Унифицированный способ количественного определения флавоноидов в траве и экстракционных препаратах очанки
Изобретение относится к области фармации, а именно к унифицированному способу количественного определения суммы флавоноидов в траве трех видов очанок: очанки коротковолосистой, очанки мелкоцветной, очанки Рейтера и экстракционных препаратах очанки коротковолосистой. Способ включает использование комплексообразующего агента - 2% спиртового раствора хлористого алюминия и ионизирующего агента - 8% спиртового раствора ацетата натрия; определение окрашенного комплекса методом дифференциальной спектрофотометрии при λ = 382±2 нм; использование для расчета суммы флавоноидов удельного показателя поглощения Е1% 1см = 357 ГСО цинарозида и серии разведений, индивидуальных для каждого экстракционного препарата. Технический результат: способ позволяет проводить стандартизацию лекарственного сырья и экстракционных препаратов очанки по содержанию действующих веществ (флавоноидов) и может использоваться при разработке нормативно-технической документации. 5 з.п. ф-лы, 8 табл., 1 ил.
Изобретение относиться к области фармации и касается количественного определения суммы флавоноидов в траве различных видов очанок и экстракционных препаратах очанки коротковолосистой.
Растения рода Очанка (о.) - это однолетние, полупаразитные травы сем. Scrophulariaceae, имеющие трудно отличимые морфолого-анатомические признаки. Они используются в народной медицине и гомеопатии для лечения воспалительных и склеротических заболеваний глаз (катаракта, глаукома, конъюнктивит, блефарит), желудочно-кишечного тракта (гепатит, колит, энтероколит), верхних дыхательных путей (бронхит, ангина, пневмония) [Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их использование, семейства Caprifoliaceae - Plantaginaceae. - М.: Наука, 1990, С.139].
В ходе фитохимических исследований установлено, что основными группами действующих веществ травы о. коротковолосистой, о. мелкоцветной и о. Рейтера являются флавоноиды, иридоиды и фенолкарбоновые кислоты. Комплекс флавоноидных веществ этих растений представлен производными флавона - апигенином, лютеолином, цинарозидом [Сухинина Т.В. Фармакогностическое изучение растений рода очанка/Автореф. канд. дис. Пермь, 2002. 20 с.].
Фармакологические исследования экстракционных препаратов очанки показали наличие антимикробной, гипотензивной и противовоспалительной активности, сочетающейся с низкой токсичностью [Сухинина Т.В. Фармакогностическое изучение растений рода очанка/Автореф. канд. дис. Пермь, 2002. 20 с.]. Многолетний опыт использования в народной медицине и современные данные фармакологических исследований открывают перспективы внедрения травы очанки и экстракционных препаратов на ее основе в медицинскую практику.
Однако разработка и промышленный выпуск препаратов травы очанки затруднен из-за возможной фальсификации и использования недоброкачественного сырья, отсутствия способов промежуточного технологического контроля и оценки качества конечных продуктов. Указанные трудности обусловлены отсутствием надежного способа количественного определения действующих веществ.
Анализ патентной и научной литературы показал: прототип способа определения действующих веществ в траве различных видов очанок отсутствует. Об этом, в частности, свидетельствует отсутствие раздела определения действующих веществ в нормативно-технической документации на траву о. Ростковиуса и о. прямой в Германии [Deutschen Arcneimittel Codex, Stuttgart, 1997, A-192].
Известные способы количественного определения флавоноидов в растительных объектах не являются унифицированными и разработаны или только для сырья одного вида растений [Ярцева И.Б., Куркин В.А. Количественное определение суммы флавоноидов в траве одуванчика лекарственного//Фармация, 1996, №4, С.24-26; Самылина И.А., Евдокимова О.В., Кашникова М.В. Использование хлорида алюминия для определения суммы флавоноидов в цветках боярышника//Фармация, 1994, №6, С.42-45; Смирнова Л.П., Первых Л.Н. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бессмертника песчаного//Химико-фармацевтический журнал, 1998, №6, С.35-36], или только для препаратов, полученных на основе растительного сырья [Чемесова И.И., Чубарова С.Л., Саканян Е.И. и др. Спектрофотометрический метод количественной оценки содержания полифенолов в сухом экстракте из надземной части Mellilotus officinalis (L.) Pall. и в его лекарственной форме (таблетках)//Растительные ресурсы, 2000, Вып.1, Т.36, С.72-74; Кабишев К.Э., Саканян Е.И. Количественное определение суммы флавоноидных соединений в интраназальных лекарственных формах препарата ″Оксофил″ с полиэкстрактом из надземной части Oxytropis oxyphilla (Pall.) DC.// Растительные ресурсы, 2002, Вып.4, Т.38, С.120-127]. Использование этих способов для определения суммы флавоноидов в траве и экстракционных препаратах очанки не возможно из-за отличия:
- в химическом составе растений;
- в консистенции и структуре растительного материала;
- в спектральных характеристиках;
- в последовательности выполнения аналитических операций;
- в используемых государственных стандартных образцах (ГСО).
