Вакцинная композиция для иммунизации животного против кокцидиоза и способ ее использования

Настоящее изобретение относится к вакцинной композиции для иммунизации животного против кокцидиоза и способу иммунизации животного. Охарактеризованная вакцина содержит от приблизительно 10 до приблизительно 1000 ооцист из первого штамма Eimeria и от приблизительно 100 до приблизительно 10000 ооцист второго штамма указанного вида, причем первый и второй штаммы имеют асинхронные эндогенные периоды и первый штамм представляет собой неослабленный штамм Eimeria, а второй штамм представляет собой ранний штамм Eimeria. Представленные изобретения позволяют выработать у домашней птицы иммунитет к кокцидиозу. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 1 пр.

 

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА СВЯЗАННЫЕ ЗАЯВКИ

Эта заявка согласно разделу 35 § 119(e) Свода законов США устанавливает приоритет предварительной заявки США с серийным № 61/057003, зарегистрированной 29 мая 2008 года, содержание которой, таким образом, включено в полном объеме в качестве ссылки.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к вакцинам, обеспечивающим защиту от кокцидиоза. Также предусмотрены способы получения и применения вакцин самостоятельно или в сочетании с другими защитными средствами.

ПРЕДПОСЫЛКИ

Кокцидиоз является заболеванием кишечника животных, повсеместно поражающим домашний скот. Бизнес, связанный с разведением животных, вследствие кокцидиоза часто сталкивается со значительными затратами, включающими финансовые потери, связанные с больными животными, а также стоимость профилактических мер, направленных на снижение и/или предотвращение заболевания. Такие затраты особенно характерны для промышленного птицеводства, в котором интенсивное разведение птиц способствует распространению кокцидиоза.

Этиологическими факторами кокцидиоза являются представители облигатных внутриклеточных споровиков подкласса Coccidia. Eimeria является одним из родов данного подкласса, имеющим большое значение при разведении домашних животных. Так же как и близкородственные Isospora, Cystoisospora и Cryptosporidium, Eimeria нуждаются только в одном животном-хозяине для прохождения своего жизненного цикла. В естественных условиях этот жизненный цикл начинается с поглощения спорулированных ооцист из окружающей среды.

Eimeria являются одноклеточными паразитами со сложным моноксенным жизненным циклом, проявляющими высокую степень видо- и тканеспецифичности. Разновидности Eimeria включают выявленные у кур E. tenella, E. acervulina, E. maxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E. mivati и E. brunetti; и выявленные у индюков E. meleagrimitis, E. adenoeides, E. gallopavonis, E. dispersa, E. meleagridis, E. innocua и E. subrotunda. Стадии жизненного цикла Eimeria по существу одинаковы для всех видов Eimeria, хотя каждый вид характеризуется характерным местом размножения в кишечнике и временем, необходимым для прохождения жизненного цикла, которое также варьирует между видами.

Многочисленные виды Eimeria способны инфицировать определенного хозяина через ротовую полость, носовую полость и/или посредством попадания инфекционных частиц в слезный проток. Поглощенные паразиты проникают в клетки слизистой кишечника и проходят бесполые и половые стадии жизненного цикла. Возникающее повреждение кишечника может в конечном итоге приводить к нарушенному росту (низкорослости), сниженному усваиванию пищи, потери пигментации и повышенной смертности. Кроме того, повреждение выстилки кишечника предрасполагает животное к другим инфекционным заболеваниям, например, пораженные курицы становятся более подверженными некротическим энтеритам, вызываемым Clostridium perfringens.

Инфекция начинается с поглощения хозяином спорулированных ооцист Eimeria. Поглощенные ооцисты затем высвобождают спороцисты в кишечнике хозяина. Спороцисты высвобождают спорозоиты, которые проникают в кишечные эпителиоциты и затем превращаются в трофозоиты. Трофозоиты в свою очередь подвергаются процессу, известному как мерогония, для образования первого поколения шизонтов. Благодаря относительно большому размеру именно шизонты обусловливают основной патогенетический эффект инфекции, т.е. повреждение тканей хозяина.

Раннее поколение шизонтов образует многочисленные мерозоиты, которые высвобождаются и затем растут и формируют следующее поколение шизонтов. Эта бесполая фаза продолжается на протяжении различного количества поколений перед началом половой фазы. Половая фаза начинается, когда шизонты образуют микрогаметоциты и макрогаметы.

Микрогаметоциты в дальнейшем развиваются в микрогаметы, которые оплодотворяют макрогаметы с образованием потомства в виде неспорулированных ооцист. Неспорулированные ооцисты затем попадают в просвет кишечника и экскретируются с фекалиями хозяина. Завершение жизненного цикла, соответствующее появлению неспорулированных ооцист в фекалиях хозяина, известно как экзогенный период.

Споруляция ооцист происходит вне организма хозяина в благоприятных условиях окружающей среды. Неизбежное поглощение спорулированных ооцист хозяином начинает новый цикл инфекции. Время от момента поглощения хозяином спорулированных ооцист до появления неспорулированных ооцист в фекалиях называется эндогенным периодом. Эндогенный период различается среди разных видов Eimeria.

Домашняя птица, периодически подвергающаяся инфицированию Eimeria, может приобретать иммунитет против кокцидиоза. В действительности, ежедневное инфицирование бройлеров небольшим количеством спорулированных ооцист может приводить к приобретению птицами полноценного иммунитета после как минимум двух инфекций в зависимости от иммуногенности конкретного вида Eimeria. Таким образом, настоящие протоколы, использующие живые вакцины с Eimeria, основаны на принципе приобретенного иммунитета, т.е. ревакцинирования небольшим количеством инфекционных ооцист.

Вакцинацию, как правило, проводят на инкубаторной станции в день рождения птицы посредством введения живой вакцины Eimeria непосредственно птицам или путем ее добавления в их пищу и/или питьевую воду. Внутри пищеварительного тракта птицы инфекционные ооцисты, как описано выше, проходят свой жизненный цикл, заканчивающийся высвобождением нового поколения неспорулированных ооцист на 5-11 сутки, в зависимости от вида Eimeria. Выделенные с фекалиями неспорулированные ооцисты затем становятся инфекционными, т.е. образуют споры в окружающей среде и ревакцинируют птиц после поглощения хозяином. Через два или три таких цикла птицы становятся иммунизированными против кокцидиоза. Такой иммунитет характеризуется: (i) уменьшением численности и/или отсутствием выявляемых с помощью микроскопа паразитов в кишечнике, (ii) сокращением выделения ооцист, (iii) снижением повреждения кишечника, (iv) улучшением клиники заболевания и/или (v) снижением или предотвращением потери веса. В отсутствие дополнительной дозы инфекционных ооцист приобретенный иммунитет постепенно идет на убыль в течение трех или четырех месяцев.

