выращивали на пластинках с 96-ячейками для измерения продукции нитрита и жизнеспособности клеток. Макрофаги J774 обрабабывали эндотоксином (100 мкг/мл) в течение 24 часов; клетки гладких мышц обрабатывали IL-1 (100 ЕД/мл) и гамма-интерфероном (50 ЕД/мл) в течение 48 часов.

Концентрацию нитрита, продукта деградации NO в культуральной среде, определяли путем смешивания эквивалентных объемов среды и реагента Грисса (1% сульфаниламида/0,1% нафтилэтилендиамин дигидрохлорида/2,5% ₃РО₄). Смесь инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре для образования хромофора, затем определяли оптическую плотность (ОП) при длине волны 550 нм (OП₅₅₀). В качестве стандарта использовали NaNO₂. Спектрофотометрические измерения были выполнены на двулучевом спектрофотометре.

Митохондриальное дыхание как индикатор жизнеспособности клеток оценивали по митохондриальнозависимому восстановлению МТТ [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромид) до формазана. Клетки на 96-ячеечных пластинках инкубировали (37^oС) с МТТ (0,2 мг/мл в течение 60 минут). Культуральную среду удаляли путем отсасывания и клетки разводили диметилсульфоксидом (ДМСО) (100 мкл). Уровень восстановления МТТ до формазана в клетках количественно определяли путем измерения ОП₅₅₀ с использованием считывателя микропластинок. Калибровочная кривая восстановления МТТ до формазана была получена в ДМСО. Продукция формазана клетками выражалась в процентах от уровня, полученного для необработанных клеток.

Клетки, стимулированные эндотоксином или IL-1 и гамма-интерфероном, продуцировали окись азота, измерявшуюся по возрастанию концентрации нитрита в культуральной среде. Она дозозависимо ингибировалась меркаптопроизводными меркаптоэтилгуанидином (МЭГ) и меркаптопропилгуанидином (МПГ), которые были гораздо более выраженными ингибиторами, чем эталонные соединения NG-метил-L-аргинин (L-NMA) и метиловый эфир NG-нитро-L-аргинина (L-НАМЭ), как видно из фиг.1 и 2 и таблиц 1 и 2. Ингибирование продукции нитрита не было связано с гибелью клеток, так как эти агенты в их эффективных дозах (1-100 мкМ) не снижали жизнеспособности клеток (фиг.3). При 1 мМ наблюдалось слабое уменьшение жизнеспособности (фиг.3). Более того, эти агенты не удаляли нитрит или окись азота, так как они не мешали измерению уровня нитрита после инкубации в присутствии соединения-донора NO 3-морфолиносиднонимин-гидрохлорида (СИН-1) (фиг.4). Подобно МЭГ и МПГ S-метил-МЭГ и S-этил-МЭГ являлись ингибиторами накопления нитрита иммуностимулированными макрофагами J774 (таблица 1).

ПРИМЕР 2
Этот пример иллюстрирует влияние избранных меркаптопроизводных на кровяное давление у нормально анестезированных крыс. Увеличение кровяного давления агентами, которые ингибируют СОА, является хорошей мерой их ингибиторного влияния на конститутивную, эндотелиальную СОА (экСОА). Поскольку L-NMA, как известно, является лишь слабо избирательным по отношению к индуцибельной СОА (иСОА), ингибируя иСОА и экСОА в существенно одинаковой степени, L-NMA полезен в качестве эталонного соединения для иллюстрации избирательности по отношению к изоформам. Если ингибирующий СОА агент увеличивает кровяное давление менее сильно, чем L-NMA (общее неизбирательное соединение), тогда агент может быть признан имеющим избирательность по отношению к индуцибельной изоформе.

В этом отдельном примере самцов крыс Вистар анестезировали тиопентоном натрия (120 мг/кг, в/брюшинно). Трахею канюлировали, чтобы облегчить дыхание, и поддерживали ректальную температуру 37^oС при помощи ректального зонда, соединенного с термостатическим одеялом. Правая каротидная артерия была канюлирована и соединена с преобразователем давления для измерения фазового и среднего артериального кровяного давления и частоты сердечных сокращений. Левая и правая бедренные вены были канюлированы для введения лекарств.

