Способ моделирования острого холецистита у собак

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к моделированию острого холецистита у собак. Для чего на первом этапе проводят лапаротомию. Далее между листками печеночно-дуоденальной связки около пузырного протока вводят 1 мл стерильного скипидара и послойно ушивают рану. Затем на втором этапе через 5-7 суток проводят релапаротомию и производят инфицирование застойной желчи 1 мл 1 млрд. взвеси агаровой культуры штамма Escherichia coli ГИСК №280, продуцирующего LT - термолабильный энтеротоксин. Потом также послойно ушивают рану наглухо. Способ обеспечивает адекватное воспроизведение модели острого холецистита с вовлечением шейки желчного пузыря. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, в частности патологической анатомии, может быть использовано в эксперименте для моделирования острого холецистита с вовлечением шеечной области у собак.

Известны методы моделирования острого холецистита, основу которых составляет привнесение в просвет желчного пузыря патогенных микроорганизмов и (или) инородных тел. В начале опыта в стенке желчного пузыря вызывают дегенеративные изменения путем наложения на правый блуждающий нерв лигатуры, пропитанной скипидаром. При этом нарушается пассаж пузырной желчи. Затем в просвет желчного пузыря вводится аутокаловая взвесь (В.А.Иванов, М.Н.Молоденков. Нейродистрофические поражения внутренних органов при хроническом раздражении вегетативной нервной системы. - М.: Медицина, 1964). Другие авторы застой желчи в желчном пузыре достигают путем лигирования пузырного протока, а последующее инфицирование желчи патогенной культурой ведет к острому холециститу (Н.М.Бондаренко, Н.З.Слинченко, В.И.Савич, Морфологические изменения в стенках внепеченочных желчных протоков при экспериментальном остром холецистите // Клиническая медицина, 1977. - №2. - С.50-53).

Шевченко B.C., (1974) острый холецистит в эксперименте вызывал путем перевязки пузырного протока, введения в просвет желчного пузыря стерильного речного песка и 2 млрд. взвеси суточной агаровой культуры белого стафилококка №209 (С.А.Шалимов, А.П.Радзиховский, Л.В.Кейсевич. Руководство по экспериментальной хирургии. - М.: Медицина, 1989). Данный способ взят за прототип.

Предложенные методы недостаточно адекватны острому холециститу, развивающемуся у человека. Между тем, на современном этапе в этиологии холецистита имеет первостепенное значение патогенная культура Escherichia coil (B.A.Черкасов, Н.Зубарева, П.Я.Сандаков, Э.С.Горвиц. Микробиологические аспекты хирургической патологии билиарной системы. // Вестник хирургии им. Грекова, 2003. - №2. - С.109-113). Исходя из этого этиологические факторы и патогенетические механизмы, наблюдаемые у больных, не учитываются. Кроме этого ранее предложенные методы экспериментального холецистита не предполагают обязательное вовлечение в воспалительный процесс шейки желчного пузыря.

Технический результат - получение адекватной модели острого холецистита с вовлечением шейки желчного пузыря.

Модель острого холецистита разработана на 20 беспородных собаках обоего пола массой 7-15 кг, в том числе 5 животных составили контрольную группу. Животные содержались в виварии в соответствии с «Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических помещений (вивариев), утвержденными МЗ СССР 06.07.1973 г., и приказом МЗ СССР №163 от 10.03.1966 г. Работа на собаках выполнялась в соответствии с принципами гуманного обращения с подопытными животными, утвержденными приказом МЗ СССР №755 от 12.08.1977 и №701 от 27.07.1978.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. На начальном этапе инициируют воспаление в шеечной области органа с помощью инъекции 1 мл скипидара между листками печеночно-дуоденальной связки около пузырного протока. Инъекция скипидара вызывает альтерацию протока и шейки желчного пузыря. Вслед за альтерацией в стенке (шейка, тело, дно) органа развивается фаза экссудации. На 5-7-е сутки начинают преобладать явления пролиферации, что завершается формированием фиброза в стенке желчного пузыря. Асептическое воспаление в шеечной области органа ведет к нарушению оттока желчи в дистальные желчевыводящие пути. На 2-3-е сутки опыта с помощью ультрасонографии (УЗИ аппарат Aloka, модель ECHO CAMERA SD-500 с конвексным электронным датчиком частотой 3,5 MHz) гепатобилиарной зоны удается обнаружить утолщенную (4±1,0 мм) стенку шейки желчного пузыря в виде однородной гиперэхогенной структуры. У контрольных животных толщина стенки желчного пузыря в данной области была 2,5±1,7 мм (р<0,05).

На втором этапе вводят в застойную желчь 1 мл 1 млрд. взвеси агаровой культуры штамма Escherichia coli ГИСК №280, продуцирующего ЛТ-термолабильный энтеротоксин, путем прокола стенки желчного пузыря в области дна. Это воспроизводит картину острого холецистита. При этом место пункции затягивают в серозный кисетный шов, наложенный мононитью «пролен» №1 на атравматической игле. Выбор штамма бактерий Escherichia coli ГИСК №280, продуцирующего LT-термолабильный энтеротоксин обусловлен наличием у данной разновидности кишечной палочки тропности к однослойному призматическому эпителию верхних отделов желудочно-кишечного тракта (И.М.Салахов. Особенности взаимодействия термолабильного энтеротоксина кишечной палочки с кишечным эпителием // Вопросы теоретической и практической медицины, Уфа. - 1990).