Целью настоящего изобретения является разработка унифицированного способа количественного определения, позволяющего определять сумму флавоноидов (действующих веществ):
- в сырье различных видов очанок;
- в водных извлечениях-настоях (1:10), сухих и жидких (1:2) экстрактах;
- в спиртовых извлечениях - настойках (1:5), сухих и жидких (1:2) экстрактах, субстанции, содержащей комплекс флавоноидов (фракция флавоноидов).
Для решения поставленной цели были решены следующие задачи:
- выбран доступный комплексообразующий реагент, позволяющий спектрально зафиксировать наличие флавоноидов в растениях и растительных препаратах путем образования устойчивого во времени комплексного соединения;
- определен метод спектрального обнаружения флавоноидов с комплексообразующим реагентом;
- выбрана аналитическая длина волны, позволяющая избирательно определять флавоноидные соединения;
- подобран государственный стандартный образец для пересчета суммы флавоноидов и определен его удельный показатель поглощения (Е1% 1см) в условиях способа количественного определения;
- определены оптимальные условия извлечения флавоноидов из сырья (экстрагент; соотношение сырья и экстрагента; время экстракции);
- разработаны оптимальные условия количественного определения суммы флавоноидов в экстракционных препаратах очанки коротковолосистой (рабочая длина волны, навески, разведение);
- проведена метрологическая характеристика способа количественного определения флавоноидов в сырье и экстракционных препаратах.
Способ количественного определения основан на использовании реакции комплексообразования флавоноидов очанки с алюминия хлоридом (AlCl3) в присутствии натрия ацетата (CH3COONa), с последующим количественным определением этого комплекса методом дифференциальной спектрофотометрии. Дифференциальная спектрофотометрия предусматривает использование в качестве контроля испытуемый раствор без реактивов, что позволяет исключить влияние окрашенных и сопутствующих веществ, а также веществ, не образующих комплексов с реактивами. Хлористый алюминий хлорид является дешевым и доступным реагентом и используется в сочетании с ионизирующей добавкой - ацетатом натрия. Одновременное использование комплексообразующих и ионизирующих реагентов вызывает более значительное батохромное смещение полос поглощения флавоноидов очанки по сравнению с использованием только комплексообразующего реагента (Δλ=6 нм), что позволяет вести определение флавоноидного комплекса в длинноволновой части спектра, свободной от поглощения гидроксикоричных кислот.
Для определения метода спектрального обнаружения и аналитической длины волны были изучены УФ-спектры спиртовых извлечений надземной части с корнями (далее травы) трех видов очанок - о. коротковолосистой, о. мелкоцветной и о. Рейтера и государственного стандартного образца (ГСО) цинарозида (ФС 42-3150-95). Установлено, что УФ-спектры исследованных видов очанок совпадают (табл.1), в качестве примера приведены спектры очанки коротковолосиситой (см. чертеж).
Как следует из полученных данных, спектр спиртового извлечения имеет один максимум (328 нм), который незначительно смещается при добавлении в испытуемый раствор хлористого алюминия и ацетата натрия и обусловлен, вероятно, присутствием в изучаемом экстракте гидроксикоричных и ацилхинных кислот, спектр поглощения которых находиться в области 310-330 нм [Бандюкова В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды//Химия природ. соединений, 1983, №2, С.271-273]. Наблюдаемый при этом гипохромный эффект не позволяет использовать метод прямого спектрофотометрирования окрашенного комплекса и данную длину волны в качестве рабочей.