Как правило, при вспышках клинического заболевания в поголовье домашних птиц выделяют дикие типы Eimeria, которые можно выращивать для применения в качестве заразных патогенных штаммов. Типичные неослабленные вакцины составлены из инфекционных ооцист слабых или умеренно патогенных штаммов различных видов Eimeria, которые поддерживают путем пересева в лаборатории. В случае поглощения большого количества таких неослабленных Eimeria они способны вызывать кокцидиоз. Производители и потребители вакцин должны соблюдать осторожность для того, чтобы быть уверенными, что вакцинация обеспечивает незараженного хозяина достаточным количеством инфекционных ооцист лишь для стимуляции иммунитета, а не заболевания. После первичной дозы процесс вакцинации продолжается исключительно при ревакцинации за счет поглощения хозяином спорулированных ооцист из помета.

Ослабленные вакцины получают из инфекционных ооцист, обладающих сниженной патогенностью. Вследствие выраженной корреляции между ослабленной патогенностью и более коротким эндогенным периодом многие ослабленные штаммы также являются ранними. Кроме того, ослабленные линии, обладающие укороченными эндогенными периодами, обычно называют "ранними линиями".

Таким образом, можно получить определенное снижение патогенности Eimeria путем отбора ранних ооцист в процессе повторных пассажей паразитов в животном-носителе. Таким способом были выявлены популяции определенных видов Eimeria, имеющие значительно укороченные эндогенные периоды и значительно сниженную патогенность. Хотя причина наблюдаемой сниженной патогенности до конца не изучена, в целом считается, что это связано с исчезновением и/или уменьшением размеров по меньшей мере одного поколения шизонтов и тем самым уменьшением повреждения тканей хозяина.

У неослабленных и ослабленных вакцин существуют свои достоинства и недостатки. Одним из достоинств вакцин, приготовленных из неослабленных паразитов, является интенсивное размножение паразитов, приводящее к быстрому накоплению ооцист в окружающей среде, которое необходимо для ревакцинации и последующей иммунизации птиц. С другой стороны, процесс размножения неослабленных Eimeria в пищеварительном тракте непривитой курицы может вызывать повреждения, которые приводят к ухудшению здоровья животного, снижению эффективности питания и другим негативным эффектам, включая вторичные инфекции и воспаление.

Другим недостатком неослабленных вакцин является необходимость подтверждения того, что каждая птица получает адекватную первоначальную дозу, поскольку слишком большой прививочный материал вызовет тяжелые нарушения кишечника, а слишком малый прививочный материал вызовет задержку начала процесса иммунизации для всего поголовья. В последнем случае птицы, получающие недостаточную первоначальную дозу, в ходе прививания могут становиться подверженными заражению резко увеличенным количеством инфекционных ооцист, выделяемых другими особями поголовья после первоначального эндогенного периода. Более того, отсутствие достаточного иммунитета перед последующими прививочными дозами возможно служит причиной большинства нарушений, регистрируемых при использовании живых неослабленных вакцин.

Одним из главных достоинств ослабленных вакцин является то, что они вызывают лишь незначительные повреждения. Однако ослабленные вакцины производят меньше ооцист, чем неослабленные штаммы, что приводит к снижению накопления инфекционных ооцист в окружающей среде, тем самым снижая вероятность ревакцинации после первоначального эндогенного периода.

Это в свою очередь приводит к увеличению периода времени, необходимого для полного завершения иммунизации и даже может нарушить весь процесс иммунизации. Замедленное накопление инфекционных ооцист в окружающей среде особенно проблематично в случае иммунизации против вида Eimeria, E. maxima, поскольку дикий тип E. maxima производит относительно большое количество ооцист.

Поскольку животных, являющихся одиночными хозяевами, можно инфицировать различными видами Eimeria, обычно создают живые вакцины против кокцидиоза, содержащие ооцисты нескольких видов Eimeria. До настоящего времени существовало только три типа таких живых вакцин: неослабленные вакцины, состоящие только из ооцист, культивируемых в лабораторных условиях; ослабленные вакцины, состоящие только из ослабленных ооцист; и смешанные вакцины, в которых ооцисты одного вида Eimeria неослабленные, а ооцисты другого вида Eimeria ослабленные. К сожалению, ни одна из этих вакцин не лишена описанных выше недостатков, более того, с точки зрения явных недостатков каждого из существующих типов живых вакцин против Eimeria, совместно с выраженными убытками птицеводство от кокцидиоза, вызываемого инфекциями Eimeria, по-прежнему остается потребность в улучшенных вакцинах, способных надежнее защищать домашнюю птицу от этого убыточного кишечного заболевания.

Упоминание любой изложенной в настоящем документе ссылки не должно истолковываться в качестве допущения, что такая ссылка доступна в качестве "известного уровня техники" для настоящего практического применения.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Таким образом, настоящее изобретение относится к новым иммуногенным композициям, которые можно использовать для вакцинаций против кокцидиоза. В одном из аспектов настоящего изобретения предусматривается вакцина, содержащая по меньшей мере два различных штамма одного вида споровиков рода Coccidia, и что по меньшей мере два различных штамма одного вида споровиков рода Coccidia имеют асинхронный в отношении друг друга эндогенный период.

В одном из вариантов осуществления вакцинная композиция содержит первый штамм вида из рода Coccidia совместно со вторым штаммом того же вида, в которой первый и второй штаммы имеют асинхронный эндогенный период. В одном таком варианте осуществления родом Coccidia является Isospora. В другом варианте осуществления родом Coccidia является Cystoisospora. В другом варианте осуществления родом Coccidia является Cryptosporidium. В конкретном варианте осуществления родом Coccidia является Eimeria.

Также предусмотрены мультивалентные вакцины, содержащие все различные комбинации родов Coccidia. В конкретных вариантах осуществления предусмотрены вакцины, которые содержат два или более штаммов двух или более таких отдельных родов Coccidia. В варианте осуществления такого типа вакцина содержит пары штаммов множества родов Coccidia, в которых множество пар штаммов отдельного вида из рода(ов) Coccidia имеют асинхронные эндогенные периоды. В конкретном варианте осуществления вакцина содержит пары штаммов отдельного вида Cystoisospora, имеющих асинхронный эндогенный период и пары штаммов отдельного вида Isospora, имеющих асинхронный эндогенный период. В другом варианте осуществления все пары штаммов отдельного вида из рода(ов) Coccidia в вакцине имеют асинхронные эндогенные периоды.