Меркаптопроизводные МЭГ и МПГ и эталонное соединение L-NMA вводили животным в соответствующих дозах внутривенно или внутрибрюшинно. Как показано на фиг. 5, меркаптопроизводные вызывали лишь небольшое повышение среднего артериального кровяного давления (САД), тогда как условное эталонное вещество L-NMA вызывало выраженную и дозозависимую прессорную реакцию, иллюстрируя тем самым избирательность меркаптопроизводных.

ПРИМЕР 3
Это еще один пример относительно слабого влияния меркаптоэтилгуанидина и родственных соединений на активность конститутивных СОА (экСОА и мСОА). Активность экСОА из аорты быка определяли следующим образом. Поверхность интимы свежей аорты быка соскабливали в присутствии буфера для гомогенизации, состоящего из 50 мМ Трис-HCl, 0,1 мМ этидендиаминотетрауксусной кислоты (ЭДТА) и 0,1 мМ бис (бета-аминоэтиловогоэфира) этиленгликоля (ЭПГА). Превращение [³Н]-L-аргинина в [³Н]-L-цитруллин измеряли в гомогенатах следующим образом. Гомогенат клеток (50 мкл) инкубировали в присутствии [³Н]-L-аргинина (10 мкМ, 5 кБк/пробирку), НАДФ-Н (2 мМ), кальмодулина (30 нМ), тетрагидробиоптерина (5 мкМ) и кальция (2 мМ) в течение 20 минут при 37^oС в буферном растворе N-2-гидроксиэтилпиперазин-N-2-этансульфоновой кислоты (HЕРЕS) (рН 7,5). Реакции останавливали добавлением 1 мл охлажденного на льду HEPES буфера (рН 5,5), содержащего ЭГТА (2 мМ) и ЭДТА (2 мМ). Реакционные смеси наносили на колонку Dowex 50W (Na⁺ форма) и активность элюированного [³Н]-L-цитруллина измеряли на сцинтилляционном счетчике. Активность мСОА измеряли с использованием сходных методов в гомогенатах целого мозга крыс. Дозозависимое ингибирование активности экСОА меркаптоэтилгуанидином (МЭГ) при включении в инкубационную среду было заметно меньше (ЕС₅₀=110 мкМ, n=6), чем ингибирование L-NMA (EC₅₀=5 мкМ, n=6) или L-НАМЭ (EC₅₀=2 мкМ, n=6), тем самым иллюстрируя избирательность меркаптопроизводных в отношении изоформ (фиг. 6, таблица 2). Сходным образом S-метил-МЭГ и S-этил-МЭГ обладали меньшей активностью в отношении экСОА, но были относительными мощными ингибиторами активности иСОА (таблица 2).

ПРИМЕР 4
Этот пример иллюстрирует способ синтеза меркаптоэтилгуанидинсульфата. Меркаптоэтилгуанидингидрохлорид (2 г) растворяли в метаноле (5 мл) и охлаждали в ванне с солью/льдом. Добавляли холодный раствор гидроокиси калия (0,99 г) в метаноле (10 мл) и смесь перемешивали. Через 1 час раствор фильтровали, и к 12 мл фильтрата добавляли S-метилизотиомочевину (2 г). Раствор перемешивали при комнатной температуре (18^oС) в течение 16 часов в атмосфере азота. Затем раствор фильтровали и добавляли эфир для осаждения неочищенного продукта, который затем перекристаллизовывали из смеси эфир/этанол.

ПРИМЕР 5
2-(метилтио)этилгуанидинсульфат приготавливали следующим образом. К раствору 0,695 г S-метилизотиомочевины в 15 мл 90%-ного метанола добавляли 0,456 г 2-(метилтио)этиламина. Раствор перемешивали в течение 20 часов при комнатной температуре, фильтровали и растворитель удаляли в вакууме. Остаток кристаллизовали из смеси метанола и эфира.

ПРИМЕР 6
2-(этилтио)этилгуанидинсульфат приготавливали с использованием процедуры примера 5; однако вместо 2-(метилтио)этиламина использовали 0,5 г 2-(этилтио)этиламина.