Дифференциальная кривая поглощения (см. чертеж) представляет собой интегрированный спектр наложения комплекса флавоноидных веществ, содержащихся в очанке, имеет всего один максимум 382 нм и перекрывается с длинноволновой полосой ГСО цинарозида в присутствии хлористого алюминия и ацетата натрия. Так как интервал между максимумами дифференциального спектра поглощения и длинноволновой полосы поглощения стандартного образца не превышает половины полуширины полосы поглощения стандартного образца, то погрешность измерения будет не значительной [Ловцева Е.А. Совершенствование способов контроля качества лекарственных средств производных пурина N-гликозидной структуры/Автореф. канд. дис., Пятигорск, 1993. 20 с.]. Это дает возможность использовать λ=382 нм в качестве аналитической, а с учетом измерения на разных приборах значение длин волн может отличаться на ±2 нм (λ=382±2 нм) [Государственная фармакопея СССР, XI изд., М; 1987, Т.1, С.36].
Для изучения возможности использования разработанного способа количественного определения флавоноидов в анализе экстракционных препаратов о. коротковолосистой были изучены их дифференциальные УФ-спектры с хлористым алюминием и ацетатом натрия (табл.2). Как следует из полученных данных, максимумы дифференциальных кривых совпадают, что позволяет использовать λ=382±2 нм в качестве рабочей длины волны в анализе исследованных препаратов.
При разработке оптимальных условий извлечения флавоноидов из сырья использовали воду и этанол различной концентрации. Наиболее полное извлечение определяемых веществ достигалось при экстрагировании 80%-ным этанолом при соотношении сырья и экстрагента 1:80. Время полной экстракции флавоноидов 20 мин. Дальнейшее увеличение времени экстракции нецелесообразно, так как происходит значительное снижение суммы флавоноидов в исследуемых экстрактах. Данные условия извлечения одинаковы для сырья трех видов очанок - о. коротковолосистой, о. мелкоцветной и о. Рейтера. В качестве примера приведены результаты исследования травы очанки коротковолосистой (табл.3).
Для пересчета содержания суммы флавоноидов в траве очанки на цинарозид нами рассчитан (табл.4) удельный показатель поглощения (Е1% 1см) комплексов растворов ГСО цинарозида и с хлористым алюминием и ацетатом натрия при аналитической длине волны 382 нм, который составляет 357,4±3,4. В связи с этим в формулу расчета нами включено теоретическое значение Е1% 1см=357, позволяющее не использовать в методике ГСО цинарозида.
Унифицированный способ количественного определения суммы флавоноидов подтверждается следующими примерами.
Пример 1. Определение суммы флавоноидов в траве о. коротковолосиситой, о. мелкоцветной и о. Рейтера. Аналитическую пробу воздушно-сухого сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито по ГОСТ 214-83 с отверстиями диаметром 2 мм. Около 0,6 г (точная навеска) сырья помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл со шлифом, прибавляют 50 мл 80%-ного этанола. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин, считая с момента закипания экстрагента. Колбу охлаждают до комнатной температуры, извлечение фильтруют через ватный тампон в плоскодонную мерную колбу вместимостью 50 мл и через этот же фильтр доводят объем раствора 80%-ным этанолом до метки. Полученное извлечение фильтруют в плоскодонную колбу через бумажный фильтр (раствор А), первые 10 мл фильтрата отбрасывают. 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, добавляют 1 мл 2%-ного спиртового раствора алюминия хлорида и 1 мл 8%-ного спиртового раствора ацетата натрия, доводят объем раствора до метки 80% этанолом и перемешивают (раствор Б). Спустя 30 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 382 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 1 мл раствора А, доведенного 80%-ным этанолом до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл. Содержание суммы флавоноидов в сухой надземной части с корнями очанки в пересчете на цинарозид вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность исследуемого раствора; m - навеска сырья, г; V - объем раствора А, взятого для разбавления, мл; 50 - объем раствора А, мл; 50 - объем раствора Б, мл; W - потеря в массе при высушивании сырья, %; 357 - удельный показатель поглощения комплекса цинарозида с реактивами при длине волны 382 нм.
