Способ количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги

Авторы патента:

Никитина Светлана Александровна (RU)

Хабибрахманова Венера Равилевна (RU)

A61K36/07 - Лекарства и медикаменты для терапевтических, стоматологических или гигиенических целей (изготовление специальных лекарственных форм A61J; химические аспекты или использование материалов для дезодорации воздуха, для дезинфекции или стерилизации или для бандажей, перевязочных средств, впитывающих прокладок или хирургических приспособлений A61L; соединения как таковые C01, C07,C08,C12N; мыла C11D; микроорганизмы как таковые C12N)

Владельцы патента RU 2566067:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский национальный исследовательский технологический университет" (ФГБОУ ВПО "КНИТУ") (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги. Способ количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги включает исчерпывающую экстракцию сырья или препарата петролейным эфиром с температурой кипения 40-70°C при объемном соотношении сырье чаги или препарат чаги:растворитель 1:2, отделение полученного экстракта, удаление органического растворителя и определение количества тетрациклических тритерпенов в полученном сухом остатке спектрофотометрическим методом. Вышеописанный способ повышает точность количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье или препарате чаги за счет максимального избирательного извлечения этих соединений. 1 табл., 8 пр.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, может быть использовано для стандартизации сырья чаги и контроля качества лекарственных средств на основе чаги, а именно для количественного определения в них тетрациклических тритерпенов.

Фармакологическая активность сырья чаги и препаратов на его основе обусловлена наличием в них тетрациклических тритерпенов, для которых показана выраженная противоопухолевая активность (Kahlos K. [and others] // Planta Medica. - 1986. - №52. - P. 554, Nakata T. [and others] // Bioorganic & Medicinal Chemistry. - 2007.- V. 15, I. 1. - P. 257-264; M.J. Chung [and others] // Nutrition research and practice. - 2010. - V. 4, №3. - P. 177-182). Содержание тетрациклических тритерпенов в чаге не превышает 1% (Ловягина Е.В., Шиврина А.Н. // Биохимия. - 1962. - Т. 27. - №5. - С. 794-800; Жукович Е.Н. [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, №.3. - С. 35-37). Это обуславливает актуальность разработки чувствительных методов их количественного определения с целью стандартизации сырья чаги и препаратов на его основе.

Наиболее близким техническим решением, взятым за прототип, является способ количественного определения тетрациклических тритерпенов в препаратах «Чаги настойка» и «Бефунгин» (Жукович Е.Н. [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, №.3. - С. 35-37). В известном способе проводят исчерпывающую экстракцию препарата чаги диэтиловым эфиром при объемном соотношении препарат : растворитель 1:1, затем эфирный экстракт отделяют и обрабатывают 5% раствором едкого натра. После разделения фаз щелочной раствор, содержащий фенольные вещества, удаляют, а остаток эфирного экстракта промывают водой, фильтруют через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия и упаривают под вакуумом досуха с получением фракции, преимущественно содержащей тетрациклические тритерпены. Количественное содержание тетрациклических тритерпенов в полученной фракции определяют спектрофотометрическим методом.

Недостатком данного способа является некорректное определение реального содержания тетрациклических тритерпенов в сырье чаги и препаратах чаги, поскольку диэтиловым эфиром из сырья и препаратов чаги вместе с липофильными веществами (в том числе тетрациклическими тритерпенами) извлекаются фенольные соединения, что затрудняет их дальнейшее определение. Для удаления фенольных веществ полученный экстракт обрабатывают раствором едкого натра. При этом тетрациклические тритерпены частично переходят в щелочной раствор (Шиврина А.Н. // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. - М. - Л., 1965. - С. 59-64.), что в конечном результате не позволяет определить точное количество тетрациклических тритерпенов.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препаратах чаги, а также упрощение способа за счет исключения стадии удаления фенольных соединений.

Поставленная задача достигается способом, в котором к сырью чаги или препарату чаги добавляют петролейный эфир с температурой кипения 40-70°C при объемном соотношении сырье чаги или препарат чаги : растворитель 1:2, проводят исчерпывающую экстракцию, отделяют органический экстракт, удаляют из него растворитель с получением сухого остатка, в котором определяют количество тетрациклических тритерпенов спектрофотометрическим методом.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение точности количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препаратах чаги за счет максимального избирательного извлечения этих соединений.

Сущность способа заключается в следующем.

