Способ подготовки спермы для внутриматочной инсеминации

Изобретение относится к области медицины, в частности к урологии, андрологии, гинекологии, и касается подготовки спермы для внутриматочной инсеминации. Для этого осуществляют отбор спермы. Добавляют к ней физиологический раствор и центрифугируют дважды по 10 минут при 1500 оборотах в минуту. В полученную массу сперматозоидов вводят перфторан в соотношении 1:3, выдерживают в течение 3-5 минут и вводят полученную смесь в полость матки. Способ обеспечивает увеличение подвижности и дыхательной способности сперматозоидов в сперме мужчин, страдающих азооспермией, и, как следствие, повышает вероятность наступления беременности после внутриматочной инсеминации спермы. 1 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к урологии, андрологии, гинекологии, и может быть использовано для повышения вероятности наступления беременности при внутриматочной инсеминации.

Проблема бесплодия - важная составляющая часть современной медицины. Это не только медицинская, но и социальная проблема.

Известно, что если частота бесплодных браков достигает или превышает критический уровень 15%, то проблема бесплодия в этом случае приобретает государственное значение. Согласно данным эпидемиологических исследований частота бесплодных пар в настоящее время колеблется до 25%, а в ряде регионов Российской Федерации имеет тенденцию к увеличению. Поэтому лечение бесплодия следует рассматривать как резерв рождения желанных детей и перспективного увеличения репродуктивного потенциала населения РФ.

Таким образом, бесплодие имеет значение не только для конкретных индивидуумов, но и оказывает влияние на общество в целом, снижая социальную и профессиональную активность этой группы населения.

Последние десятилетия XX столетия характеризуются значительными достижениями в области диагностики различных форм бесплодия. Наименее решённый аспект в проблеме бесплодного брака является лечение различных форм мужского бесплодия.

Методы вспомогательных репродуктивных технологий и их модификации не всегда позволяют решить проблему отцовства при олигозооспермии, астенозооспермии и т.д. К примеру, вероятность беременности после инсеминации составляет 10-15%. На сегодняшний день нет четкого, научно обоснованного алгоритма, раскрывающего этиологию, патогенез различных нарушений сперматогенеза и дающего эффективные рекомендации по диагностике и лечению различных форм мужского бесплодия.

Следовательно, дальнейшие перспективы в вопросах восстановления и сохранения репродуктивной функции человека должны характеризоваться фундаментальными исследованиями, позволяющими оценить механизмы процессов овуляции, сперматогенеза, оплодотворения, имплантации яйцеклетки и эмбриона (знание вышеуказанных механизмов обусловят эффективное проведение целого ряда профилактических и лечебных мероприятий, направленных на восстановление и сохранение репродуктивной функции), разработкой новых медицинских технологий, методов вспомогательной репродукции, новых препаратов и схем стимуляции овуляции и сперматогенеза, совершенствование методов организации лечебного процесса.

Известен способ повышения оплодотворяющей способности спермы [Заявка на изобретение №2000119029, МПК А61D 19/02; Деряженцев В.И., Бортникова А.М., Шлыгин А.Н., Шейко Е.И., заключающийся введением в среду биологически активного вещества (БАВ) - синтетического аналога простагландина F2α-натриевой соли клопростенола в концентрации 200 мкг на 100 мл разбавленной спермы быков.

Недостатком способа является то, что синтетический аналог простагландина F2α-натриевой соли клопростенола обладает способностью проникать через неповрежденную кожу, в связи с чем следует соблюдать осторожность в работе с препаратом, особенно женщинам детородного возраста и астматикам. Простагландины F2 альфа могут вызывать бронхиоспазм у людей.

Способ ограничен в применении и не позволяет его использование при астенозооспермии.

Известен способ улучшения качества спермы при патоспермии в программе экстракорпорального оплодотворения [Патент RU №2205047, М. кл. А61N 5/067; Гаврилов Ю.А., Кузьмичев Л.Н., Леонов Б.В., Левчук Т.Н., БИПМ №2205047, МПК A61N 5/067, БИМП №15, 27.05.03, с.353], заключающийся в том, что больному бесплодием проводят в течение двух недель: 7-10 процедур лазерной стимуляции в импульсном режиме предстательной железы, лазерную стимуляцию проводят путем установления датчиков одновременно на промежность и надлобковую область с частотой 0,6 кГц, мощностью 3,5 Вт, длительностью 8-10 минут, и яичек с частотой 0,3 кГц, мощностью 1,5 Вт, длительностью 7-9 минут, 5-7 процедур стимулирующего массажа простаты. Назначают: аминокислотный хелат цинка по 22 мг и селен по 200 мкг 2 раза в сутки, пурегон по 50 ME внутримышечно ежедневно в течение месяца.