Статистическая обработка результатов количественного определения выполнена по общепринятой методике ГФ-XI [Государственная фармакопея СССР, XI изд., M., 1987, 4.1, 336 с.]. Результаты (табл.5) показали, что ошибка единичного определения с достоверной вероятностью 95% находиться в пределах 4,5-5,5%.
Проверка на отсутствие систематической ошибки, путем добавки ГСО цинарозида к навеске сырья, выполнена на траве о. коротковолосистой. Установлено, что систематическая ошибка разработанного способа отсутствует (табл.6).
Пример 2. Определение суммы флавоноидов в настоях (1:10) очанки коротковолосистой. 1 мл настоя помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, добавляют 1 мл 2%-ного спиртового раствора алюминия хлорида и 1 мл 8%-ного спиртового раствора ацетата натрия, доводят объем раствора до метки 80% этанолом и перемешивают (раствор А). Спустя 30 мин измеряют оптическую плотность раствора А на спектрофотометре при длине волны 382 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 1 мл настоя, доведенного 80%-ным этанолом до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл. Содержание суммы флавоноидов в настоях очанки коротковолосистой в пересчете на цинарозид вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность исследуемого раствора; а - навеска настоя, мл; 50 - объем раствора А, мл; 357 - удельный показатель поглощения комплекса цинарозида с реактивами при длине волны 382 нм.
Пример 3. Определение суммы флавоноидов в жидком спиртовом экстракте (1:2) очанки коротковолосистой. 1 мл жидкого спиртового экстракта помещают в плоскодонную мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора 80%-ным этанолом до метки. Полученное разведение фильтруют в плоскодонную колбу через бумажный фильтр (раствор А), первые 10 мл фильтрата отбрасывают. 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, добавляют 1 мл 2%-ного спиртового раствора хлористого алюминия и 1 мл 8%-ного спиртового раствора ацетата натрия, доводят объем раствора до метки 80% этанолом и перемешивают (раствор Б). Спустя 30 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 382 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 1 мл раствора А, доведенного 80%-ным этанолом до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл. Содержание суммы флавоноидов в жидком спиртовом экстракте (1:2) очанки коротковолосистой в пересчете на цинарозид вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность исследуемого раствора; а - навеска сырья, г; V - объем раствора А, взятого для разбавления, мл; 25 - объем раствора А, мл; 50 - объем раствора Б, мл; 357 - удельный показатель поглощения комплекса цинарозида с реактивами при длине волны 382 нм.
Пример 4. Определение суммы флавоноидов в сухом спиртовом и сухом водном экстракте очанки коротковолосистой. Около 0,1 г (точная навеска) сухого спиртового или водного экстракта, помещают в плоскодонную мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют и доводят объем раствора 80%-ным этанолом до метки. Полученное разведение фильтруют в плоскодонную колбу через бумажный фильтр (раствор А), первые 10 мл фильтрата отбрасывают. 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, добавляют 1 мл 2%-ного спиртового раствора хлористого алюминия и 1 мл 8%-ного спиртового раствора ацетата натрия, доводят объем раствора до метки 80% этанолом и перемешивают (раствор Б). Спустя 30 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 382 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 1 мл раствора А, доведенного 80%-ным этанолом до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл. Содержание суммы флавоноидов в сухом спиртовом и водном экстракте очанки коротковолосистой в пересчете на цинарозид вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность исследуемого раствора; а - навеска сырья, г; V - объем раствора А, взятого для разбавления, мл; 25 - объем раствора А, мл; 50 - объем раствора Б, мл; W - потеря в массе при высушивании сухого экстракта, %; 357 - удельный показатель поглощения комплекса цинарозида с реактивами при длине волны 382 нм.
