Способ оценки реакции бласттрансформации лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии при специфической активации антигеном

Авторы патента:

Пономаренко Дмитрий Григорьевич (RU)

Костюченко Марина Владимировна (RU)

Логвиненко Ольга Васильевна (RU)

Ракитина Екатерина Львовна (RU)

Куличенко Александр Николаевич (RU)

Саркисян Нушик Сааковна (RU)

G01N33/533 - с флуоресцентными метками

Владельцы патента RU 2582395:

Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки реакции бласттрансформации лимфоцитов. Для этого используют бруцеллин для специфической активации лимфоцитов. Детекцию бластных форм лимфоцитов проводят с помощью моноклональных антител к CD34 с последующим подсчетом клеток методом проточной цитофлуориметрии. Использование данного способа позволяет проводить учет активированных бруцеллином лимфоцитов в РБТЛ с использованием моноклональных антител CD34 у больных бруцеллезом и здоровых доноров. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки интенсивности специфической активации антигеном лимфоцитов крови человека. Для этого проводят оценку реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) при стимуляции их в течение 72 часов антигеном, иммунофлуоресцентным методом на проточном цитофлуориметре. В качестве маркера бластных форм лимфоцитов используют моноклональные антитела к CD34.

Пролиферативный ответ лимфоцитов на определенный антиген дает представление о наличии и выраженности специфической сенсибилизации организма. Специфическими митогенами являются растворимые и корпускулярные антигены, которые вовлекают в процесс бласттрансформации иммунные к ним Т- и В-лимфоциты. В отличие от неспецифических стимуляторов, антигены активируют только те лимфоциты, которые несут специфические к нему рецепторы.

РБТЛ изучают в культуре лимфоцитов in vitro. При постановке РБТЛ у человека берут кровь, выделяют из нее лейкоциты и вносят их в среду 199, затем добавляют специфический антиген или митоген. Учет реакции после стимуляции антигенами производят через 3-5 суток. Под влиянием специфических антигенов в бласты трансформируются не более 7-12% малых лимфоцитов.

Количество образовавшихся бластных клеток в мазках крови определяют с использованием обзорной окраски по Романовскому-Гимзе [B.C. Камышников, 2011]. Однако из-за низкой объективности и трудоемкости (подсчет не менее 1000 лимфоцитов) учета результатов реакции микроскопическим методом был заменен на метод с использованием радиоактивной метки 3Н-тимидина, которая при инкубации встраивается в бласттрансформированные лимфоциты, с последующим подсчетом радиоактивности на автоматическом сцинтилляционном β-счетчике [Дж. М. Клаус, 1990]. Использование радиоактивной метки в РБТЛ считается объективным методом учета при исследовании функционального состояния лимфоцитов в качестве показателя активности клеточного иммунитета, который описан как в отечественной, так и в зарубежной литературе [К.А. Лебедев, И.Д. Понякин, 2003; Л. Йегер, 2007; Т.В. Ferreira et all, 2014; J. Kolata et all, 2015]. Однако необходимость использования радиоактивного 3Н-тимидина в качестве метки для оценки функционального состояния лимфоцитов при антигенной стимуляции в РБТЛ резко ограничивает широкое внедрение метода в лабораторную практику, так как требует специальных условий для его проведения. Прототипом предлагаемого способа, можно считать метод использования моноклональных антител к рецептору Ki-67 для оценки пролиферативной активности лимфоцитов при стимуляции фитогемагглютинином [Е.Г. Артеменко, 2004; Т.И. Булычева, Н.Л. Дейнеко, А.А. Григорьев, 2014]. Однако в данном случае учет реакции проводят методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью люминесцентного микроскопа, что также усложняет учет реакции (подсчет не менее 1000 клеток) и не исключает долю субъективности, за счет разного восприятия у исследователей интенсивности свечения флюорохрома.

Спектр применения РБТЛ в практике достаточно широк: оценка иммунного статуса, изучение механизмов активации клеток при пролиферации, оценка действия иммунотропных и иммуномодулирующих средств [Н.Н. Дергунова, 2003; B.C. Камышников, 2011; P.C. Janson, 2011; Р. Marits, 2014]. В последнее время в связи с резким увеличением количества работ по трансплантации органов и костного мозга, при онкологических и онкогематологических заболеваниях этот тест становится особенно востребованным. В связи с вышеизложенным, в настоящее время повышается актуальность внедрения новых, объективных способов учета результатов РБТЛ с использованием высокоточного аналитического оборудования.