В одном из вариантов осуществления первый штамм вида споровиков из рода Coccidia в вакцине является неослабленным штаммом, и второй штамм является ранним штаммом. В конкретном варианте осуществления такого типа ранний штамм также является ослабленным штаммом.

Вакцинами по настоящему изобретению могут быть споровики на любой стадии их жизненного цикла, включая комбинации одного или нескольких или даже всех стадий их жизненных циклов. В конкретном варианте осуществления споровики в вакцине представляют собой ооцисты. В другом варианте осуществления споровики представляют собой спорозоиты. Еще в другом варианте осуществления споровики представляют собой мерозоиты. В еще одном варианте осуществления споровики представляют собой смесь мерозоитов и/или спорозоитов и/или ооцист.

В одном из аспектов настоящего изобретения предусмотрены вакцины, содержащие неослабленные споровики и ранние споровики одного вида из рода Coccidia в определенных соотношениях и/или количествах. Таким образом, в конкретном варианте осуществления вакцина по настоящему изобретению содержит неослабленные споровики и ранние споровики одного вида из рода Coccidia, в которой соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам в вакцине равно приблизительно 1 неослабленному споровику к приблизительно 4 ранним споровикам. В другом варианте осуществления такого типа соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам одного вида равно приблизительно 1 неослабленному споровику к приблизительно 2 ранним споровикам. В другом варианте осуществления соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам одного вида равно приблизительно 1 неослабленному споровику к приблизительно 1 раннему споровику. В еще одном варианте осуществления соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам одного вида равно приблизительно 2 неослабленным споровикам к приблизительно 1 раннему споровику. В другом варианте осуществления соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам одного вида равно приблизительно 4 неослабленным споровикам к приблизительно 1 раннему споровику. В специфическом варианте осуществления такого типа неослабленные споровики представляют собой неослабленные ооцисты. В другом варианте осуществления ранние споровики представляют собой ранние ооцисты. Еще в другом варианте осуществления вакцины неослабленные споровики представляют собой неослабленные ооцисты, и ранние споровики представляют собой ранние ооцисты.

Также предусмотрены вакцины, содержащие любую и/или все комбинации и количества штаммов одного вида из рода Coccidia, имеющие асинхронные эндогенные периоды. В конкретном варианте осуществления такого типа вакцина содержит приблизительно от 10 до приблизительно 1000 неослабленных ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 25 до приблизительно 500 неослабленных ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 50 до приблизительно 250 неослабленных ооцист. В еще одном варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 100 до приблизительно 200 неослабленных ооцист.

В смежном варианте осуществления такого типа вакцина содержит приблизительно от 50 до приблизительно 20000 неослабленных ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 100 до приблизительно 10000 неослабленных ооцист. Еще в другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 250 до приблизительно 5000 неослабленных ооцист. В еще одном варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 500 до приблизительно 3000 неослабленных ооцист. В еще другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 750 до приблизительно 2000 неослабленных ооцист.

В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 50 до приблизительно 20000 ранних и/или ослабленных ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 100 до приблизительно 10000 ранних ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 250 до приблизительно 5000 ранних ооцист, в еще одном варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 500 до приблизительно 3000 ранних ооцист. Еще в другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 750 до приблизительно 2000 ранних ооцист. В другом варианте осуществления вакцина по настоящему изобретению содержит приблизительно от 10 до приблизительно 1000 ранних ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 25 до приблизительно 500 ранних ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 50 до приблизительно 250 неослабленных ранних ооцист, в еще одном варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 100 до приблизительно 200 ранних ооцист. В конкретных вариантах осуществления ранние ооцисты представляют собой ослабленные ооцисты.

Если вакцина по настоящему изобретению включает, в частности, споровиков рода Coccidia, например Eimeria, то может быть использован любой из таких видов. В одном таком варианте осуществления вакцина, содержащая вид Eimeria, может помочь защитить кур от кокцидиоза. В одном таком варианте осуществления видом Eimeria является E. tenella. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. acervulina. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. necatrix. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. mivati. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. mitis. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. praecox. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. brunetti. В конкретном варианте осуществления видом Eimeria является E. maxima.

Также предусмотрены вакцины, содержащие все возможные комбинации таких видов Eimeria. Кроме того, предусмотрены вакцины, содержащие два или более штамма двух или более таких отдельных видов. В одном из вариантов осуществления такого типа вакцина содержит пары штаммов различных видов Eimeria, в которой различные пары штаммов определенного вида Eimeria имеют асинхронные эндогенные периоды. В конкретном варианте осуществления такого типа все пары штаммов определенного вида Eimeria в вакцине имеют асинхронные эндогенные периоды.

В конкретном варианте осуществления вакцина содержит дикий тип и/или неослабленный штамм E. maxima и ослабленный и/или ранний штамм E. maxima. В одном таком варианте осуществления дикий тип и/или неослабленный штамм E. maxima обладает, по существу, всеми основными характеристиками и/или, по существу, всеми свойствами штамма E. maxima, находящегося в вакцине, продаваемой под маркой COCCIVAC®. В другом специфическом варианте осуществления такого типа вакцина содержит ослабленный и/или ранний штамм E. maxima, который обладает, по существу, всеми основными характеристиками и/или, по существу, всеми свойствами штамма E. maxima, находящегося в вакцине, продаваемой под маркой PARACOX®. В другом варианте осуществления вакцина содержит дикий тип и/или неослабленный штамм E. maxima, имеющий по существу, все основные характеристики и/или, по существу, все свойства штамма E. maxima, находящегося в вакцине, продаваемой под маркой COCCIVAC® и ослабленный, ранний штамм E. maxima, который обладает, по существу, всеми основными характеристиками и/или, по существу, всеми свойствами штамма E. maxima, находящегося в вакцине, продаваемой под маркой PARACOX®.

Другая вакцина по настоящему изобретению содержит один или более видов Eimeria, которые могут помогать защищать индюков от кокцидиоза. В одном таком варианте осуществления видом Eimeria является E. meleagrimitis. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. adenoeides. Еще в другом варианте осуществления видом Eimeria является E. gallopavonis. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. dispersa. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. meleagridis. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. innocua. Еще в другом варианте осуществления видом Eimeria является E. subrotunda. Также предусмотрены вакцины, содержащие любую и все комбинации индюшачьих видов Eimeria, кроме того, предусмотрены вакцины, содержащие два или более штаммов двух или более таких отдельных видов. В одном из вариантов осуществления такого типа вакцина содержит пары штаммов различных индюшачьих видов Eimeria, в которой различные пары штаммов каждого индюшачьего вида Eimeria имеют асинхронные эндогенные периоды. В конкретном варианте осуществления такого типа все пары штаммов каждого индюшачьего вида Eimeria в вакцине имеют асинхронные эндогенные периоды.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрены вакцины, включающие один или более видов и/или штаммов вида Isospora, Cystoisospora и/или Cryptosporidium. В вариантах осуществления такого типа по меньшей мере два штамма вида Isospora, Cystoisospora и/или Cryptosporidium также имеют асинхронный эндогенный период. Кроме того, любая из вакцин Eimeria по настоящему изобретению может сочетаться с такими вакцинами Isospora, Cystoisospora и/или Cryptosporidium.