Пример 5. Определение суммы флавоноидов в субстанции, содержащей комплекс флавоноидов очанки коротковолосистой (фракция флавоноидов). Около 0,1 г (точная навеска) субстанции, содержащей сумму флавоноидов, помещают в плоскодонную мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют и доводят объем раствора 80%-ным этанолом до метки. Полученное разведение фильтруют в плоскодонную колбу через бумажный фильтр (раствор А), первые 10 мл фильтрата отбрасывают. 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, добавляют 1 мл 2%-ного спиртового раствора хлористого алюминия и 1 мл 8%-ного спиртового раствора ацетата натрия, доводят объем раствора до метки 80% этанолом и перемешивают (раствор Б). Спустя 30 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 382 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 1 мл раствора А, доведенного 80%-ным этанолом до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл. Содержание суммы флавоноидов в субстанции в пересчете на цинарозид вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность исследуемого раствора; а - навеска субстанции, г; V - объем раствора А, взятого для разбавления, мл; 25 - объем раствора А, мл; 50 - объем раствора Б, мл; W - потеря в массе при высушивании субстанции, %; 357 - удельный показатель поглощения комплекса цинарозида с реактивами при длине волны 382 нм.
Пример 6. Определение суммы флавоноидов в жидком водном экстракте (1:2) очанки коротковолосистой. 1 мл жидкого водного экстракта помещают в плоскодонную мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора 80%-ным этанолом до метки. Полученное разведение фильтруют в плоскодонную колбу через бумажный фильтр (раствор А), первые 10 мл фильтрата отбрасывают, 1 мл раствора А помещают мерную колбу вместимостью 50 мл, добавляют 1 мл 2%-ного спиртового раствора алюминия хлорида и 1 мл 8%-ного спиртового раствора натрия ацетата, доводят объем раствора до метки 80% этанолом и перемешивают (раствор Б). Спустя 30 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 382 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 1 мл раствора А, доведенного 80%-ным этанолом до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл. Содержание суммы флавоноидов в жидком водном экстракте очанки коротковолосистой в пересчете на цинарозид вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность исследуемого раствора; а - навеска жидкого водного экстракта, мл; V - объем раствора А, взятого для разбавления, мл; 25 - объем раствора А, мл; 50 - объем раствора Б, мл; 357 - удельный показатель поглощения комплекса цинарозида с реактивами при длине волны 382 нм.
Статистическая обработка результатов количественного определения суммы флавоноидов в экстракционных препаратах приведена в табл.7. Как следует из полученных данных, ошибка единичного определения с достоверной вероятностью 95% находится в пределах от 0,49 до 2,65%.
Таким образом, способ количественного определения суммы флавоноидов является унифицированным, так как позволяет проводить определение действующих веществ в сырье различных видов очанок и экстракционных препаратов очанки коротковолосистой по единой методике, при этом отличие в анализе заключается только в величине навесок и степени их разведения до фотометрируемого раствора (табл.8).
Разработанный способ может быть использован в фармацевтической и медицинской промышленности для стандартизации сырья трех видов очанок и экстракционных препаратов очанки коротковолосистой по содержанию действующих веществ (флавоноидов), проведения технологического контроля за производством.
Литература
Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их использование, семейства Caprifoliaceae - Plantaginaceae. - M.: Наука, 1990, с.139.
Сухинина Т.В. Фармакогностическое изучение растений рода очанка/Автореф. канд. дис., Пермь, 2002. 20 с.
Deutschen Arcneimittel Codex, Stuttgart, 1997, A-192.
Ярцева И.Б., Куркин В.А. Количественное определение суммы флавоноидов в траве одуванчика лекарственного//Фармация, 1996, №4, с.24-26.
Самылина И.А., Евдокимова О.В. Кашникова М.В. Использование хлорида алюминия для определения суммы флавоноидов в цветках боярышника//Фармация, 1994, №6, С.42-45.
Смирнова Л.П., Первых Л.Н. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бессмертника песчаного//Химико-фармацевтический журнал, 1998, №6, С.35-36.
Чемесова И.И., Чубарова С.Л., Саканян Е.И. и др. Спектрофотометрический метод количественной оценки содержания полифенолов в сухом экстракте из надземной части Mellilotus officinalis (L.) Pall. и в его лекарственной форме (таблетках)//Растительные ресурсы, 2000, Вып.1, Т.36, С.72-74.
Кабишев К.Э., Саканян Е.И. Количественное определение суммы флавоноидных соединений в интраназальных лекарственных формах препарата ″Оксофил″ с полиэкстрактом из надземной части Oxytropis oxyphilla (Pall.) DC.//Растительные ресурсы, 2002, Вып.4, Т.38, С.120-127.
Бандюкова В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды//Химия природ. соединений, 1983, №2, С.271-273.
