Способ диагностики нарушений общего адаптационного процесса новорожденных в первые сутки жизни
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Определяют уровень функциональной активности моноцитов путем постановки спонтанного и стимулированного НСТ-теста. Вычисляют диагностический индекс (Кст.) как отношение показателей стимулированного НСТ-теста к спонтанному. Если Кст. больше либо равен 1,5, судят об адекватности адаптационного процесса новорожденного, если же Кст. меньше 1,5, диагностируют нарушение раннего периода адаптации и истощение функциональных возможностей на уровне моноцитарного звена иммунной системы. Способ дает возможность выявить ранние, нередко доклинические, признаки нарушения гомеостаза и адаптивных процессов в организме новорожденного в первые сутки жизни, что позволяет выбрать своевременную тактику реабилитации или способов иммунокоррекции.
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике.
Описание изобретения
Процесс адаптации новорожденных к новым условиям существования и характер приспособительных реакций ребенка в этот период жизни существенно отражается на его последующем развитии [1]. Исследование функциональной активности моноцитов, как одного из факторов неспецифической резистентности, имеет большое значение для оценки состояния организма и его адаптационных возможностей [2, 3, 5]. Одним из наиболее объективных методов оценки функционального состояния фагоцитов является НСТ-тест. Исследование функциональной активности мононуклеаров крови методом НСТ-теста используется для оценки состояния организма при различных заболеваниях [3, 4, 6]. Однако в доступной литературе мы не встретили данных о применении этой методики в качестве критерия реализации адаптационных возможностей организма новорожденных в первые сутки жизни.
Уровень техники
Аналоги. Аналогом предлагаемого способа является способ прогнозирования нарушений адаптации новорожденных детей на основе скринингового исследования системы гомеостаза женщин в начале III триместра беременности [7]. Однако данный способ является лишь косвенной оценкой состояния новорожденного в период адаптации к внеутробной жизни, трудоемок, т.к. включает в себя определение ряда параметров гомеостаза и применение сложного решающего правила.
Прототип. Прототипом предложенного способа является цитохимическое исследование функционального состояния крови новорожденных в неонатальном периоде [1]. Недостатком данного способа является субъективность микроскопического учета, условность количественной оценки реакций, определяемой путем подсчета гранул, а также трудоемкость исследования, включающего целый ряд методик определения активности внутриклеточных ферментов.
Сущность изобретения
Цель изобретения заключается в разработке способа диагностики нарушений общего адаптационного процесса новорожденного ребенка в первые сутки жизни.
Поставленная цель достигается определением уровня функциональной активности моноцитов периферической крови новорожденного в период ранней адаптации.
Способ осуществляют следующим образом.
В первые часы жизни ребенка осуществляют забор венозной крови в количестве 2 мл в центрифужную пробирку с гепарином (100 ЕД/мл).
Моноциты выделяют из цельной крови, разведенной средой Хенкса в соотношении 1:2. Центрифугируют в градиенте плотности фиколл-верографин (1,077 г/мл) в течение 45 мин при 1500 об/мин.
После центрифугирования на границе раздела растворов образуется кольцо мононуклеаров (лимфоцитов и моноцитов). Полученные клетки дважды отмывают средой Хенкса, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин. Подсчет общего количества клеток проводят в камере Горяева. Из клеточной взвеси готовят контрольные мазки на стекле, фиксируют этиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимзе. Подсчитывают количество нейтрофилов, которое должно составлять в контрольных мазках не более 2% [3].
Для каждой пробы в три центрифужные пробирки помещают объем взвеси, содержащей около 0,5×106 клеток. Одна пробирка служит для постановки спонтанного, другая - стимулированного теста. Третья пробирка используется в качестве контрольной. В пробу со стимулированным тестом добавляют взвесь инактивированной суточной культуры стафилококка в фосфатном буфере, приготовленную с использованием стандарта оптической мутности (108 микробных тел в 1 мл), для исследования способности мононуклеарных фагоцитов восстанавливать НСТ в процессе фагоцитоза.