В конкретном варианте осуществления вакцина включает неослабленный штамм вида Cryptosporidium и ранний штамм того же вида Cryptosporidium. В другом варианте осуществления такая вакцина Cryptosporidium дополнительно содержит неослабленный штамм вида Isospora и ранний штамм того же вида Isospora. В другом варианте осуществления вакцина Cryptosporidium дополнительно содержит неослабленный штамм вида Cystoisospora и ранний штамм того же вида Cystoisospora. В еще одном варианте осуществления вакцина Cryptosporidium дополнительно содержит неослабленный штамм вида Cystoisospora, ранний штамм того же вида Cystoisospora, неослабленный штамм вида Isospora и ранний штамм того же вида Isospora.

В смежном варианте осуществления настоящее изобретение относится к вакцине, включающей неослабленный штамм вида Isospora и ранний штамм того же вида Isospora. В другом варианте осуществления вакцина включает неослабленный штамм вида Cystoisospora и ранний штамм того же вида Cystoisospora. В другом варианте осуществления вакцина содержит неослабленный штамм вида Cystoisospora, ранний штамм того же вида Cystoisospora, неослабленный штамм вида Isospora и ранний штамм того же вида Isospora.

В другом аспекте по изобретению предусмотрены способы иммунизации особей животных против кокцидиоза. Один такой вариант осуществления содержит введение животному иммунологически эффективного количества любой вакцины по настоящему изобретению. В одном из вариантов осуществления вакцину вводят перорально. В другом варианте осуществления вакцину вводят in ovo. В другом варианте осуществления вакцину вводят местно. В еще одном варианте осуществления вакцину вводят посредством инъекции.

В одном конкретном варианте осуществления вакцину вводят c питьевой водой животного. В другом варианте осуществления вакцину вводят с пищей животного. Еще в другом варианте осуществления вакцину одновременно вводят с пище и питьевой водой животного.

В еще одном варианте осуществления вакцину вводят посредством опрыскивания. В одном таком варианте осуществления раствором, содержащим вакцину, опрыскивают однодневных цыплят. В конкретном варианте осуществления такого типа однодневных цыплят вакцинируют в специальном шкафу для опрыскивания на инкубаторной станции. В другом варианте осуществления вакцину вводят посредством контакта вакцины с глазом животного. В конкретном варианте осуществления такого типа нанесение вакцины на глаз животного производят с помощью глазной пипетки. В другом варианте осуществления вакцину вводят двумя, тремя, четырьмя или более способами введения.

В конкретном варианте осуществления вакцину по настоящему изобретению вводят птицам. В одном из вариантов осуществления птицей является домашняя птица. В одном таком варианте осуществления животным является курица. В другом варианте осуществления домашней птицей является индюк. В еще одном варианте осуществления домашней птицей является утка. В другом варианте осуществления домашней птицей является пернатая дичь. В конкретном варианте осуществления такого типа пернатой дичью является перепел. В другом варианте осуществления пернатой дичью является фазан. В другом варианте осуществления вакцину вводят млекопитающему. В конкретном варианте осуществления такого типа, млекопитающее не относится к человеку.

Эти и другие аспекты по настоящему изобретению будут более понятны после изучения Подробного описания и Примера.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает вакцину против кокцидиоза, разработанную для улучшения преимуществ отдельных свойств неослабленных и ранних вакцин Coccidia, соответственно, и при этом для минимизирования их индивидуальных недостатков. В одном из аспектов изобретения вакцина содержит комбинацию одного или нескольких штаммов дикого типа вида Coccidia с одним или несколькими штаммами ослабленных Coccidia того же вида. Такая вакцина может вызывать более сильный иммунный ответ в организме хозяина, чем вызываемый двумя индивидуальными типами штаммов по отдельности. Кроме того, суммарные двойные и различающиеся паразитические жизненные циклы этих двух штаммов могут ускорять приобретение напряженного иммунитета организмом хозяина.

В основном, приобретение напряженного иммунитета против данного вида Eimeria за счет вакцины, содержащей ранний штамм, длится дольше, чем при использовании неослабленного штамма, несмотря на то, что экзогенный период у ранних вакцин наступает раньше. Этот результат позволяет предположить, что дополнительные репликативные циклы, которые неослабленные штаммы проходят в эндогенном периоде, могут усиливать иммунный ответ у хозяина по сравнению с таковым в отношении ранних штаммов, и/или, что значительно большее количество ооцист, высвобожденное во время экзогенного периода после инфекции/вакцинации неослабленным Eimeria, может способствовать приобретению животным-носителем полного иммунитета при меньшем количестве паразитических жизненных циклов.

Не будучи ограниченным конкретным механизмом действия, настоящее изобретение согласуется с теми, которые оказывают на иммунную систему хозяина синергический эффект, возникающий посредством вакцинации животного-носителя вакциной, содержащей два или более штаммов выбранного вида из рода Coccidia, например Eimeria, в которой по меньшей мере два штамма имеют асинхронный эндогенный период. Такой асинхронный эндогенный период позволяет процессу иммунизации протекать быстрее, чем при самостоятельном использовании каждого штамма, благодаря усиливающему эффекту различных экзогенных периодов. В самом деле, более быстрое чередование эндогенных периодов способствует процессу ревакцинации посредством увеличения доступности новообразованных ооцист для поглощения хозяином. Усиливающий эффект, обозначаемый в настоящем документе как "эффект эха", может, таким образом, вызывать более ранний иммунитет у этого животного-носителя.

Таким образом, в одном из аспектов настоящее изобретение относится к вакцине, содержащей ослабленный штамм, обладающий укороченным эндогенным периодом, совместно с неослабленным штаммом того же вида, обладающим более долгим эндогенным периодом, но гораздо большей способностью к размножению и заражению окружающей среды новым поколением ооцист. Одна из таких примерных вакцин по настоящему изобретению включает два различных штамма (или линии) Eimeria maxima: ослабленный, ранний штамм, полученный из исходной культуры, используемой при производстве вакцин, продаваемых под маркой PARACOX®, и неослабленный штамм, полученный из исходной культуры, используемой при производстве вакцин, продаваемых под маркой COCCIVAC®. Оба этих штамма обеспечивают эффективность в отношении заражения E. maxima. Однако вакцинация поголовья бройлеров неослабленным штаммом приводит к появлению полного иммунитета к концу 3 недели, тогда как вакцинация ранними и/или ослабленными вакцинами занимает по меньшей мере четыре недели до полного укрепления иммунитета.