Ловцева Е.А. Совершенствование способов контроля качества лекарственных средств производных пурина N-гликозидной структуры/ Автореф. канд. дис., Пятигорск, 1993. 20 с.
Государственная фармакопея СССР, XI изд., М., 1987, T.I, 336 с.
| Таблица 1 | |||
| Спектральные характеристики (λmax) извлечений из травы различных видов очанок в УФ-области | |||
| Условия изобретения | Виды очанок | ||
| О. коротковолосистая | О. мелкоцветная | О. Рейтера | |
| 1. Спиртовое извлечение | 328 нм | 328 нм | 328 нм |
| 2. Дифференциальный спектр спиртового извлечения с AlCl3 | 376 нм | 376 нм | 376 нм |
| 3. Дифференциальный спектр спиртового извлечения с AlCl3 и СН3COONa | 382 нм | 382 нм | 382 нм |
| Таблица 2 | |
| Спектральные характеристики дифференциальных УФ-спектров экстракционных препаратов очанки коротковолосистой с хлористым алюминием и ацетатом натрия | |
| Экстракционные препараты | λmax, НМ |
| 1. Настой (1:10) | 382 |
| 2. Сухой водный экстракт | 382 |
| 3. Жидкий водный экстракт (1:2) | 382 |
| 4. Настойка (1:5) | 382 |
| 5. Сухой спиртовый экстракт | 382 |
| 6. Жидкий спиртовый экстракт (1:2) | 382 |
| 7. Субстанция, содержащая комплекс флавоноидов (фракция флавоноидов) | 382 |
| Таблица 3 | |
| Влияние условий экстракции на содержание суммы флавоноидов в траве очанки коротковолосистой | |
| Условия экстракции | Содержание суммы флавоноидов, % |
| Экстрагент: | |
| Вода | 2,6 |
| Этанол, %: | |
| 40 | 3,2 |
| 60 | 3,3 |
| 80 | 3,5 |
| 90 | 3,4 |
| Соотношение сырья и экстрагента (80%-ный этанол): | |
| 1:10 | 2,6 |
| 1:20 | 3,5 |
| 1:40 | 3,8 |
| 1:60 | 4,5 |
| 1:80 | 5.2 |
| 1:100 | 5,1 |
| Время экстракции, мин (80%-ный этанол; соотношение сырья и экстрагента 1:80): | |
| 10 | 4,7 |
| 20 | 5,2 |
| 40 | 5,1 |
| 60 | 4,9 |
| Таблица 4 | |||
| Расчет величины удельного коэффициента поглощения ГСО цинарозида при λ=382 нм | |||
| Концентрация раствора, % | Оптическая плотность | Удельный коэффициент поглощения, Е1% 1см | Среднее значение удельного коэф. поглощ., Е1% 1см |
| 0,000132 | 0,049 | 371,21 | 357±3,4 |
| 0,000264 | 0,093 | 352,27 | |
| 0,000393 | 0,140 | 356,23 | |
| 0,000528 | 0,180 | 340,91 | |
| 0,000659 | 0,232 | 351,52 | |
| 0,000792 | 0,300 | 378,78 | |
| 0,000924 | 0,349 | 378,79 | |
| 0,001056 | 0,367 | 348,48 | |
| 0,001188 | 0,421 | 354,98 | |
| 0,00132 | 0,451 | 341,75 |
| Таблица 5 | |||||||
| Метрологическая характеристика способа количественного определения суммы флавоноидов в траве трех видов Очанок | |||||||
| Исследуемые виды | Статистические параметры | ||||||
| f | X | Sx | P, % | t | Δx | E, % | |
| О. коротковолосистая | 9 | 4,98 | 0,1195 | 95 | 2,26 | 0,27 | ±5,5 |
| О. мелкоцветная | 9 | 4,69 | 0,0929 | 95 | 2,26 | 0,21 | ±4,5 |
| О. Рейтера | 9 | 3,12 | 0,0708 | 95 | 2,26 | 0,16 | ±5,1 |
| Таблица 6 | ||||
| Результаты количественного определения суммы флавоноидов в траве очанки коротковолосистой с использованием метода добавки ГСО цинарозида | ||||
| Содержание суммы флавоноидов 1,0 г сырья, мг | Добавлено ГСО цинарозида, мг | Сумма флавоноидов | Относительная ошибка, % | |
| Найдено, мг | Вычислено, мг | |||
| 49,8 | 3,7 (в сырье) | 52,3 | 53,5 | -2,2 |