В практике здравоохранения при иммунофенотипировании бластных форм лимфоцитов используют моноклональные антитела к CD34 [С.А. Луговская, М.Е. Почтарь, 2005; Г.Э. Плужникова, 2008; В. А. Зурочка, А.В. Зурочка, Е.Г. Костоломова, 2012; W.R. Widowati et all, 2014; F. Liu et all, 2015].

Реакция основана на экспрессии гемопоэтическими бластными лимфоидными клетками антигена CD34 и заключается в том, что клетки инкубируют с моноклональными антителами к CD34. Подсчет количества бластных форм лимфоцитов (CD34⁺) осуществляют автоматически с помощью проточной цитофлуориметрии.

В доступной литературе не обнаружены данные об использовании проточной цитофлуориметрии для подсчета бласттрансформированных клеток в РБТЛ с применением моноклональных антител к CD34.

Задачей изобретения является повышение качества учета активированных антигеном лимфоцитов в РБТЛ с использованием моноклональных антител CD34 при помощи проточного цитофлуориметра.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом. В стерильную пробирку, содержащую 1 мл среды 199, добавить 100 Ед пенициллина и 10 Ед стрептомицина, внести антиген и 100 мкл плазмы с лейкоцитами крови пациентов. Для оптимального протекания РБТЛ необходимо присутствие макрофагов, поэтому использовать высокоочищенные лимфоциты не рекомендуется [В.А. Зурочка, А.В. Зурочка, Е.Г. Костоломова, 2012], для моделирования клеткам специфического микроокружения в смесь добавляли 100 мкл аутологичной сыворотки. Реакционную смесь культивировали в CO₂-инкубаторе при 37°С в течение 72 часов с последующим центрифугированием при оборотах 2000g 10 мин, надосадочную жидкость сливали. К 50 мкл осажденных клеток приливали 10 мкл моноклональных антител к антигену CD34, конъюгированных с флуорохромом, инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут. Далее добавляли 500 мкл лизирующего раствора в разведении 1:10, не содержащего фиксирующих компонентов, и инкубировали в течение 10-12 минут в темноте при комнатной температуре. Клетки осаждали центрифугированием при 2000g в течение 5 минут, освобождали от надосадочной жидкости. К получившемуся осадку приливали 450 мкл отмывочного буфера (Cell Wash) и ресуспендировали. Подсчитывали количество бластных клеток (CD34) на проточном цитофлуориметре, при этом в каждой пробе анализировали 30000 клеток.

Подсчет количества бластных клеток (CD34) осуществляли непосредственно после окончания реакции.

На примере больных бруцеллезом была изучена специфичность и чувствительность предлагаемого способа. В качестве антигена использовали бруцеллин - производство «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России (Россия). Для определения специфичности заявляемого способа, при постановке РБТЛ, в плазму вносили антигены: тулярин - производство «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России» (Россия) и туберкулин - производство ФГУП СПбНИИВС ФМБА (Россия). Пред постановкой РБТЛ определяли фоновое количество CD34⁺ лимфоцитов у больных бруцеллезом и относительно здоровых доноров. Для контроля спонтанной неспецифической пролиферации лимфоцитов у обследуемых, в пробы вносили равный с антигеном объем (50 мкл) стерильного физиологического раствора.

Проведена сравнительная оценка способов подсчета бластных клеток в анализируемом материале по заявляемому способу и применяемого в лабораторной практике обзорного окрашивания мазков по Романовскому-Гимзе. Объектом исследования служили 55 образцов крови больных бруцеллезом (40) и относительно здоровых доноров (15).

Постановку РБТЛ с плазмой крови каждого образца осуществляли одновременно. Осажденные клетки после инкубации использовали для приготовления мазков на предметном стекле с последующей их окраской по Романовскому-Гимзе и подсчетом количества бластных клеток в световом микроскопе. Часть клеток инкубировали с моноклональными антителами к антигену CD34, и по окончании инкубации определяли количество бластных лимфоцитов в проточно-цитометрическом анализе.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием программы Microsoft Excel 2010. Для выявления статистической значимости различий результатов использовали t-критерий Стьюдента, при уровне достоверности Р≤0,05.

Полученные результаты представлены в таблице. Как видно из таблицы, уровень пролиферативного ответа лимфоцитов на бруцеллин, у неинфицированных возбудителем бруцеллеза и больных бруцеллезом, достоверно различался (Р≤0,001).

Активация лимфоцитов крови туберкулином и тулярином не стимулировала статистически достоверного увеличения количества CD34⁺ клеток, выявляемых после постановки РБТЛ, что свидетельствует о специфичности предлагаемого способа.