Развернутая картина острого холецистита возникает через 12 часов после введения патогенной культуры. У животных отмечалась адинамия, жажда, отказ от еды, гипертермия, вздутие живота, вынужденное положение из-за болевого синдрома. Гибель животных от деструктивного холецистита наступает на 2-3-е сутки после заражения. Контроль адекватности развития холецистита осуществляется путем наблюдения за животными, прижизненного динамического ультразвукового исследования гепатобилиарной зоны. После выведения из опыта или гибели собаки от деструктивного холецистита осуществляется аутопсия, когда желчный пузырь подвергается тщательному исследованию. При ультразвуковом исследовании стенка желчного пузыря (шейка, тело, дно) выявляется в виде трехслойной структуры толщиной в 5-6 мм с гиперэхогенным наружным и внутренним слоями. Между наружным и внутренним гиперэхогенными слоями стенки органа выявлялась гипоэхогенная прослойка. Макроскопически желчный пузырь увеличен в размерах, напряжен, шейка органа уплотнена, утолщена до 4 мм; при этом толщина стенки желчного пузыря в области дна и тела составляет около 2 мм. Серозная оболочка тусклая с просвечивающимися расширенными кровеносными сосудами, очаговыми субсерозными кровоизлияниями. Слизистая оболочка всюду сглажена с желтоватым оттенком. Кусочки ткани желчного пузыря для гистологического исследования выбирались по определенной схеме. Материал фиксировался в 10% растворе нейтрального формалина. Срезы органа окрашивались гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону, трехцветной окраской по Малори, импрегнировались солями серебра по Жухину, проводилась ШИК-реакция.

Микроскопическое исследование дополнялось морфометрической оценкой состояния артериол и венул различных отделов желчного пузыря с использованием окуляра-микрометра MOB - 1-16 (Тимофеев И.В., Шанин Ю.Н., Рогачев М.В., Медведев Ю.А. Патология лечения. Руководство для врачей. СПб., Северо-Запад, 1999). Состояние кровенаполнения определялось индексом Керногана, равного отношению диаметра просвета артериолы или венулы к толщине ее стенки (Есипова И.К. Патологическая анатомия легких. М., 1976. - С.98-100).

В области шейки желчного пузыря выявлено разрастание соединительной ткани в подслизистом и мышечном слоях, изъязвление атрофичной слизистой оболочки, обнажение ретикулярной стромы на фоне диффузной лейкоцитарной инфильтрации всех слоев стенки органа. В просвете шейки желчного пузыря, пузырного протока обнаружено значительное количество ШИК-положительной гомогенной массы, видимо, за счет повышенной активности бокаловидных клеток шеечных желез в ответ на хроническое воспаление. Подобные патоморфологические изменения также выявлены у дна и тела желчного пузыря.

Морфометрическое исследование венул различных отделов желчного пузыря с оценкой индекса Керногана выявило достоверное (р<0,05) венозное полнокровие преимущественно в шеечной области (шейка - 10,3±1,8; тело - 9,1±1,4; дно - 8,3±1,0), по сравнению с контрольными значениями (шейка - 5,4±1,6; тело - 6,0±1,4; дно - 6,3±2,2) (табл.).

Применение предлагаемого способа позволяет получить в эксперименте на собаках модель острого холецистита с обязательным вовлечением в воспалительный процесс шейки органа. Модель острого холецистита пригодна для изучения характера клинико-морфологических изменений во всех отделах желчного пузыря, включая тело и дно органа.

Острый холецистит с вовлечением дна, тела и шейки желчного пузыря отмечен у 12 собак, что свидетельствует о высокой (80%) воспроизводимости метода.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующим примером.

Собака №3. Под наркозом выполнена верхнесрединная лапаротомия, между листками печеночно-дуоденальной связки ближе к пузырному протоку введен 1 мл стерильного скипидара. Рана ушита наглухо. Спустя 6 суток выполнена релапаротомия. Пунктирован желчный пузырь в области дна, в просвет введен 1 мл 1 млрд. взвеси агаровой культуры Escherichia coli ГИСК №280. Место пункции затянуто в серозный кисетный шов, наложенный мононитью пролен №1 на атравматической игле. Послеоперационная рана ушита наглухо. Спустя 3 суток животное выведено из эксперимента.

При патологоанатомическом исследовании желчный пузырь увеличен, напряжен, шейка органа уплотнена, толщиной 4 мм. Серозная оболочка тусклая с очаговыми плоскостными субсерозными кровоизлияниями. Слизистая оболочка сглажена, местами отсутствует.

При комплексом гистологическом исследовании в области шейки желчного пузыря выявлено разрастание соединительной ткани в подслизистом и мышечном слоях, изъязвление слизистой оболочки, диффузная лейкоцитарная инфильтрация всех слоев стенки органа. В просвете шейки, пузырного протока, меньше в других отделах желчного пузыря выявлено скопление ШИК-положительной гомогенной массы.

Способ моделирования острого холецистита, включающий лапаротомию, введение в просвет желчного пузыря патогенной флоры, послойное ушивание раны, отличающийся тем, что его вызывают последовательно в два этапа, при этом на первом этапе между листками печеночно-дуоденальной связки около пузырного протока вводят 1 мл стерильного скипидара, а на втором этапе через 5-7 сут производят инфицирование застойной желчи 1 мл 1 млрд. взвеси агаровой культуры штамма Escherichia coli ГИСК №280, продуцирующего LT-термолабильный энтеротоксин.