Вследствие различной продолжительности эндогенных периодов более ранний иммунитет у животного-носителя можно получать посредством эффекта эха. Таким образом, за счет достижения асинхронной стимуляции иммунного ответа, т.е. эффекта эха, комбинированные штаммы Eimeria maxima могут стимулировать более продолжительное воздействие антигена на иммунную систему и, таким образом, ускорять процесс развития защитного иммунитета.

В действительности, совместное введение двух штаммов может повышать эффективность процесса иммунизации. Как неослабленные, так и ранние ооцисты одновременно начинают соответственные жизненные циклы в организме хозяина, однако неослабленный штамм завершает свой эндогенный период приблизительно через 11-31 часа после раннего штамма. Неослабленный штамм также выделяет значительно большее количество ооцист в фекалии.

Таким образом, ранний штамм проходит свой жизненный цикл в организме хозяина первым, тем самым инициируя иммунный ответ хозяина. Затем ранние ооцисты экскретируются, образуют споры, и после их поглощения хозяином начинают свой второй жизненный цикл. В то же время первый жизненный цикл неослабленного штамма продолжает производить одно или более новых поколений шизонтов, что обязательно заканчивается образованием гаметоцитов, усиливающих и развивающих вызванный ранним штаммом иммунный ответ. Выделенные неослабленные ооцисты затем образуют споры в помете и поглощаются хозяином, который уже содержит ранний штамм, вступивший во второй жизненный цикл. Такие одновременные асинхронные жизненные циклы, таким образом, помогают укорачивать время, необходимое для достижения напряженности иммунитета у хозяина. Суммарный процесс также позволяет вакцинам содержать меньше неослабленных ооцист в первоначальной дозе, что способствует снижению частоты и/или ослаблению серьезности повреждений, возникающих в кишечнике хозяина вследствие инфекции неослабленным штаммом.

Применение специфических терминов для удобства описания ни в коей мере не подразумевает четкого ограничения. Таким образом, например, упоминание композиции, содержащей "количество", включает упоминание одного или нескольких таких количеств. Кроме того, упоминание "ооциста", если не указано иначе, включает упоминание множества таких ооцист.

Как применяют в настоящем документе, следующие термины должны иметь значения, изложенные ниже:

Термины "адъювант" и "иммуностимулятор" используются в настоящем документе взаимозаменяемо и определены как один или более веществ, вызывающих стимуляцию иммунной системы. Адъюванты представляют собой средства, которые неспецифически повышают иммунный ответ на конкретный антиген, тем самым снижая количество антигена, необходимое в любой данной вакцине и/или частоту инъекций, необходимую для возбуждения адекватного иммунного ответа на интересующий антиген. В этой связи адъювант используют для усиления иммунного ответа на один или более вакцинных антигенов/изолятов. Адъювант можно вводить запланированному животному до, в сочетании с или после введения вакцины.

Как применяют в настоящем документе, термин "приблизительно" используется взаимозаменяемо с термином "примерно" и означает, что значение находится в области колебания пятидесяти процентов от указанного значения, т.е. композиция, содержащая "приблизительно" 100 ооцист, содержит от 50 до 150 ооцист.

Как применяют в настоящем документе, "ослабленный" штамм вида из рода Coccidia (такой как "ослабленный Eimeria") представляет собой штамм, выбранный на основании сниженной патогенности в организме хозяина. Такое ослабление может достигаться различными способами, включая серийный пассаж (такой как серийный эмбриональный пассаж), химический мутагенез и лучевую обработку.

Как применяют в настоящем документе, "ранний" штамм вида из рода Coccidia (такой как "ранний Eimeria") представляет собой a штамм, имеющий укороченный эндогенный период относительно неослабленного штамма того же вида. Ранний штамм также может быть ослабленным штаммом.

Как применяют в настоящем документе, штамм "дикого типа" вида из рода Coccidia (такой как "дикий тип Eimeria") представляет собой исходный изолят, не измененный путем пассажа или любой другой обработки, включая отбор посредством: выделения отдельных ооцист, иммунологической толерантности или другого сегрегационного процесса.

Как применяют в настоящем документе, "неослабленный" штамм вида из рода Coccidia (такой как "неослабленный Eimeria") представляет собой штамм, не имеющий ни укороченного эндогенного периода, ни сниженной патогенности в организме хозяина относительно штамма дикого типа того же вида.

Как применяют в настоящем документе, "штамм" вида из рода Coccidia (например, вида Eimeria) представляет собой субпопуляцию вида из рода Coccidia, которую можно выделить среди общей популяции по одному или нескольким следующим критериям: патогенность, иммуногенность, эндогенный период, и/или популяция, возникающая из отдельных ооцист.

Термин "асинхронный эндогенный период времени" относится к эндогенным периодам времени двух или более видов из рода Coccidia и/или двух или более штаммов вида из рода Coccidia, различающихся на 10% или более, в конкретном варианте осуществления два или более видов из рода Coccidia и/или два или более штаммов отдельного вида из рода Coccidia имеют асинхронные эндогенные периоды, различающиеся на 20% или более. В еще другом варианте осуществления два или более видов из рода Coccidia и/или два или более штаммов отдельного вида из рода Coccidia имеют асинхронные эндогенные периоды, различающиеся на 25% или более.

При указании асинхронных эндогенных периодов для ранних и/или ослабленных штаммов с неослабленными штаммами, различающихся во времени на определенный процент (%), процентное отношение отсчитывается от эндогенного периода времени неослабленного штамма. Таким образом, если неослабленный штамм рода Coccidia имеет эндогенный период 120 часов и ранний штамм того же вида из рода Coccidia имеет эндогенный период 108 часов, то два штамма имеют асинхронные эндогенные периоды, различающиеся на 10%.

Как применяют в настоящем документе термин "домашняя птица(ы)", если не указано иначе, включает кур, индюков, уток, пернатую дичь (включая в качестве неограничивающих примеров перепелов, фазанов и гусей) и бескилевых птиц (включая в качестве неограничивающих примеров эму и страусов).