В пробы со спонтанным и стимулированным тестами добавляют по 0,1 мл свежеприготовленного 0,2% раствора НСТ. Во все пробирки добавляют раствор Хенкса до получения одинаковых объемов. Пробирки помещают в термостат на 2 часа при температуре 37 градусов. После инкубации в пробирки заливают по 5 мл раствора Хенкса и центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин. К осадку добавляют по 0,1 мл этилового спирта, снова центрифугируют 5 мин при тех же условиях. Пробирки высушивают. Последовательно вносят во все пробирки по 0,120 мл 2М раствора КОН и по 0,140 мл органического растворителя диметилсульфоксида (ДМСО). Перемешивают интенсивным пипетированием. Определяют оптическую плотность жидкостей на спектрофотометре при длине волны 540 нм. Результаты выражают в единицах оптической плотности, умноженных на 1000, после вычитания из опытных значений соответствующих показателей контрольной пробы. В качестве критерия общего адаптационного процесса вычисляют коэффициент стимуляции (Кст.) как отношение результата, полученного в стимулированном тесте, к результату спонтанного. Если Кст. больше либо равен 1,5, судят об адекватности адаптационного процесса новорожденного, если же Кст. меньше 1,5, диагностируют нарушение раннего периода адаптации.
Пример I. Ребенок Соколова (история болезни №55941/134), родилась 19.03 2000 г. на 39-40 неделе гестации, с оценкой 6/7 баллов по шкале Апгар. Клинический диагноз при рождении: сочетанная гипоксия, группа риска по ВУИ, гипопластический вариант СЗРП. На 1-е сутки переведена в отделение реанимации и интенсивной терапии новорожденных. Кст. в первые сутки жизни равен 0,9, что свидетельствует о неспособности организма адекватно отвечать на антигенный стимул и истощении резервных возможностей иммунной системы. На 3-и сутки переведена в отделение ранней реабилитации новорожденных. Выписана на 46 сутки жизни с диагнозом: сложный врожденный порок сердца, внутриутробная инфекция (хламидиоз), дисбактериоз кишечника, перинатальная постгипоксическая энцефалопатия.
Пример II. Ребенок Шараев (история болезни №55976/153), родился 28.03.2002 г. доношенным с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Клинический диагноз при рождении: здоров. Кст. в первые сутки жизни равен 2,0, что свидетельствует о выраженной реакции организма на дополнительную антигенную нагрузку и адекватном иммунном ответе. Выписан на 6-е сутки жизни с диагнозом: здоров.
Таким образом, предлагаемый способ дает возможность выявить ранние, нередко, доклинические, признаки нарушения гомеостаза и адаптивных процессов в организме новорожденного в первые сутки жизни. Определение адаптационных возможностей организма новорожденного может оказать врачу неоценимую помощь в выборе своевременной тактики реабилитации или способов иммунокоррекции.
Источники информации
1. Ахмадеева Э.Н., Каюмов Ф.А. Цитохимические исследования клеток крови новорожденных. // Лабораторное дело. - 1991. - №8. - С.59-62.
2. Газиева И.А., Колесников О.Л. Изучение свободнорадикальных процессов для оценки степени угнетения функциональной активности фагоцитов при гестозе // Материалы I конференции иммунологов Урала. - Екатеринбург, 2001. - С.46-48.
3. Мельников В.П. Тест восстановления нитросинего тетразолия мононуклеарными фагоцитами // Лабораторное дело. - 1991. - №8. - С.51-53.
4. Медведев А.Н., Чаленко В.В. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза // Лабораторное дело. - 1991. - №2. - С.19-20.
5. Киселева Е.П., Полевщиков А.В. Метод автоматизированного учета НСТ-теста // Клиническая лабораторная диагностика. - 1994. - №4. - С.27-29.
6. Цибулькин А.П., Арлеевская М.И., Щербатенко Л.А. Определение гепаринзависимой активности моноцитов при ревматоидном артрите. // Лабораторное дело. - 1991. - №8. - С.57-59.
7. Черданцева Г.А., Трофимова Е.А. Способ прогнозирования нарушений адаптации новорожденных детей. RU №2165080 от 10.04.2001.
Способ диагностики нарушений общего адаптационного процесса новорожденных в первые сутки жизни, отличающийся тем, что определяют уровень функциональной активности моноцитов путем постановки спонтанного и стимулированного НСТ-теста, вычисляют диагностический индекс (Кст.) как отношение показателей стимулированного НСТ-теста к спонтанному и, если Кст. больше либо равен 1,5, судят об адекватности адаптационного процесса новорожденного, если же Кст. меньше 1,5, диагностируют нарушение раннего периода адаптации и истощение функциональных возможностей на уровне моноцитарного звена иммунной системы.