ПРИМЕР 7
N-амидинилтиоморфолинсульфат приготавливали следующим образом. Тиоморфолин (3 мл) добавляли к раствору 4,17 г S-метилизотиомочевины в 30 мл 25%-ного водного раствора метанола и раствор перемешивали в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении, а остаток переносили в теплый метанол и фильтровали. Объем уменьшали и раствор оставляли на 2 дня, после чего собирали твердое вещество.

ПРИМЕР 8
N-амидинилтиазолидинсульфат приготавливали следующим образом. Тиазолидин (1 г) добавляли к раствору 1,56 г S-метилизотиомочевины в 15 мл 25%-ного водного метанола и раствор перемешивали в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении, а остаток перекристаллизовывали из метанола/воды, чтобы получить белое твердое вещество с малым выходом.

ПРИМЕР 9
Этот пример иллюстрирует влияние избранных меркапто- и селенопроизводных на продукцию нитрита иммуностимулированными макрофагами J774.2. Клеточную линию мышиных макрофагов J774.2 получили из АКТК и культивировали в МДСИ с 4х10^-3 М L-глутамина и 10% плодной сыворотки телят. Клетки культивировали на 96-ячеечных пластинках с 200 мкл культуральной среды, пока они не достигали 60-80% конфлуентности. Чтобы индуцировать иСОА, добавляли свежую культуральную среду, содержащую ЛПС Е.соli (10 мкг/мл) и мышиный гамма-интерферон (ИФН) (50 ЕД/мл). Накопление нитрита в среде культуры клеток в отсутствие или в присутствии различных ингибиторов измеряли через 24 часа. Продукцию нитрита как индикатор синтеза NO измеряли в супернатанте макрофагов J774.2 с использованием реакции Грейсса, как описано выше в примере 1.

В отсутствие иммуностимуляции продукция нитрита макрофагами J774.2. не обнаруживалась. Однако в присутствии ИФН или ЛПС концентрация нитрита в среде возрастала до 17±2 мкМ в отсутствие ингибиторов. Согласно фиг.7 и таблице 3 и СЭГ, и ГЭД вызывали дозозависимое ингибирование продукции нитрита. Кроме того, ингибиторная активность каждого из этих соединений была выше, чем эталонного вещества L-NMA. СЭГ имел EC₅₀, равную 10 мкМ, а ГЭД имел EC₅₀, равную 0,3 мкМ, тогда как значение EC₅₀ для L-NMA было равно 90 мкМ.

ПРИМЕР 10
Этот пример иллюстрирует влияние избранных меркапто- и селенопроизводных на активность иСОА в гомогенатах легких, полученных от крыс, обработанных эндотоксином. Легкие получали от крыс, которым вводили бактериальный эндотоксин (15 мг/кг в/в) в течение трех часов, и легкие затем гомогенизировали. Буфер для гомогенизации состоял из 50 мМ трис-HCl, 0,1 мМ ЭДТА, 0,1 мМ ЭГТА и 1 мМ фенилметилсульфонилхлорида (рН 7,4). Клеточные суспензии гомогенизировали в буфере для гомогенизации на льду с использованием гомогенизатора Tissue Теагог 985-370 (БиоСпек Продактс, Рейсин, Висконсин). Согласно фиг.8 и таблице 4 ГЭД и L-NMA до некоторой степени сходны по своему ингибиторному эффекту, тогда как СЭГ ингибирует активность иСОА более сильно.

ПРИМЕР 11
Этот пример иллюстрирует влияние избранных меркапто- и селенопроизводных на активность экСОА, полученной из соскобов интимы свежей аорты быка. Для получения препарата, обогащенного экСОА, поверхность интимы свежей аорты быков соскабливали и гомогенизировали. Буфер для гомогенизации состоял из 50 мМ трис-HCI, 0,1 мМ ЭДТА, 0,1 мМ ЭГТА и 1 мМ фенилметилсульфонилхлорида (рН 7,4). Клеточные суспензии гомогенизировали в буфере для гомогенизации на льду с использованием гомогенизатора Tissue Tearor 985-370 (БиоСпек Продактс, Рейсин, Висконсин). Превращение [³H]-L-аргинина в [³H]-L-цитруллин измеряли в гомогенатах, как описано выше в примере 3.