| 49,8 | 3,7 (в сырье) | 52,9 | 53,5 | -1,1 |
| 50,2 | 3,7 (в сырье) | 52,2 | 53,9 | +3,2 |
| 51,5 | 3,7 (в извлечение) | 56,1 | 55,2 | -1,6 |
| 61,3 | 3,7 (в извлечение) | 66,7 | 65,0 | -2,6 |
| 61,3 | 3,7 (в извлечение) | 62,6 | 0,9 | +3,7 |
| Таблица 7 | |||||||
| Метрологическая характеристика способа количественного определения суммы флавоноидов в экстракционных препаратах очанки коротковолосистой | |||||||
| Экстракционные препараты | Статистические параметры | ||||||
| f | x | Sx | P, % | t | Δх | Е, % | |
| 1. Настой (1:10) | 4 | 0,15 | 0,001549 | 95 | 2,57 | 0,00398 | ±2,65 |
| 2. Жидкий водный экстракт (1:2) | 4 | 0,51 | 0,003162 | 95 | 2,57 | 0,008126 | ±1,59 |
| 3. Настойка (1:5) | 4 | 0,65 | 0,003878 | 95 | 2,57 | 0,00997 | ±1,53 |
| 4. Жидкий спиртовый экстракт (1:2) | 4 | 2,85 | 0,005711 | 95 | 2,57 | 0,01468 | ±0,52 |
| 5. Сухой водный экстракт | 4 | 12,80 | 0,04472 | 95 | 2,57 | 0,11494 | ±0,90 |
| 6. Сухой спиртовый экстракт | 4 | 19,82 | 0,03748 | 95 | 2,57 | 0,09634 | ±0,49 |
| 7. Субстанция, содержащая комплекс флавоноидов (сумма флавоноидов) | 4 | 26,00 | 0,1789 | 95 | 2,57 | 0,4598 | ±1,77 |
1. Унифицированный способ количественного определения флавоноидов в траве и экстракционных препаратах очанки, характеризующийся тем, что в аналитической реакции используют совместно комплексообразующий агент - 2%-ный спиртовый раствор алюминия хлорида и ионизирующий агент - 8%-ный спиртовый раствор натрия ацетата; оптическую плотность окрашенного комплекса определяют методом дифференциальной спектрофотометрии при λ=(382±2) нм; для расчета суммы флавоноидов используют удельный показатель поглощения Е1% 1см = 357 государственного стандартного образца цинарозида.
2. Унифицированный способ количественного определения по п.1, отличающийся тем, что для определения суммы флавоноидов в траве очанки коротковолосистой, очанки мелкоцветной и очанки Рейтера берут 0,6 г измельченного сырья и экстрагируют 80%-ным этиловым спиртом, в соотношении сырье : экстрагент 1:80 в течение 20 мин; разводят исходное извлечение до соотношения навеска : спектрофотометрируемый раствор 0,6:2500.
3. Унифицированный способ количественного определения по п.1, отличающийся тем, что для определения суммы флавоноидов в настоях очанки коротковолосистой берут навеску 1 мл и разводят ее до соотношения навеска : спектрофотометрируемый раствор 1:50.
4. Унифицированный способ количественного определения по п.1, отличающийся тем, что для определения суммы флавоноидов в жидком спиртовом экстракте очанки коротковолосистой берут навеску 1 мл и разводят ее до соотношения навеска : спектрофотометрируемый раствор 1:2500.
5. Унифицированный способ количественного определения по п.1, отличающийся тем, что для определения суммы флавоноидов в сухом спиртовом и сухом водном экстрактах в субстанции, содержащей комплекс флавоноидов, берут навеску 0,1 г и разводят ее до соотношения навеска : спектрофотометрируемый раствор 0,1:1250.
6. Унифицированный способ количественного определения по п.1, отличающийся тем, что для определения суммы флавоноидов в жидком водном экстракте берут навеску 1 мл и разводят ее до соотношения навеска : спектрофотометрируемый раствор 1:1250.