В заявляемом способе для исчерпывающей экстракции сырья чаги или препарата чаги используют петролейный эфир с температурой кипения 40-70°C. Выбор петролейного эфира в качестве растворителя обусловлен его селективностью по отношению к гидрофобным компонентам чаги, в том числе и к тетрациклическим тритерпенам. При этом в петролейном эфире, в отличие от диэтилового эфира, не растворяются вещества фенольной природы, содержащиеся в чаге в значительном количестве, что исключает необходимость проведения стадии очистки органического экстракта от фенольных веществ и, следовательно, позволяет предотвратить возможные потери тетрациклических тритерпенов. К тому же, диэтиловый эфир имеет достаточно высокую токсичность и стоимость, что делает применение петролейного эфира в лабораторной практике более рациональным. Объемное соотношение сырье чаги или препарат на его основе : растворитель составляет 1:2, что является оптимальным и позволяет извлечь максимальное количество экстрактивных веществ. Уменьшение количества растворителя приводит к снижению выхода экстрактивных веществ, а увеличение не влияет на выход этих веществ. Полученный органический экстракт, преимущественно содержащий тетрациклические тритерпены, отделяют, удаляют растворитель под вакуумом с получением сухого остатка и определяют в нем количество тетрациклических тритерпенов спектрофотометрическим методом. Избирательное извлечение из сырья чаги или препаратов чаги липофильных соединений (в том числе тетрациклических тритерпенов), исключение дополнительной стадии очистки позволяет увеличить точность определения реального содержания тетрациклических тритерпенов по сравнению со способом-прототипом.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Для анализа использовали стандартизированное сырье чаги и фармацевтические препараты «Бефунгин»:

сырье 1	сырье ООО «КФХ «Кентавр», партия 011209
сырье 2	сырье ООО «Алтай-Фарм», партия 101213
Бефунгин-1	«Бефунгин» ЗАО «Вифитех», серия 060911
Бефунгин-2	«Бефунгин» ОАО «Татхимфармпрепараты», серия 911211

Определение количества тетрациклических тритерпенов во всех примерах проводили спектрофотометрическим методом следующим образом. Сухой остаток, содержащий преимущественно тетрациклические тритерпены, перерастворяли в этиловом спирте. Далее к 1 мл спиртового раствора, содержащего тетрациклические тритерпены, добавляли 1 мл 10% спиртового раствора ванилина (№140821000 Acros Organics) и 5 мл 72% раствора серной кислоты, выдерживали при температуре 60°C в течение 10 мин, охлаждали и измеряли оптическую плотность при длине волны 550±5 нм относительно раствора сравнения (1 мл этилового спирта, 10% спиртовой раствор ванилина и 72% раствор серной кислоты). Расчет количественного содержания тетрациклических тритерпенов проводили по градуировочному графику зависимости оптической плотности растворов ланостерола-стандарта (№S446793-1EA Sigma-Aldrich) от их концентрации (0,016-0,08 мг/мл).

Пример 1 (по способу-прототипу)

К 5 мл Бефунгин-1 приливали 5 мл дистиллированной воды, перемешивали и добавляли 4 раза по 10 мл диэтилового эфира. Органический экстракт отделяли и добавляли к нему 5 мл 5% раствора едкого натра. Щелочной раствор удаляли. К органическому экстракту добавляли 5 мл дистиллированной воды для удаления остатков щелочи и фильтровали через бумажный фильтр с 2,5 г безводного сульфата натрия с целью удаления избытка воды. Из полученного экстракта удаляли растворитель на вакуумном испарителе при 25-30°C с получением сухого остатка, в котором определяли содержание тетрациклических тритерпенов вышеописанным способом.

Примеры 2-4 (по способу-прототипу). Аналогичны примеру 1, отличаются анализируемыми объектами.

Пример 5 (по изобретению)

К 5 мл Бефунгин-1 приливали 5 мл дистиллированной воды, перемешивали и добавляли 20 мл петролейного эфира. Проводили исчерпывающую экстракцию. Органический экстракт отделяли, удаляли растворитель на вакуумном испарителе при 25-30°C с получением сухого остатка, в котором определяли содержание тетрациклических тритерпенов вышеописанным способом.

Примеры 6-8 (по изобретению). Аналогичны примеру 5, отличаются анализируемыми объектами.

Результаты многократно проведенных экспериментов обработаны с помощью программы «Statistica 6.0» и приведены в таблице.