Согласно фиг.9 и таблице 5 СЭГ и ГЭД ингибировали активность экСОА менее сильно, чем L-NMA. Кроме того, при сравнении фиг.8 и 9 и таблиц 4 и 5 ЕС₅₀ для влияния СЭГ на иСОА (10 мкМ) была достоверно ниже, чем EC₅₀ для влияния СЭГ на экСОА (600 мкМ). Кроме того, ЕС₅₀ для влияния ГЭД на иСОА (200 мкМ) была достоверно ниже, чем EC₅₀ для влияния ГЭД на экСОА (630 мкМ). Эти значения ЕС₅₀ еще раз демонстрируют относительную избирательность СЭГ и ГЭД в отношении иСОА.

ПРИМЕР 12
Этот пример иллюстрирует влияние избранных селенопроизводных на индуцированное эндотоксином образование нитрита макрофагами J774.2. Клеточную линию мышиных макрофагов J774.2, полученную из АКТК, культивировали в МДСИ с 4•10^-3 М L-глутамина и 10% плодной сыворотки телят. Клетки культивировали в 96-ячеечных пластинах с 200 мкл культуральной среды, пока они не достигали 60-80% слияния. Чтобы индуцировать иСОА, добавляли свежую культуральную среду, содержащую ЛПС Е.соli (10 мкг/мл) и мышиный гамма-интерферон (ИФН) (50 ЕД/мл). Накопление нитрита в среде клеточной культуры в отсутствие и в присутствии различных ингибиторов измеряли через 24 часа. В отсутствие иммуностимуляции продукция нитрита макрофагами J774.2 не обнаруживалась. Однако в присутствии ИФН и ЛПС концентрация нитрита в среде возрастала до 17±2 мкМ в отсутствие ингибитора. Согласно фиг.10 и таблице 6 АСЗ, СЭГ и СПГ дозозависимо ингибировали продукцию нитрита.

Детальное описание изобретения, представленное выше, дано с целью иллюстрации, и оно не предназначено для того, чтобы ограничить объем изобретения, который следует определять формулой изобретения.

Формула изобретения

1. Фармакологически приемлемая композиция для ингибирования синтазы окиси азота у млекопитающих и/или для лечения состояния, при котором целесообразно ингибирование фермента синтазы окиси азота, в том числе: для лечения циркуляторного шока, включая сосудистую и миокардиальную дисфункции, или для лечения метаболических нарушений, включая ингибирование митохондриальных ферментов и метаболизма лекарств, опосредованного цитохромом Р450, или для лечения синдрома множественной дисфункции органов, включая респираторный дистресс-синдром взрослых, или для лечения грамотрицательного или грамположительного сепсиса, травмы, кровотечения, ожога, анафилаксии, иммунотерапии цитокинами, печеночной недостаточности, почечной недостаточности, синдрома системной воспалительной реакции, или для лечения состояния, вызванного терапией цитокинами, в том числе TNF, IL-1 и IL-2, или терапией цитокининдуцирующими агентами, либо адъювантами при трансплантационной терапии, или для лечения воспалительных состояний, включая респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ) и миокардит, или для лечения аутоиммунных и/или воспалительных состояний, включая артрит, ревматоидный артрит и инсулинзависимый diabetes mellitus, или для лечения воспалительных заболеваний кишечника, включая илеит, язвенный колит и болезнь Крона, или для лечения воспалительных поражений легких, включая астму и хроническое обструктивное заболевание дыхательных путей, или для лечения воспалительных поражений глаз, включая дистрофию роговицы, трахому, онхоцеркоз, увеит, симпатический офтальмит и эндофтальмит, или для лечения хронических воспалительных поражений десен, включая периодонтит, или для лечения хронических воспалительных поражений суставов, включая артрит и остеоартрит, туберкулез, проказу, саркоидный гломерулонефрит и нефроз, или для лечения поражений кожи, включая склеродерматит, псориаз и экзему, или для лечения воспалительных заболеваний центральной нервной системы, включая хронические демиелинизирующие заболевания, в том числе рассеянный склероз, деменция, включая нейродегенерацию, связанную со СПИД и болезнью Альцгеймера, энцефаломиелит и вирусный или аутоиммунный энцефалит, или для лечения аутоиммунных заболеваний, включая иммуннокомплексный васкулит, системную волчанку и эритематозы, или для лечения заболеваний сердца, включая ишемическую болезнь сердца и кардиомиопатию, или для лечения недостаточности надпочечников, гиперхолестеринемии, атеросклероза, или для лечения болезней костей, связанных с повышенной резорбцией костей, включая остеопороз, преэклампсию, эклампсию, уремические осложнения, или для лечения хронической печеночной недостаточности, или для лечения невоспалительных заболеваний центральной нервной системы (ЦНС), включая инсульт и ишемию мозга, или для лечения различных форм рака, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и активный ингредиент в виде соединения с формулой