Как применяют в настоящем документе, термин "Eimeria", если не указано иначе, означает один или более видов из рода Eimeria, которые инфицируют домашних птиц. Виды Eimeria включают представителей, выявленных у кур, и включает, например, E. tenella, E. acervulina, E. maxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E. mivati и E. brunetti, и также представителей, выявленных у индюков, включая E. meleagrimitis, E. adenoeides, E. gallopavonis, E. dispersa, E. meleagridis, E. innocua и E. subrotunda, и также виды Eimeria, инфицирующие других домашних птиц, как определено выше. Термин "Eimeria" также включает все штаммы указанных видов Eimeria, включая в качестве неограничивающих примеров ранние штаммы и ослабленные штаммы, которые также включают облученные или обработанные иным способом штаммы для того, чтобы они не могли осуществлять свое развитие. Термин Eimeria дополнительно включает любые вновь обнаруженные штаммы или виды Eimeria, инфицирующие домашних птиц, как определено выше.

Термин "инкапсулированный" означает стадию ооцисты простейшего паразита.

Как применяют в настоящем документе, термины "иммунизировать" и "вакцинировать" являются синонимами и используются взаимозаменяемо. Как применяют в настоящем документе, термин "эффективная доза иммунизации", если не указано иначе, означает количество споровиков на любой стадии их жизненного цикла, включая комбинации одной или нескольких, или даже всех стадий их жизненных циклов, например спорозоитов, ооцист и/или мерозоитов, или их комбинаций, например количество спорозоитов, ооцист и мерозоитов, достаточное для стимуляции иммунологической реакции у вакцинированных животных, проявляющейся, например, увеличением титра соответствующих антител и/или активацией клеточного иммунитета. Предпочтительно вызываемая иммунологическая реакция обеспечивает защитный иммунитет, ограничивающий или снижающий клинические признаки заболевания, потерю веса, заболеваемость и/или смертность у вакцинированных животных (например, птиц), в случае прививания вирулентной дозой спорозоита (например, Eimeria или Cryptosporidia).

Термины "ооцисты", "мерозоиты" и "спорозоиты", как применяют в настоящем документе и, если не указано иначе, означают жизнеспособные, т.е. живые ооцисты, мерозоиты и спорозоиты Coccidia (например, Eimeria или Cryptosporidia), которые могут быть как ослабленными, так и неослабленными.

Термин "напряженный иммунитет" используется в настоящем документе взаимозаменяемо с термином "полный иммунитет" и означает свойство иммунитета, приобретенного группой вакцинированных животных (например, в поголовье вакцинированных птиц) и обеспечивающего защиту против гомологичного возбудителя таким образом, что вакцинированные животные статистически сходны с назараженным контролем (и/или статистически различны с невакцинированным зараженным контролем) с точки зрения здоровья и поведения, которые оценивают, например, по степени переваривания пищи, прироста веса и/или повреждений от кокцидиоза (массивных или микроскопических).

Как применяют в настоящем документе, термин "статистически сходны" означает, что статистическое сравнение двух групп или популяций животных приведет к принятию нулевой гипотезы (или гипотезы об отсутствии различия) с доверительным интервалом <0,1.

Как применяют в настоящем документе, термин "статистически различны" обозначает, что статистическое сравнение двух групп или популяций животных приведет к отрицанию нулевой гипотезы (или гипотезы об отсутствии различия) с доверительным интервалом <0,1.

Термин "спороциста" относится к капсуле, окружающей спорозоиты в ооцисте.

ЖИВОТНЫЕ

Животное, подлежащее описанному лечению, является предпочтительно, но не исключительно, позвоночным и более предпочтительно млекопитающим, птицей или рыбой. Любую из вакцин по изобретению можно вводить животному. Соответствующие животные включают особей, обитающих в дикой среде, домашний скот (который разводят, например, для мяса, молока, масла, яиц, пуха, кожи, пера и/или шерсти), вьючных животных, лабораторных животных, домашних питомцев, а также тех, которых разводят для/в зоопарках, заповедниках и/или цирках.

Птицы (Avians), подлежащие лечению или профилактике посредством вакцин по изобретению, могут быть связаны либо с коммерческим, либо с некоммерческим разведением. Среди прочих они включают, например, Anatidae, таких как лебеди, гуси и утки, Columbidae, например голубей и горлиц, таких как домашние голуби, Phasianidae, например перепелов, куропаток, тетеревов, фазанов и индюков, Thesienidae, например домашних кур, Psittacines, например попугайчиков, попугаев ара и попугаев, например, которых разводят для коллекционных и птичьих рынков.

Млекопитающие включают коров (например, мясных или молочных коров), свиней (например, домашних свиней или поросят), овец (например, козлов или овец), лошадей (например, коней), собак (например, псов), кошачьих (например, домашних кошек), верблюдов, оленей, антилоп, кроликов, морских свинок и грызунов (например, белок, крыс, мышей, песчанок и хомяков), китовых (китов, дельфинов, морских свиней), ластоногих (тюленей, моржей).

Рыба также может являться объектом для вакцин по настоящему изобретению. В целях настоящего изобретения термин "рыба" должен включать в качестве неограничивающих примеров надотряд рыб Teleosti, т.е. костистых рыб. Оба отряда, Salmoniformes (который включает семейство Salmonidae) и Perciformes (который включает семейство Centrarchidae), относятся к надотряду Teleosti. Примеры потенциальных рыб-реципиентов включают среди прочих семейство Salmonidae, семейство Serranidae, семейство Sparidae, семейство Cichlidae, семейство Centrarchidae, Трехлинейного Гранта (Parapristipoma trilineatum) и Голубоглазых Плейкостом (Plecostornus spp). Дополнительные примеры рыб, подлежащих лечению, включают в качестве неограничивающих примеров сома, сибаса, тунца, палтуса, гольца, осетра, белокорого палтуса, камбалу, морского языка, карпа, тилапию, речного окуня, угря, морского леща, желтохвоста, сериолу, морского окуня и ханоса.

Антигены

Ооцисты дикого типа получают из фекалий или тканей инфицированных животных; зараженной пищи или воды; почвы; подстилки для скота или из других различных источников. Известны способы выделения спороцист и ооцист. Точные методы, используемые для выделения ооцист, будут зависеть от материала, из которого их получают, и будут совершенно понятны специалистам в данной области. Выращивать мерозоиты в культуре можно способами, изложенными, например, в патенте США 7250286 B2.