Недостатком способа является то, что лазеротерапия имеет противопоказания при острых воспалительных процессах, злокачественных новообразованиях и туберкулезе. Кроме того, назначение пурегона противопоказано при выраженных нарушениях функции печени и/или почек. Противопоказаниями хелата цинка являются: острый гломерулонефрит, обострение язвенной болезни, брадикардия. Способ ограничен в применении и не позволяет его использование при астенозооспермии.

Известен способ подготовки спермы к внутриматочной инсеминации, включающий забор спермы, подготовку к оплодотворению по методике «swim up», заключающейся в отмывании сперматозоидов от семенной плазмы (семенная плазма содержит вещества, подавляющие активность сперматозоидов) в физиологическом растворе путем двукратного центрифугирования по 10 минут при 1500 оборотах в минуту.

Проводят искусственную инсеминацию спермой мужа, которую вводят во влагалище женщины без полового акта. В результате весь объем спермы попадает в область зева шейки матки, а не его незначительная часть, как это происходит при половом акте. Соответственно, в несколько раз повышается вероятность зачатия. В день овуляции обработанная и сконцентрированная сперма мужа в питательной среде через шейку матки вводится в полость матки.

Если после 6-ой попытки беременность не наступила, то переходят к следующему методу оплодотворения.

Процедура внутриматочной инсеминации безболезненна, так как сперма вводится с помощью специального катетера с очень маленьким диаметром, который беспрепятственно проходит через канал шейки матки. Продолжительность внутриматочной инсеминации занимает около 2 минут. После выполнения процедуры женщина находится в горизонтальном положении в течение 20-30 минут [Бесплодный брак. Методы вспомогательных репродуктивных технологий. Руководство для врачей под редакцией В.И.Кулакова М., Геотар медиа 2005 год, стр.441-444].

Недостатком способа является то, что эффективность способа составляет всего 10-15%, а также удовлетворительное качество спермы - количество подвижных сперматозоидов должно составлять более 10 млн. на инсеминацию. Способ нельзя применять при астенозооспермии - патологическом снижении количества подвижных сперматозоидов.

ЗАДАЧА ДАННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ: разработка возможности применения внутриматочной инсеминации при астенозооспермии - снижении количества подвижных сперматозоидов путем улучшения качества спермы за счет увеличения подвижности сперматозоидов и их дыхательной способности, что позволяет увеличить вероятность наступления беременности после внутриматочной инсеминации.

Поставленная задача достигается тем, что проводят подготовку спермы для внутриматочной инсеминации путем забора спермы, добавления физиологического раствора и двухкратного центрифугирования смеси по 10 минут при 1500 оборотах в минуту. После центрифугирования в полученную массу сперматозоидов вводят перфторан в соотношение 1:3, выдерживают в течение 3-5 минут, после чего вводят в полость матки.

НОВИЗНА СПОСОБА:

- После центрифугирования полученную массу сперматозоидов смешивают с перфтораном для улучшения качества спермы: увеличения активности живых сперматозоидов и их дыхательной способности.

- Выдерживают в течение 3-5 мин, что обеспечивает более полное взаимодействие сперматозоидов с перфтораном, и вводят полученную смесь в полость матки.

Нами впервые перфторан был применен для лечения секреторной формы мужского бесплодия. При смешивании перфторана и спермы отмечено улучшение ее качественных показателей, получен новый технический результат: увеличение числа подвижных сперматозоидов в эякуляте, увеличение дыхательной способности сперматозоидов, а следовательно, оплодотворяющей способности, резистентности, увеличение расчетного показателя Фарриса, что позволяет увеличить количество оплодотворений на 60-70 %.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить вероятность наступления беременности после внутриматочной инсеминации путем улучшения качества спермы, увеличения двигательной активности сперматозоидов, что делает его применимым при астенозооспермии - патологическом снижении количества подвижных сперматозоидов.