или его солей,
где Х является NH;
R выбран из группы, включающей
-CH₂-CH₂-SH, -CH₂-CH₂-CH₂-SH, -CH₂-CH₂-S-CH₃, -CH₂-CH₂-S-CH₂-CH₃. 2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанное соединение представляет собой меркаптоэтилгуанидин.

3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанное соединение представляет собой меркаптопропилгуанидин.

4. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанное соединение представляет собой S-метил-меркаптоэтилгуанидин.

5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанное соединение представляет собой S-этил-меркаптоэтилгуанидин.

6. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что она составлена для орального, ректального, назального, местного, трансбуккального, сублингвального, вагинального, парентерального, внутримышечного, подкожного, внутривенного, ингаляционного или инсуффляционного введения.

7. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что она составлена для орального введения, причем указанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из связывающего агента, наполнителя, смазывающего вещества, дезинтегранта, смачивающего агента, инертного растворителя, поверхностно-активного агента, диспергирующего агента, суспендирующего агента, эмульгирующего агента, пищевого масла, вкусового агента и их смесей.

8. Композиция по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что она составлена для местного введения через рот, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из вкусового агента, сахарозы, акации, трагаканта, желатина, глицерина и их смесей.

9. Композиция по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что она составлена для назального введения, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из диспергирующего агента, солюбилизирующего агента, суспендирующего агента или их смесей.

10. Композиция по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что она составлена для введения путем ингаляции, вышеуказанный носитель включает пропеллент.

11. Композиция по п.10, отличающаяся тем, что вышеуказанный пропеллент выбран из группы, состоящей из дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, двуокиси углерода и их смесей.

12. Композиция по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что она составлена для введения путем ингаляции или инсуффляции, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из лактозы, крахмала и их смесей.

13. Композиция по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что она составлена для парентерального введения, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из антиоксиданта, буфера, бактериостатика, суспендирующего агента, уплотняющего агента, физиологического раствора, воды и их смесей.

14. Композиция по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что она составлена для ректального введения, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из масла какао, полиэтиленгликоля и их смесей.

15. Композиция по любому из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что она включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из противомикробного агента, иммунодепрессанта, консерванта и их смесей.

16. Композиция по любому из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что она составлена для введения вышеуказанного соединения в дозах от примерно 5 мг до примерно 17,5 г/день.

17. Композиция по п.16, отличающаяся тем, что она составлена для введения вышеуказанного соединения в дозе от примерно 5 мг до примерно 10 г/день.

18. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что она составлена для введения вышеуказанного соединения в дозе от примерно 100 мг до примерно 3 г/день.

19. Композиция по любому из пп.1-18, отличающаяся тем, что она предназначена для ингибирования индуцируемой синтазы окиси азота у млекопитающего.

20. Композиция по любому из пп.1-18, отличающаяся тем, что она предназначена для избирательного ингибирования индуцируемой синтазы окиси азота.

21. Композиция по любому из пп.1-18, отличающаяся тем, что она предназначена для лечения состояния, где целесообразно ингибирование фермента синтазы окиси азота.

22. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что указанное состояние выбрано из группы, состоящей из циркуляторного шока, синдрома системной воспалительной реакции, терапии цитокинами, терапии цитокининдуцирующими агентами, трансплантации, отторжения трансплантата, местных воспалительных реакций, системного воспаления, аутоиммунных заболеваний, респираторного дистресс-синдрома взрослых, артрита, ревматоидного артрита, diabetes mellitus, илеита, язвенного колита, болезни Крона, астмы, периодонтита, нефроза, хронических демиелинизирующих заболеваний нервной системы, рассеянного склероза, осложнений, связанных со СПИД, болезни Альцгеймера, ишемической болезни сердца, кардиомиопатии, недостаточности надпочечников, гиперхолестеринемии, атеросклероза, болезней костей, связанных с повышенной резорбцией костей, преэклампсии, эклампсии, уремических осложнений, хронической печеночной недостаточности, инсульта, ишемии мозга и рака, синдрома системной воспалительной реакции и циркуляторного шока.