Таким образом, предлагаемый способ оценки реакции бласттрансформации лимфоцитов при стимуляции антигеном, с применением проточной цитофлуориметрии не требует специальных условий проведения, как при использовании радиоактивной метки, отличается простотой учета и высокой объективностью за счет большего количества автоматически учтенных клеток (30000 клеток), высокой чувствительностью (100%) и специфичностью (>99%).

Способ оценки реакции бласттрансформации лимфоцитов, включающий использование бруцеллина для специфической активации лимфоцитов и моноклональных антител к CD34 для детекции бластных форм лимфоцитов, с последующим подсчетом количества клеток методом проточной цитофлуориметрии.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования развития безрецидивной выживаемости у больных множественной миеломой после аутологической трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

Способ диагностики нагноившейся постнекротической псевдокисты поджелудочной железы // 2578448

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики нагноившейся постнекротической псевдокисты поджелудочной железы.

Способ лабораторной диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии // 2574968

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии. Для этого окрашивают исследуемый образец крови моноклональными антителами CD235a (FITC)/ CD59(PE)/CD71 (АРС).

Способ диагностики наследственной оптической нейропатии // 2566271

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для диагностики наследственной оптической нейропатии (НОН). Для этого проводят клинические и цитологические исследования и дополнительно из кожи пациента получают культуру фибробластов плотностью 5000-10000 клеток на см2, окрашивают митохондриальным потенциалзависимым флюоресцентным красителем TMRE до конечной концентрации 25 нМ.

Иммунологические исследования с использованием недисперсного хемилюминесцентного реактива // 2559581

Изобретение относится к медицине и описывает хемилюминесцентный реактив для определения присутствия и/или количества анализируемого вещества в образце с предполагаемым содержанием анализируемого вещества, при этом реактив является недисперсным и растворимым в водной среде и содержит партнера по связыванию для анализируемого вещества и хемилюминесцентную композицию, содержащую олефиновое соединение и хелат металла, где олефиновое соединение является соединением, которое способно реагировать с синглетным кислородом присоединением 2+2 с образованием диоксетана или которое способно реагировать с синглетным кислородом с циклоприсоединением 4+2 с диенами, и где металл или хелат металла представляет собой редкоземельный металл или металл Группы VIII, и где металл координирован с двумя или более атомами той же молекулы или хелирующего агента, где два или более атомов выбраны из группы, состоящей из кислорода, азота и серы.

Биомаркер для мониторинга пациентов // 2555340

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для определения еx-vivo эффективности лечения рака. Для этого после введения одной или более доз иммуногенной композиции субъекту измеряют уровень активированных Т-лимфоцитов (CD3+ CD69+) в организме.

Способ определения генотипа человека по полиморфизму в гене матриксной металлопротеиназы ммр9-1562 с>т (rs3918242) // 2548811

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для определения генотипа человека по полиморфизму в гене матриксной металлопротеиназы ММР9-1562 C>Т (rs3918242).

Способ определения биологической активности эмбрионированных яиц trichuris // 2540145

Изобретение касается способа определения биологической активности эмбрионированных яиц Trichuris. Охарактеризованный способ включает осуществление по меньшей мере 3-х анализов, выбранных из: - оценки и/или подтверждения стадии эмбрионального развития яиц с помощью метода количественной ПЦР с использованием пригодных маркерных последовательностей для определения количества копий геномной ДНК, - оценки метаболической активности эмбрионированных яиц с помощью биохимических и/или молекулярно-биологических методов, - оценки индуцибельности генной экспрессии в эмбрионированных яйцах, - оценки подвижности личинок Trichurs с помощью микроскопа в течение продолжительных периодов наблюдения после предварительной инкубации при повышенных температурах и/или - оценки коэффициента вылупляемости личинок Trichuris в организме лабораторного животного.

Способ прогнозирования риска сердечно-сосудистой летальности у больных с хронической сердечной недостаточностью ишемической этиологии, сочетающейся с сахарным диабетом 2 типа // 2531947

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования риска сердечно-сосудистой летальности у пациентов с постинфарктной хронической сердечной недостаточностью, сочетающейся с сахарным диабетом 2 типа.

Способ дифференциальной диагностики злокачественной и доброкачественной патологии молочной железы // 2530557

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и клинической биохимии. Сущность способа заключается в том, что фиксированные клетки периферической крови обрабатывают первичными антителами к эстроген-связываюшему белку, специфически взаимодействующими с антигенами на поверхности сегментоядерных гранулоцитов, затем к полученному комплексу антиген-антитело добавляют вторичные антивидовые флуоресцентно-меченные антитела, и при наличии окрашивания поверхности сегментоядерных гранулоцитов диагностируют злокачественные новообразования, а при отсутствии окрашивания поверхности сегментоядерных гранулоцитов диагностируют доброкачественные новообразования.