Одним из подходящих подходов к выделению организмов из нативных образцов из окружающей среды является следующий. Начальным этапом является выделение спороцист и/или ооцист из чужеродного материала. Почву или экскременты, как правило, обрабатывают для образования жидкой массы с насыщенным физиологическим раствором и выделения из жидкой массы спороцист и/или ооцист. Например, необходимый материал смешивают минимум с 2 объемами (масс./об.) насыщенного водного раствора NaCl с образованием жидкой массы. При необходимости жидкую массу можно обрабатывать в смесителе или измельчителе до получения однородной консистенции. Жидкую массу центрифугируют при приблизительно 800 г в течение 10 минут при 4°C. Супернатант собирают посредством пропускания через двухслойную плетенную 24×24 ситовую ткань. Другие повсеместно используемые способы очистки ооцист из образцов включают сахарозную флотацию по Sheather и флотацию в сульфате цинка (например, смотри LR Ash и TC Orihel, Parasites: A Guide to Laboratory Procedures и Identification, ASCP Press © 1991).

Фильтрованный супернатант смешивают с двумя объемами питьевой воды и центрифугируют при приблизительно 1600 г в течение 10 минут при 4°C. Осажденные ооцисты промывают водой и снова осаждают путем описанного центрифугирования еще три раза. Затем ооцисты три раза промывают в 2,5% дихромате калия тем же способом, как и в случае промывания водой. После последнего промывания ооцисты можно хранить в 2,5% дихромате калия при 4°C или перенести в контейнер для споруляции.

Альтернативно, для выделения ооцист по их размеру можно использовать последовательную фильтрацию. В случае когда используют фильтрацию, ооцисты промывают водой и 2,5% дихроматом калия, как описано выше.

Неослабленные линии, полученные в качестве исходных изолятов дикого типа, поддерживаются в лабораторных условиях в течение многих лет с помощью серийных пассажей и подробно охарактеризованы как обладающие низкой или умеренной патогенностью, умеренной или высокой плодовитостью, определенными эндогенными периодами и определенными механизмами экскреции из организма хозяина.

Отдельно от существующих ранних линий Eimeria, как представлено в качестве примера в патенте США 5055292, содержание которого, таким образом, включено в качестве ссылки в полном объеме, ранние линии также можно получать из дикого типа, вирулентных родительских штаммов или неослабленных штаммов путем серийных пассажей в организме курицы. В одном таком случае ооцисты собирают из фекалий только в течение первых нескольких часов после экзогенного периода. Таким способом можно постепенно снижать продолжительность эндогенного периода времени. Такой способ пассажа назван селекционным пассажем. Альтернативно, с целью увеличения количества доступных для выделения ооцист, предпочтительным может являться сбор ооцист в периоде времени от начала экзогенного периода и практически до наступления эндогенного периода родительского штамма. Такой способ пассажа назван нейтральным пассажем. И наконец, в ходе процесса, известного как простой пассаж, собирают практически все ооцисты, включая те, которые продуцируются после эндогенного периода родительского штамма.

ВАКЦИНЫ

Система для посевной серии

Исходные культуры каждой неослабленной или ослабленной линии Eimeria могут храниться, например, в жидком азоте. Рабочую культуру можно получать из образца каждой исходной культуры после заражения организма хозяина, например, кур SPF. Ооцисты можно снова извлекать из фекалий и/или слепой кишки хозяина с получением рабочих культур. Рабочие культуры хранят при 4°C и используют на начальном этапе получения каждой вакцины. Рабочие культуры имеют срок хранения от 6 до 12 месяцев, после чего они должны быть заменены. При получении рабочей культуры ооцисты собирают только примерно до эндогенного периода дикого типа родительского штамма этого вида, т.е. применяют нейтральный пассаж. При получении вакцины ооцисты собирают на всем протяжении экзогенного периода инфекция, т.е. применяют простой пассаж.

Разведение кур

Кур выводят из яиц, полученных от сертифицированной породы SPF. До наступления подходящего для наработки вакцин возраста они содержатся без Coccidia, обычно до возраста 1-12 недель. Затем кур переносят в помещение для наработки вакцин, разделяют на группы в отдельные комнаты или переносят в изоляторы, разработанные для каждого вида Eimeria.

Заражение

Каждую группу птиц заражают перорально заранее рассчитанной дозой рабочей культуры. Заражение можно упорядочить согласно смещенному графику таким образом, что в данный рабочий день будет выделяться и обрабатываться только один тип Eimeria.

Сбор

Собирают фекалии, при этом срок и продолжительность сбора различаются между видами. Получают жидкую массу фекалий (и/или содержимого слепой кишки) с водой и затем гомогенизируют. Гомогенат пропускают через 150-микронный фильтр, и фильтрат последовательно центрифугируют в проточной роторной центрифуге. Продукт центрифугирования ресуспендируют в насыщенном солевом растворе и заново центрифугируют. Собирают супернатант, растворяют в воде и в третий раз пропускают через центрифугу. Продукт ресуспендируют в 2% растворе дихромата калия.

Споруляция

Для споруляции суспензию ооцист инкубируют в растворе дихромата калия при 29°C в течение 48 часов с усиленной аэрацией. После споруляции удаляют раствор дихромата посредством центрифугирования и ооцисты обрабатывают 10% водным раствором гипохлорита натрия в течение 10 минут. Обработанные ооцисты ресуспендируют в воде и затем добавляют формалин до концентрации 0,05%. Суспензию хранят при 4°C.

Дозирование

Проводят подсчет ооцист в каждом крупном объеме суспензий ооцист и рассчитанные аликвоты каждой суспензии смешивают с суспензионным средством с получением многокомпонентной вакцины с ооцистами разных видов, присутствующими в необходимых пропорциях. Вакцину помещают в постоянные контейнеры и хранят при 4°C.

Адъюванты

Некоторые вакцинные композиции по настоящему изобретению могут включать фармацевтически приемлемый адъювант. Адъюванты по настоящему изобретению можно получать из различных источников, включая природные, рекомбинантные и/или химически синтезированные и т.д. Подходящие адъюванты для вакцинации животных включают в качестве неограничивающих примеров адъювант 65 (содержащий арахисовое масло, моноолеат маннида и моностеарат алюминия); полный или неполный адъювант Фрейнда; минеральные гели, соединения алюминия, такие как гидроксид алюминия, фосфат алюминия и алюминиевые квасцы; поверхностно-активные вещества, такие как гексадециламин, октодециламин, лизолецитин, бромид диметилдиоктодециламмония, N,N-диоктодецил-N',N'-бис(2-гидроксиметил)пропандиамин, метоксидексадецилглицерин и плюроновые многоатомные спирты; полианионы, такие как пиран, сульфат декстрана, поли-IC, полиакриловая кислота; пептиды, такие как мурамилдипептид, диметилглицин и тафцин; и масляные эмульсии. Информация об адъювантах содержится, например, в сборниках P. Tijssen (Practice и Theory of Enzyme Immunoassays, 3rd Edition, Elsevier, New York, (1987)).