Перфторан - перфторуглеродное соединение - эмульсия-кровезаменитель, обладающий газотранспортной функцией, улучшающий газообмен и метаболизм на уровне тканей, повышающий кислородный транспорт крови, обладающий мембраностабилизирующей функцией, восстанавливающий центральную гемодинамику, обладающий протекторным действием на миокард и блокирующий медленно входящие токи. Обладает сорбционными, диуретическими свойствами, улучшает динамику кровотока и переферическую микроциркуляцию крови. Кислородная емкость перфторана в 3 раза выше кислородной емкости цельной крови (Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Иваницкий Г.Р., Пущино; 1999; 1: с.225.; Местное применение перфторана в лечении больных распространенным гнойным перитонитом. Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино; 2001, с.137-141; Биофизические основы создания перфторуглеродных сред и газотранспортных кровезаменителей (обзор) / Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино; 2001, с.44-48).

Показания: применяется в качестве кровезаменителя с газотранспортной функцией при шоковых состояниях, больших кровопотерях, множественных травмах, ожогах больших поверхностей тела, циррозах печени, множественных скелетных травмах, отравлениях угарным газом, комбинированных поражениях, перитонитах, состояниях клинической смерти, а также в трансплантологии при пересадке органов.

Применение перфторана с целью улучшения качества спермы, повышения жизнеспособности и активности сперматозоидов для повышения эффективности оплодотворения яйцеклетки ранее не использовалось.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ.

Подготовка спермы.

Необходимо сексуальное воздержание от 2 до 6 дней (но не более 6-ти дней).

Перед сдачей спермы нужно, чтобы мужчина помочился для прочистки уретры.

Половой орган и руки должны быть чистыми.

Путем мастурбации сперма собирается в специальный флакон и через 20-30 минут после разжижения начинается её подготовка по следующей методике.

- Отмывание сперматозоидов от семенной плазмы потому, что семенная плазма содержит вещества, подавляющие активность сперматозоидов. Для чего в сперму добавляют физиологический раствор и проводят двукратное центрифугирование по 10 минут при 1500 оборотах в минуту. Не активные сперматозоиды, семенная плазма, клеточные отбросы при этом оседают, а активные сперматозоиды поднимаются наверх.

- Забор сперматозоидов из пробирки проводят лабораторной пипеткой и смешивают с перфтораном в соотношении 3 части перфторана и 1 часть массы сперматозоидов.

- Выдерживают обработанную сперму в течение 3-5 минут.

Проводят процедуру инсеминации на обычном гинекологическом кресле по общепринятой технологии.

В день овуляции (стимулированный или натуральный цикл) обработанная и сконцентрированная сперма мужа через шейку матки вводится в полость матки. Процедура внутриматочной инсеминации безболезненна, так как сперма вводится с помощью специального катетера с очень маленьким диаметром, который беспрепятственно проходит через канал шейки матки.

Продолжительность внутриматочной инсеминации занимает около 2 минут. После выполнения процедуры женщина находится в горизонтальном положении в течение 20-30 минут.

Если после 6-ой попытки беременность не наступила, то переходят к другим методам оплодотворения.

При использовании спермы мужа этот способ эффективен только тогда, когда сперма отвечает определенным качественным показателям.

Если в сперме число подвижных сперматозоидов снижено, что бывает при астенозооспермии, то это не позволяет рассчитывать на возможность оплодотворения естественным путем или путем внутриматочной инсеминации и требуется улучшить качество спермы, чтобы повысить вероятность оплодотворения. Женщина при этом должна быть здорова.

Нами проведено обследование 11 бесплодных пар, проживших в браке от 3 до 12 лет. Причина бесплодия во всех случаях - астенозооспермия. Проводимая ранее процедура внутриматочной инсеминации была безуспешной.

Проведено лечение предложенным способом. Оплодотворение и развитие беременности наступило у 7 пар. В течение 1-4 попыток от начала лечения.

Таблица
Показатели спермограммы
До введения перфторана	После введения перфторана
	Соотношение количества массы сперматозоидов к перфторану
1:1	1:2	1:3	1:4
Нормокинезис 32%	39%	46%	62%	62%
Нормокинезис 26%	32%	41%	56%	56%
Нормокинезис 18%	24%	29%	48%	48%

Как видно из результатов таблицы оптимальным является введение перфторана в соотношении 1:3, так как при данном разведении максимально увеличивается количество активно подвижных сперматозоидов. При более высоком разведении количество активно подвижных сперматозоидов остается неизменным.

Пример 1. Семейная пара В., 25 и 33 лет. Живут в браке 8 лет. Брак бесплодный. При обследовании у гинеколога - жена здорова. Муж наблюдается у врача-уролога по поводу бесплодия в браке в течение 5 лет. В анамнезе - хронический простатит, эпидидимит. По данному поводу принимает лечение в настоящее время.