Качественный состав полученных экстрактов определяли методом тонкослойной хроматографии на пластинах «Sorbfil» с использованием двух систем растворителей: для разделения нейтральных липофильных соединений - №1 (петролейный эфир - диэтиловый эфир - уксусная кислота в соотношении 90:10:1, Кейтс М. Техника липидологии / М. Кейтс. - М., 1975. - 324 с.) и для разделения тетрациклических тритерпенов и стериновых веществ - №2 (хлороформ - этанол в соотношении 25:1; Жукович Е.Н. [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, №.3. - С. 35-37). Хроматограммы обрабатывали специфичным реагентом на стериновые и тритерпеновые вещества - раствором хлорного железа (Кейтс М. Техника липидологии / М. Кейтс. - М., 1975. - 324 с). Идентификацию веществ проводили по значениям коэффициента распределения (R_f). Присутствие в экстрактах сквалена, ланостерола и эргостерола подтверждено использованием стандартов-метчиков: ланостерол (№S446793-1EA Sigma-Aldrich), сквален (№S3626-10ML Sigma-Aldrich), эргостерол (№117810050 Acros Organics).

Проведенный анализ показал, что все экстракты сырья чаги и препаратов чаги, полученные с использованием диэтилового эфира и петролейного эфира, имеют одинаковый качественный состав и содержат биологически активные вещества - сквален, жирные кислоты, витамины E и K, кофермент Q, стерины и их эфирные формы (ланостерол и его производные, эргостерол). Таким образом, предлагаемый способ при использовании петролейного эфира позволяет извлечь из сырья и препаратов чаги те же липофильные вещества, что и в способе-прототипе при использовании диэтилового эфира.

Как показывают данные таблицы, предлагаемый способ позволяет более точно определить количество тетрациклических тритерпенов в сырье и препаратах чаги за счет избирательного извлечения петролейным эфиром липофильных соединений и исключения потерь тетрациклических тритерпенов. По сравнению со способом-прототипом предлагаемый способ позволяет определить в среднем в 2 раза больше тетрациклических тритерпенов в препаратах чаги и до 10 раз больше - в сырье чаги.

При экстракции препарата «Бефунгин» диэтиловым эфиром авторами (Жукович Е.Н. [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, №.3. - С. 35-37) были определены тетрациклические тритерпены в количестве 0,01-0,02 масс.% от абсолютного сухого веса препарата, в то время как содержание указанных соединений, определенное предлагаемым способом, составило 0,17±0,03 масс.%.

Таким образом, количественный анализ тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препаратах чаги по предлагаемому способу в сравнении с прототипом более точен, прост в исполнении, не требует дополнительных стадий очистки и значительно дешевле (в среднем в 4 раза).

Предлагаемый способ определения тетрациклических тритерпенов может быть использован для стандартизации сырья чаги или препаратов чаги на предприятиях фармацевтической промышленности.

Способ количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги, включающий исчерпывающую экстракцию сырья или препарата органическим растворителем, отделение полученного экстракта, удаление органического растворителя и определение количества тетрациклических тритерпенов в полученном сухом остатке спектрофотометрическим методом, отличающийся тем, что сырье или препарат экстрагируют петролейным эфиром с температурой кипения 40-70°C при объемном соотношении сырье чаги или препарат чаги:растворитель 1:2.

Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени, который включает приготовление кроличьей модели поражения роговицы и конъюнктивы путем абразии эпителия роговицы и конъюнктивы инстилляцией раствора n-гептанола в глаз кролика; и введение испытуемого агента в глаз кролика модели и оценку эффекта восстановления ткани роговицы под действием испытуемого агента, в котором наносимый объем раствора n-гептанола составляет всего от 0,03 до 0,05 мл, который капают 2-4 раза, и в котором кролика заставляют моргать 2-4 раза, в котором стадия приготовления дополнительно включает принуждение кролика к закрытию глаза на период от около 1 до около 3 минут после инстилляции раствора n-гептанола в глаз.

Биомаркер для болезни альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства // 2563987

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Сущность способа состоит в том, что способ включает измерение в крови десмостерола, бета-амилоида, гельсолина.

Способ идентификации водорастворимого лекарственного вещества путем сравнения с эталоном // 2560692

Изобретение относится к медицине и описывает способ идентификации водорастворимого лекарственного вещества путем сравнения с эталоном. Способ характеризуется проведением ионометрии, титрометрии и спектрофотометрии, при этом ионометрические исследования проводят с использованием различных концентраций лекарственного вещества, начиная от насыщенного раствора с уменьшением концентрации идентифицируемого вещества в каждом последующем растворе кратно по сравнению с предыдущим, титрометрические зависимости измеряют в различных концентрациях идентифицируемого лекарственного вещества, начиная от насыщенного раствора с уменьшением концентрации в каждом последующем титруемом растворе ниже, чем в предыдущем, в кратное число раз, титрующий раствор вводят равномерно в течение всего процесса титрования, дополнительное измерение спектрофотометрических зависимостей проводят не менее чем в двух разных концентрациях: насыщенного раствора и разбавленного в 10-20 раз, а измерения спектрофотометрических зависимостей проводят в двух растворителях: бидистиллированной воде и ином растворителе из ряда спиртов.