Друге возможные адъюванты включают в качестве неограничивающих примеров метаболизируемые и неметаболизируемые масла, блокирующие полимеры, ISCOM (иммуностимулирующие комплексы), витамины и минералы (включая в качестве неограничивающих примеров витамин E, витамин A, селен и витамин B12), Quil A (сапонины), полимеры акриловой кислоты, поперечно сшитые с полиалкениловыми простыми эфирами или дивинилгликолем, продаваемые под торговой маркой CARBOPOL® (например, CARBOPOL® 941), и однородно распределенные в микроскопических масляных каплях водной эмульсии (например, продаваемой под торговой маркой Emulsigen®).

Дополнительные примеры адъювантов, которые иногда относят к специфическим иммуностимуляторам, включают компоненты клеточных стенок бактерий и грибов (например, липополисахариды, липопротеины, гликопротеины, мурамилпептиды, бета-1,3/1,6- глюканы), различные сложные углеводы, полученные из растений (например, гликаны, ацеманнаны), различные белки и пептиды животного происхождения (например, гормоны, цитокины, костимулирующие факторы), и новые нуклеиновые кислоты, полученные из вирусов и других источников (например, двухцепочечная РНК, CpG). Кроме того, любое количество комбинаций указанных выше веществ может обеспечивать адъювантный эффект и, таким образом, может образовывать адъювант по настоящему изобретению.

Вакцину по настоящему изобретению легко вводят любыми способами вакцинации, включая оральную (например, посредством пипетки, через нос, с пищей, с водой или при помощи спрея), in ovo, местную или посредством инъекции (например, внутривенной, подкожной, внутримышечной, внутриглазничной, внутриглазной, внутрикожной и/или внутрибрюшинной). Специалист полностью осознает, что предпочтительно вакцинная композиция должна быть сформулирована соответствующим образом для конкретного вида животного-реципиента и способа введения.

Хотя вакцины по настоящему изобретению содержат в качестве примера Eimeria, вакцины по настоящему изобретению также могут создавать на основе неослабленных и ослабленных и/или ранних видов и/или штаммов видов из близких родов: соответственно Isospora, Cystoisospora и Cryptosporidium.

ПРИМЕР 1

ВАКЦИНА, СОДЕРЖАЩАЯ ОСЛАБЛЕННЫЙ И НЕОСЛАБЛЕННЫЙ ШТАММ E. MAXIMA

Штаммы E. maxima

Eimeria maxima MFP: имеет приблизительно 96-часовой эндогенный период (укороченный на 25 часов относительно 121-часового эндогенного периода родительского штамма). Время сбора находится между 104-110 часами, например между 108-110 часами (4,5-4,58 сутками). Гаметоциты после инфекции появляются приблизительно через 72 часа или ранее. При этом средние размеры шизонтов и среднее количество мерозоитов по существу схожи с родительскими штаммами.

Eimeria maxima Coccivac имеет эндогенный период приблизительно 121 час и получение ооцист можно осуществлять между 144 и 192 часами.

Состав вакцины: Ооцисты выделяют, как описано выше, и затем спорулируют. Образцы полученных спорулированных ооцист отбирают с известной концентрацией для обеспечения необходимого количества спорулированных ооцист в единице объема. Получение вакцины завершают перенесением суспензий ооцист в стерильный контейнер и затем количественным добавлением в этот контейнер 2,5% раствора дихромата калия. Вакцину в стерильных условиях распределяют по контейнерам, которые затем закупоривают.

Необходимо понимать, что данное изобретение не ограничено конкретными схемами, этапами получения и материалами, описываемыми в настоящем документе, поскольку такие схемы, этапы получения и материалы могут отчасти варьировать, также необходимо понимать, что применяемая в настоящем документе терминология используется только с целью описания конкретных вариантов осуществления и не подразумевается в качестве ограничительной, поскольку область настоящего изобретения будет ограничена только прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.

1. Вакцинная композиция для иммунизации животного против кокцидиоза, содержащая от приблизительно 10 до приблизительно 1000 ооцист из первого штамма Eimeria и от приблизительно 100 до приблизительно 10000 ооцист второго штамма указанного вида; где первый и второй штаммы имеют асинхронные эндогенные периоды и где первый штамм представляет собой неослабленный штамм Eimeria и второй штамм представляет собой ранний штамм Eimeria.

2. Вакцина по п.1, где ранний штамм Eimeria представляет собой ослабленный штамм Eimeria.

3. Вакцина по п.1, которая дополнительно содержит неослабленные мерозоиты и спорозоиты Eimeria и ранние мерозоиты и спорозоиты Eimeria.

4. Вакцина по п.1, где указанный вид Eimeria выбран из группы, состоящей из E.tenella, E.acervulina, E.maxima, E.necatrix, E.mitis, E.praecox, E.mivati и E.brunetti.

5. Вакцина по п.4, где указанный вид Eimeria представляет собой E.maxima.

6. Вакцина по п.5, которая дополнительно содержит один или более дополнительных видов Eimeria, выбранных из группы, состоящей из E.tenella, E.acervulina, E.maxima, E.necatrix, E.mitis, E.praecox, E.mivati и E.brunetti.

7. Вакцина по п.1, которая дополнительно содержит один или более дополнительных штаммов рода Coccidia, выбранных из группы, состоящей из Isospora, Cystoisospora и Cryptosporidium.

8. Вакцина по п.7, где род Coccidia представляет собой Cryptosporidium, и один или более дополнительных штаммов Cryptosporidium включают неослабленный штамм вида Cryptosporidium и ранний штамм вида Cryptosporidium.

9. Вакцина по п.1, где указанный вид Eimeria выбран из группы, состоящей из E.meleagrimitis, E.adenoeides, E.gallopavonis, E.dispersa, E.meleagridis, E.innocua и E.subrotunda.

10. Способ иммунизации животного против кокцидиоза, включающий введение животному иммунологически эффективного количества вакцины по п.1.

11. Способ по п.10, где вакцину вводят перорально.

12. Способ по п.11, где вакцину вводят посредством добавления вакцины в питьевую воду животного или добавления вакцины в пищу животного.

13. Способ по п.10, где вакцину вводят посредством опрыскивания вакциной животного.

14. Способ по п.10, где вакцину наносят на глаз животного.

15. Способ по п.10, где вакцину вводят in ovo.

16. Способ по п.10, где животное представляет собой домашнюю птицу.

17. Способ по п.16, где домашняя птица выбрана из группы, состоящей из курицы, индюка, утки и пернатой дичи.

18. Способ по п.17, где домашняя птица представляет собой цыпленка.