23. Композиция по п.22, отличающаяся тем, что указанное состояние выбрано из группы, состоящей из синдрома системной воспалительной реакции и циркуляторного шока.

24. Фармакологически приемлемая композиция для ингибирования синтазы окиси азота у млекопитающих и/или для лечения состояния, при котором целесообразно ингибирование фермента синтазы окиси азота, в том числе для лечения циркуляторного шока, включая сосудистую и миокардиальную дисфункции, или для лечения метаболических нарушений, включая ингибирование митохондриальных ферментов и метаболизма лекарств, опосредованного цитохромом Р450, или для лечения синдрома множественной дисфункции органов, включая респираторный дистресс-синдром взрослых, или для лечения грамотрицательного или грамположительного сепсиса, травмы, кровотечения, ожога, анафилаксии, иммунотерапии цитокинами, печеночной недостаточности, почечной недостаточности, синдрома системной воспалительной реакции, или для лечения состояния, вызванного терапией цитокинами, в том числе TNF, IL-1 и IL-2, или терапией цитокининдуцирующими агентами, либо адъювантами при трансплантационной терапии, или для лечения воспалительных состояний, включая респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ) и миокардит, или для лечения аутоиммунных и/или воспалительных состояний, включая артрит, ревматоидный артрит и инсулинзависимый diabetes mellitus, или для лечения воспалительных заболеваний кишечника, включая илеит, язвенный колит и болезнь Крона, или для лечения воспалительных поражений легких, включая астму и хроническое обструктивное заболевание дыхательных путей, или для лечения воспалительных поражений глаз, включая дистрофию роговицы, трахому, онхоцеркоз, увеит, симпатический офтальмит и эндофтальмит, или для лечения хронических воспалительных поражений десен, включая периодонтит, или для лечения хронических воспалительных поражений суставов, включая артрит и остеоартрит, туберкулез, проказу, саркоидный гломерулонефрит и нефроз, или для лечения поражений кожи, включая склеродерматит, псориаз и экзему, или для лечения воспалительных заболеваний центральной нервной системы, включая хронические демиелинизирующие заболевания, в том числе рассеянный склероз, деменция, включая нейродегенерацию, связанную со СПИД и болезнью Альцгеймера, энцефаломиелит и вирусный или аутоиммунный энцефалит, или для лечения аутоиммунных заболеваний, включая иммуннокомплексный васкулит, системную волчанку и эритематозы, или для лечения заболеваний сердца, включая ишемическую болезнь сердца и кардиомиопатию, или для лечения недостаточности надпочечников, гиперхолестеринемии, атеросклероза, или для лечения болезней костей, связанных с повышенной резорбцией костей, включая остеопороз, преэклампсию, эклампсию, уремические осложнения, или для лечения хронической печеночной недостаточности, или для лечения невоспалительных заболеваний центральной нервной системы (ЦНС), включая инсульт и ишемию мозга, или для лечения различных форм рака, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и активный ингредиент в виде соединения с формулой

или его солей,
где Х является NH;
R выбран из группы, включающей:
-CH₂-CH₂-Se-H, -CH₂-CH₂-CH₂-Se-H, и -(CH₂)₂-S-S-(CH₂)₂-NH-C(= NH)NH₂. 25. Композиция по п.24, отличающаяся тем, что указанное соединение представляет собой селеноэтилгуанидин формулы

26. Композиция по п. 24, отличающаяся тем, что указанное соединение представляет собой селенопропилгуанидин формулы

27. Композиция по п. 24, отличающаяся тем, что указанное соединение представляет собой гуанидиноэтилдисульфид.

28. Композиция по любому из пп.24-27, отличающаяся тем, что она составлена для орального, ректального, назального, местного, трансбуккального, сублингвального, вагинального, парентерального, внутримышечного, подкожного, внутривенного, ингаляционного или инсуффляционного введения.