Способ количественного определения антоцианов в лекарственном растительном сырье // 2557953

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении анализа антоцианов в таком лекарственном растительном сырье, как плоды черники обыкновенной, аронии черноплодной, смородины черной и т.

Композиция, ингибирующая агрегацию тромбоцитов // 2557296

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению ингибиторов адгезии и/или агрегации тромбоцитов, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем с использованием матрицы кДНК слюнной железы Anopheles stephensi получают полипептид, который используют в составе фармацевтической композиции и в наборах для скрининга ингибиторов адгезии или агрегации тромбоцитов.

Способ количественного определения флавоноидов в желчегонном сборе № 3 // 2554780

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях при проведении анализа флавоноидов в лекарственном растительном сборе «Желчегонный сбор №3».

Способ извлечения новокаина из водного раствора // 2553373

Изобретение относится к аналитической химии и фармацевтике и может быть использовано при анализе остаточного содержания новокаина в водных средах. Способ извлечения новокаина из водных растворов включает приготовление водно-солевого раствора новокаина путем его растворения в насыщенном растворе высаливателя, экстракцию и анализ равновесной водной фазы, при этом в качестве экстрагента применяют раствор сольвотропного реагента в хлороформе с концентрацией 10 мас.%, для чего готовят водно-солевой раствор новокаина с pH 8,0±0,5 вследствие применения в качестве высаливателя насыщенного раствора сульфата аммония и добавления аммонийного буферного раствора, экстрагируют новокаин в течение 5-7 мин раствором сольвотропного реагента в хлороформе при соотношении объемов водно-солевого раствора новокаина и экстрагента 5:1, далее отделяют водно-солевую фазу от органической и анализируют методом УФ-спектрофотометрии при длине волны 291 нм, по градуировочному графику находят концентрацию новокаина в водном растворе; рассчитывают коэффициент распределения (D) и степень извлечения (R, %) новокаина по формулам.

Способ определения тиосульфата натрия в растворах // 2552311

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в системе контроля за содержанием тиосульфата натрия в растворах. Способ определения тиосульфата натрия в растворах характеризуется введением анализируемой пробы в реакционный сосуд, содержащий соответствующее количество фотогенерированного йода, полученного путем продувания 1-2 минуты воздухом и облучения стабилизированным источником света реакционной смеси, состоящей из 0,5 М раствора йодида калия, ацетатного буферного раствора с pH 5,6 и сенсибилизатора эозината натрия, фиксированием изменения тока в ячейке и по достижении его постоянства повторным продуванием реакционной смеси воздухом в течение 2-3 минут и повторным ее облучением стабилизированным источником света до достижения исходного количества йода в сосуде, фиксированием времени генерации йода, затраченного на восполнение его убыли, определением количества тиосульфата натрия по градуировочному графику по изменению силы тока и времени генерации.

Способ определения липоевой кислоты в биологически активных добавках методом катодной вольтамперометрии // 2550936

Изобретение относится к медицине и описывает способ определения липоевой кислоты в биологически активных добавках методом катодной вольтамперометрии, включающий перевод вещества из пробы в раствор и вольтамперометрическое определение, при этом проводят катодную вольтамперометрию на ртутно-пленочном электроде при потенциале -0.373 В относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода на фоне боратного буферного раствора pH 9,18 при постоянно токовой форме развертки потенциала со скоростью 0,06 В/с с областью определяемых содержаний липоевой кислоты от 4.5·106 до 1.1·10-3 моль/л.

Способ определения фунгицидной активности химических препаратов // 2546285

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано при определении фунгицидной активности химических препаратов в отношении грибов рода Fusarium - возбудителей болезней растений.

