Трансгенные растения

 

Изобретение относится к генетической инженерии и может быть использовано в селекции растений. Опосредованная Agrobacterium трансформация растения сахарной свеклы, в котором экспрессируется фермент с ср4/epsps-активностью, придает этим растениям устойчивость к обработке гербицидом. 2 с. и 11 з.п. ф-лы, 7 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)

Формула изобретения

1. Способ получения трансгенного растения сахарной свеклы, включая его семена, у которого ПЦР-амплификация с использованием в качестве матрицы его геномной ДНК приводит к амплификации фрагмента ДНК размером 739 пар оснований при использовании пары олигонуклеотидных праймеров с последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 21, заключающийся в том, что осуществляют (а) трансформацию выращенных in vitro семядолей сахарной свеклы с помощью Agrobacterium, содержащих вектор, несущий участок ДНК, кодирующий ср4/epsps, (б) регенерацию ростков в присутствии глифосата, (в) перенос ростков в почву в теплице, (г) обработку проростков глифосатом, (д) визуальную оценку мощности растения и хлороза листьев по балльной шкале от 0 до 9, (е) отбор растений, у которых мощность растения и хлороз листьев оценена в 9 баллов, (ж) размножение отобранных растений с помощью обычных методов выведения сорта.

2. Способ по п.1, в котором ДНК, имеющая нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27, образует часть генома растения.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что ПЦР-амплификация с использованием в качестве матрицы его геномной ДНК приводит к амплификации фрагмента ДНК размером 834 пары оснований при использовании пары олигонуклеотидных праймеров с последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 24.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что ПЦР-амплификация с использованием в качестве матрицы его геномной ДНК, приводит к амплификации фрагмента ДНК размером 1057 пар оснований при использовании пары олигонуклеотидных праймеров с последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 22.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что ПЦР-амплификация с использованием в качестве матрицы его геномной ДНК, приводит к амплификации фрагмента ДНК размером 1224 пары оснований при использовании пары олигонуклеотидных праймеров с последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 25.

6. Способ по п.1, в котором ДНК, имеющая нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, образует часть генома растения.

7. Способ по п.6, где нуклеотидная последовательность замещает последовательности ДНК с большим количеством повторов.

8. Способ по п.6, где части генома, непосредственно связанные с указанной нуклеотидной последовательностью, имеют нуклеотидные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3.

9. Способ по п.7, в котором ДНК, имеющая нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, образует часть генома растения.

10. Способ по п.1, предназначенный для получения семян, задепонированных под регистрационным номером NCIMB 97087006/2.

11. Способ по п.1, где вектор, кодирующий протеин ср4/epsps, представляет собой вектор, содержащий участок ДНК, который имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5.

12. Способ по п.1, где регенерированные ростки анализируют с помощью ПЦР на наличие ДНК, кодирующей ср4/epsps.

13. Способ получения толерантного к глифосату растения сахарной свеклы, включая его потомство, включающий опосредованную трансформацию Agrobacterium с помощью ДНК, обеспечивающей экспрессию ср4/epsps, сообщающего устойчивость к глифосату растениям, при этом геномная ДНК растения лишена как правой, так и левой пограничных последовательностей Т-ДНК в области сайта интеграции.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24