29. Композиция по любому из пп.24-28, отличающаяся тем, что она составлена для орального введения, причем указанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из связывающего агента, наполнителя, смазывающего вещества, дезинтегранта, смачивающего агента, инертного растворителя, поверхностно-активного агента, диспергирующего агента, суспендирующего агента, эмульгирующего агента, пищевого масла, вкусового агента и их смесей.

30. Композиция по любому из пп.24-28, отличающаяся тем, что она составлена для местного введения через рот, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из вкусового агента, сахарозы, акации, трагаканта, желатина, глицерина и их смесей.

31. Композиция по любому из пп.24-28, отличающаяся тем, что она составлена для назального введения, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из диспергирующего агента, солюбилизирующего агента, суспензирующего агента или их смесей.

32. Композиция по любому из пп.24-28, отличающаяся тем, что она составлена для введения путем ингаляции, вышеуказанный носитель включает пропеллент.

33. Композиция по п.32, отличающаяся тем, что вышеуказанный пропеллент выбран из группы, состоящей из дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, двуокиси углерода и их смесей.

34. Композиция по любому из пп.24-28, отличающаяся тем, что она составлена для введения путем ингаляции или инсуффляции, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из лактозы, крахмала и их смесей.

35. Композиция по любому из пп.24-28, отличающаяся тем, что она составлена для парентерального введения, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из антиоксиданта, буфера, бактериостатика, суспендирующего агента, уплотняющего агента, физиологического раствора, воды и их смесей.

36. Композиция по любому из пп.24-28, отличающаяся тем, что она составлена для ректального введения, при этом вышеуказанный носитель включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из масла какао, полиэтиленгликоля и их смесей.

37. Композиция по любому из пп.24-36, отличающаяся тем, что она включает ингредиент, выбранный из группы, состоящей из противомикробного агента, иммунодепрессанта, консерванта и их смесей.

38. Композиция по любому из пп.24-37, отличающаяся тем, что она составлена для введения вышеуказанного соединения в дозах от примерно 5 мг до примерно 17,5 г/день.

39. Композиция по п.38, отличающаяся тем, что она составлена для введения вышеуказанного соединения в дозе от примерно 5 мг до примерно 10 г/день.

40. Композиция по п.39, отличающаяся тем, что она составлена для введения вышеуказанного соединения в дозе от примерно 100 мг до примерно 3 г/день.

41. Композиция по любому из пп.24-40, отличающаяся тем, что она предназначена для ингибирования индуцируемой синтазы окиси азота у млекопитающего.

42. Композиция по любому из пп.24-40, отличающаяся тем, что она предназначена для избирательного ингибирования индуцируемой синтазы окиси азота.

43. Композиция по любому из пп.24-40, отличающаяся тем, что она предназначена для лечения состояния, где целесообразно ингибирование фермента синтазы окиси азота.

44. Композиция по п.43, отличающаяся тем, что указанное состояние выбрано из группы, состоящей из циркуляторного шока, синдрома системной воспалительной реакции, терапии цитокинами, терапии цитокининдуцирующими агентами, трансплантации, отторжения трансплантата, местных воспалительных реакций, системного воспаления, аутоиммунных заболеваний, респираторного дистресс-синдрома взрослых, артрита, ревматоидного артрита, diabetes mellitus, илеита, язвенного колита, болезни Крона, астмы, периодонтита, нефроза, хронических демиелинизирующих заболеваний нервной системы, рассеянного склероза, осложнений, связанных со СПИД, болезни Альцгеймера, ишемической болезни сердца, кардиомиопатии, недостаточности надпочечников, гиперхолестеринемии, атеросклероза, болезней костей, связанных с повышенной резорбцией костей, преэклампсии, эклампсии, уремических осложнений, хронической печеночной недостаточности, инсульта, ишемии мозга и рака, синдрома системной воспалительной реакции и циркуляторного шока.

45. Композиция по п.44, отличающаяся тем, что указанное состояние выбрано из группы, состоящей из синдрома системной воспалительной реакции и циркуляторного шока.

Приоритеты по пунктам:
24.03.1995 по пп.1-23;
20.10.1995 по пп.24-25.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16