При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 69 млн. (в норме - более 40 млн.). Живых - 52% (норма - 89-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 42% (норма - более 80%). Дыхательная способность сперматозоидов - 11 минут (норма 23-75 минут). Показатель Фарриса - 28,9.

Заключение: значительное снижение двигательной активности сперматозоидов.

Было принято решение о проведении внутриматочной инсеминации предложенным способом.

Подготовку спермы для внутриматочной инсеминации проводили путем забора спермы, отделения сперматозоидов от семенной жидкости при разведении физраствором и центрифугировании. Отмытые сперматозоиды смешивали с перфтораном в соотношении 1:3, выдерживали в течение 5 минут, полученную смесь вводили в полость матки. Также провели исследование подготовленной и обработанной перфтораном спермы: количество сперматозоидов - 69 млн. Живых - 52%. Нормокинезис - 77%. Дыхательная способность сперматозоидов - 42 минуты (норма 23-75 минут). Показатель Фарриса - 53,1.

Через 18 дней после процедуры инсеминации супруге пациента проведен тест на беременность. Получен положительный результат.

Пример 2. Семейная пара Р., 32 и 33 лет. Живут в браке 9 лет. Брак бесплодный. При обследовании у гинеколога - жена здорова. Муж наблюдается у врача - уролога по поводу хронического простатита.

При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 86 млн. (в норме - более 40 млн.). Живых - 68% (норма - 89-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 44% (норма - более 80%). Дыхательная способность сперматозоидов - 17 минут (норма 23-75 минут). Показатель Фарриса - 37,8.

Заключение: значительное снижение двигательной активности сперматозоидов.

Было принято решение о проведении внутриматочной инсеминации.

Подготовку спермы для внутриматочной инсеминации проводили путем забора спермы, отделения сперматозоидов от семенной жидкости при разведении физраствором и центрифугировании. Отмытые сперматозоиды смешивали с перфтораном в соотношении 1:3, выдерживали в течение 3 минут, полученную смесь вводили в полость матки. Также провели исследование подготовленной и обработанной перфтораном спермы: количество сперматозоидов - 86 млн. Живых - 68%. Нормокинезис - 79%. Дыхательная способность сперматозоидов - 29 минут. Показатель Фарриса - 67,9.

Через 18 дней после процедуры инсеминации супруге пациента проведен тест на беременность. Получен положительный результат.

Пример 3. Семейная пара И., 29 и 36 лет. Живут в браке 12 лет. Брак бесплодный. При обследовании у гинеколога - жена здорова. Муж наблюдается у врача - уролога.

В анамнезе - перенес смешанный (микст-инфекцию) уреаплазменно-хламидийно-трихомонадный уретрит 7 лет назад, который осложнился орхоэпидидимитом. По данному поводу принимал лечение, которое не закончил.

При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 160 млн. (в норме - более 40 млн.). Живых - 56% (норма - 80-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 32% (норма - более 80%). Дыхательная способность сперматозоидов - 10 минут (норма 23-75 минут). Показатель Фарриса - 51,2. Исследование подготовленной и обработанной перфтораном спермы: количество сперматозоидов - 160 млн. Живых - 56%. Нормокинезис - 79%. Дыхательная способность сперматозоидов - 29 минут. Показатель Фарриса - 126,4.

Заключение: значительное снижение двигательной активности сперматозоидов.

Было принято решение о проведении внутриматочной инсеминации.

Подготовку спермы для внутриматочной инсеминации проводили путем забора спермы, отделения сперматозоидов от семенной жидкости при разведении физраствором и центрифугировании. Отмытые сперматозоиды смешивали с перфтораном в соотношении 1:3, выдерживали в течение 5 минут, полученную смесь вводили в полость матки.

Только после третьей попытки инсеминации проведенный тест на беременность дал положительный результат.

В результате добавления перфторана повышается качество спермы, а именно увеличивается подвижность сперматозоидов и их дыхательная способность, что повышает вероятность наступления беременности после внутриматочной инсеминации.

Способ позволяет применять внутриматочную инсеминацию при астенозооспермии.

Способ подготовки спермы для внутриматочной инсеминации, включающий забор спермы, добавление физиологического раствора и двухкратное центрифугирование по 10 мин при 1500 оборотах в минуту, отличающийся тем, что в полученную после центрифугирования массу сперматозоидов вводят перфторан в соотношении 1:3, выдерживают в течение 3-5 мин и вводят полученную смесь в полость матки.