Способ получения средства, обладающего иммуностимулирующим действием // 2564906

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа получения средства, обладающего иммуностимулирующем действием. Способ получения средства, обладающего иммуностимулирующим действием, из корней софоры желтоватой заключается в том, что измельченные корни софоры желтоватой заливают водой, подвергают ультразвуковой обработке, далее смесь нагревают и экстрагируют при постоянном перемешивании, извлечение фильтруют, маточный раствор отбрасывают, шрот заливают водой и экстрагируют, извлечение фильтруют, маточный раствор отбрасывают, далее шрот заливают 90-95% этанолом, подвергают смесь ультразвуковой обработке, после чего смесь экстрагируют дважды, извлечения фильтруют, спиртовые извлечения объединяют и концентрируют, сгущенный экстракт высушивают и измельчают, смешивают с 10% этанолом и оставляют при постоянном перемешивании, нерастворившийся остаток отфильтровывают и высушивают, при определенных условиях.

Способ получения противовоспалительного средства вариант 1 // 2564005

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения противовоспалительного средства. Способ получения противовоспалительного средства из растительного сырья, заключающийся в том, что берут надземную часть Geranium wlassovianum Fisch.

Способ получения противовоспалительного средства вариант 2 // 2564004

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения противовоспалительного средства. Способ получения противовоспалительного средства из травы Geranium pratense Ledeb.

Способ получения противовоспалительного средства вариант 5 // 2564000

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения противовоспалительного средства. Способ получения противовоспалительного средства из надземной части Geranium eriostemon Fisch.

Способ получения противовоспалительного средства вариант 3 // 2563999

Способ получения вещества, обладающего антимикробной, противовирусной и иммуностимулирующей активностью, в частности, в отношении дендритных клеток, вещество, полученное этим способом, и фармацевтическая композиция на его основе // 2563818

Изобретения относятся к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения вещества; к веществу, обладающему антимикробной, противовирусной и иммуностимулирующей активностью в отношении дендритных клеток, и к фармацевтической композиции, обладающей антимикробной, противовирусной и иммуностимулирующей активностью в отношении дендритных клеток.

Способ увеличения степени извлечения экдистероидов и флавоноидов из растительных объектов // 2563616

Изобретение относится к способу извлечения экдистероидов и флавоноидов из растительного сырья. Способ извлечения экдистероидов и флавоноидов из растительного сырья заключается в экстракции смеси березового гриба чаги и надземной части Silene viridiflora или смеси плодов боярышника кроваво-красного и надземной части Lychnis chalcedonica, взятых в определенном соотношении, водно-спиртовым раствором, полученным путем добавления в этиловый спирт омагниченной воды, для чего добавляемую в спирт воду подвергают предварительному воздействию магнитного поля определенной напряженностью.

Генератор волны сжатия и поршневая система // 2562872

Изобретение относится к генератору волны сжатия среды и поршневой системы генератора и может быть использовано для инициирования химических или физических реакций в среде в камере, повышения температуры, давления энергии или плотности среды.

Способ отделения и очистки сульфида натрия // 2561625

Настоящее изобретение относится к способу извлечения и очистки сульфида натрия (Na2S), образованного в процессе десульфурации нефтяных остатков. Способ включает обработку шлама, содержащего Na2S, полученного в процессе десульфурации нефтяных остатков, смесью по меньшей мере одного органического растворителя и воды.

Способ ведения массообменных процессов и устройство для его осуществления // 2558594

Группа изобретений относится к области химического или гравитационного извлечения полезных компонентов и может быть использована в химической, горно-металлургической, строительной и других отраслях промышленности при проведении процессов, например, противоточного растворения, выщелачивания, отмывки или разделения по тонкодисперсным фракциям минерального сырья, металлургических порошков.

Способ комплексной коррекции мимических морщин периорбитальной области // 2566061

Изобретение относится к косметологии и дерматологии и представляет собой способ комплексной коррекции мимических морщин периорбитальной области путем инъецирования препаратов, заключающийся в том, что перед коррекцией проводят сбор анамнеза пациента и мимические тесты, по результатам которых определяют зоны для инъецирования, а коррекцию осуществляют в три этапа, причем на первом этапе проводят инъецирование ботулотоксина в 3 точки каждой периорбитальной области в дозировке по 10 ЕД, а через 10-15 дней проводят второй этап коррекции путем внутрикожного инъецирования филлера на основе гиалуроновой кислоты в технике микропапул с инфильтрацией по глубине до 2 мм сохранившихся после первого этапа морщин по всей их проекции, причем объем филлера для инъецирования одной морщины не превышает 0,1 мл, затем через 10-15 дней проводят третий этап коррекции путем внутрикожных линейно-ретроградных инъекций филлера на основе гиалуроновой кислоты перпендикулярно проекции морщин при объеме используемого препарата не более 0,1 мл на одну морщину.