Способ инактивации вируса спид

Изобретение относится к медицине и предназначено для инактивации вируса СПИД в клетках, содержащих вирус. Проводят облучение импульсным светом с частотой следования импульсов 9,4-9,5 Гц, одновременно группой длин волн 516,7; 517,2; 518,2; 636,2 нм, группой длин волн 874,0; 732,6; 403,0 нм. Способ позволяет повысить эффективность инактивации вируса СПИД в клетках, содержащих вирус.

 

Изобретение относится к вирусологии, к средствам лучевой инактивации вирусов.

Ближайшим аналогом предлагаемого способа является способ воздействия на вирус СПИДа, который облучали светом, соответствующего электронным переходам атомов цинка (636,2 нм) с экспозицией 30-60 мин и светом, соответствующего электронным переходам в атомах магния (516,7; 517,2; 518,2 нм) (RU 2097427, 27.11.1997 г.).

Недостатком этого способа является низкая инактивация вируса СПИД.

Цель изобретения - увеличение инактивации вируса СПИДа.

Известно, что ионы металлов могут существенным образом повлиять (дестабилизировать) на упорядоченную структуру РНК. Причем этот эффект будет наиболее выражен при больших концентрациях металлов в молекуле РНК. В работе (2) показано, что высокие концентрации двухвалентных металлов могут приводить к ошибочному спариванию оснований нуклеотидов, создавая тем самым источник ошибок в распространении генетической информации.

Металлы, которые обладают высокой координирующей способностью, проявляют оптимум активирующей способности при низких концентрациях, тогда как слабо координирующие ионы металлов сильно активируют фермент при более низких концентрациях металлов.

В зависимости от концентраций, необходимых для максимальной активации, ионы металлов можно расположить в следующий ряд: Мn>Со>Ni>Zn (2).

Отсюда следует, что марганец играет в этом процессе важнейшую роль. Он более прочно связывается с активируемым центром, которым является фосфатная группа, а также с ингибирующим центром, находящегося, как правило, в ферменте.

Поэтому изменением (вариациями) концентрации ионов марганца можно существенным образом повлиять (вмешаться) на биологический процесс, протекающий с участием РНК. Однако изменить концентрацию марганца биохимическим путем крайне сложно.

Вместе с тем, как показали наши исследования, ингибировать работу РНК можно путем подсветки РНК-вирусов на электронных переходах атомов марганца, а именно на длинах волн: 874,0; 732,6; 403,0 нм.

Подсветка же марганца на указанных длинах волн повысит его активность и тем самым уменьшит активность РНК-вирусов, что приведет к их инактивации.

В этой связи был выполнен специальный эксперимент.

На модулях клеточных лимфобластоидных клеточных линий СЕМ и МТ-4, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) - штамм ВИЧ-1/В RU (острая инфекция), исследована возможность лучевой нейтрализации вируса.

Материалы и методы:

Клетки - клетки МТ-4 выращивали в виде суспензии в среде RPMI 1640 с 15% фетальной сыворотки телят, 100 мкг/мл гентамицина в концентрации 300000 - 500000 клеток в 1 мл. Вирус - Штамм ВИЧ-1/В RU получен из музея штаммов института вирусологии РАМН.

Результаты и обсуждения.

Перед инфицированием чувствительных к ВИЧ-1 клеток вирусный материал облучали светом на линиях магния (516,7; 517,2; 518,2 нм), на линиях цинка (636,2 нм) и линиях марганца (874,0; 732,6 и 403,0 нм) отдельно и в комбинации. Причем облучение вирусного материала производилось не сплошным светом, а импульсным с частотой следования импульсов 9,4-9,5 Гц.

После получения проб вируса монохроматическим светом материал вносили в лунки с клеточными культурами. В качестве положительного контроля использовали необлученный вирус (множественность инфекции 0,1 ед. ТЦД/50 клетка), отрицательного - незараженная клетка.

Инфицированные культуры инкубировали в течение 4-7 суток в атмосфере с 5% СО₂ и 98% влажности при 37°С. Полученные данные показали, что в случае комбинации света, соответствующего электронным переходам атомов магния и цинка снижается образование вирусиндуцированных синцитиев в целом на 65-70%. При этом отмечено заметное снижение уровня наполнения вирусного антигена в культуральной жидкости клеток, зараженных клеток.

Однако когда и комбинация света соответствующего электронным переходам атомов магния и цинка добавили свет, соответствующего электронным переходам атомов магния инактивация вируса повысилась в среднем на 25-30%, что доказывает перспективность заявляемого способа.

ЛИТЕРАТУРА

1. RU 2097427, 27.11.1997 г.

2. Неорганическая биохимия, т.2, изд. Мир, 1978 г.

Способ инактивации вируса СПИД, включающий облучение клеток, содержащих вирус, отличающийся тем, что облучение проводят импульсным светом с частотой следования импульсов 9,4-9,5 Гц, одновременно группой длин волн 516,7; 517,2; 518,2; 636,2 нм, а также группой длин волн 874,0; 732,6; 403,0 нм соответствующих электронным переходам атомов марганца.