Способ определения антител к аллогенным hla-g // 2585091

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения антител к аллогенным HLA-G в сыворотки крови. Для этого используют тест перекрестной совместимости (cross match) мононуклеаров донора с сывороткой реципиента. Проводят анализ субпопуляций мононуклеаров с помощью проточной цитофлуорометрии на связывание моноклональных антител HLA-G и оценивают степень экспрессии HLA-G на опытных и контрольных мононуклеарах донора. При этом значимыми являются субпопуляции CD3-HLA-G+ и CD3+HLA-G+, по которым рассчитывают коэффициент подавления (КП) в опытной постановке по отношению к контрольной по формуле: КП HLA-G = ( H L A − G О П − H L A − G К О Н Т ) H L A − G К О Н Т × 100, где HLA-Gоп - суммарное относительное число субпопуляций экспрессирующих HLA-G: (CD3-HLA-G++CD3+HLA-G+) в опытной постановке, %; HLA-Gконт - суммарное относительное число субпопуляций экспрессирующих HLA-G: (CD3-HLA-G++CD3+HLA-G+) в контрольной постановке, %. При этом наличие сенсибилизации к аллогенным HLA-G диагностируют при отрицательном значении КПHLA-G. Использование данного способа позволяет выявлять аллогенную сенсибилизацию к HLA-G с помощью проточной цитофлуориметрии, определяя субпопуляции CD3-HLA-G+ и CD3+HLA-G+. 3 пр., 3 ил., 2 табл.

Способ прогнозирования рецидива угрожающего выкидыша // 2585244

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования рецидива угрожающего выкидыша. Для этого проводят иммунологическое исследование периферической венозной крови в 7-12 недель гестации у женщин с угрозой невынашивания беременности. После проведенного лечения угрозы прерывания беременности определяют относительное содержание CD45RA-CD62L- в популяции CD8+ лимфоцитов. При его значении более 23,9% прогнозируют возникновение угрожающего выкидыша во втором триместре у женщин с привычным невынашиванием в анамнезе. Использование данного способа позволяет прогнозировать рецидив угрожающего выкидыша во втором триместре гестации, что позволит выбрать правильную тактику ведения беременной женщины, позволит снизить частоту данного осложнения. 1 табл., 4 пр.

Способ контроля эффективности облучения донорской крови с помощью реакции активации лимфоцитов фитогемагглютинином // 2589281

Изобретение относится к медицине, а именно к трансфузиологии, и может быть использовано для контроля эффективности облучения донорской крови. Способ включает постановку реакции бласттрансформации клеток крови с митогеном фитогемагглютинином и учет результатов реакции путем определения индекса стимуляции лимфоцитов. Постановку реакции проводят в отношении облученной донорской крови, учет результатов выполняют с помощью проточного цитофлюориметра с использованием моноклональных антител, меченных разными флюорохромами, проведением гейтирования активированных лимфоцитов со сниженной экспрессией общелейкоцитарного маркера CD45 и определением среди них процента дубль-негативных Т-лимфоцитов с иммунофенотипом CD3+CD4-CD8-, при этом в качестве контроля берут необлученный образец той же крови. После чего определяют эффективность облучения по соотношению содержания дубль-негативных Т-лимфоцитов с иммунофенотипом CD3+CD4-CD8- в проверяемой облученной и той же необлученной контрольной крови как Эоб=Сднтло-Сднтлк, где Эоб - эффективность облучения, Сднтло - процент содержания дубль-негативных Т-лимфоцитов с иммунофенотипом CD3+CD4-CD8- в опыте (в проверяемой облученной крови), Сднтлк - процент содержания дубль-негативных Т-лимфоцитов с иммунофенотипом CD3+CD4-CD8- в контроле (в необлученном образце той же крови). При разнице с контролем более чем в 50% делают вывод о функциональной неполноценности Т-лимфоцитов в облученной крови и иммунологической безопасности данного препарата крови для реципиента. Использование данного способа позволяет определять эффективность облучения донорской крови методом проточной цитометрии.

Способ прогнозирования угрожающего позднего выкидыша у женщин с угрозой прерывания беременности ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе // 2592241

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и позволяет прогнозировать угрожающий поздний выкидыш у беременных женщин. Для этого в сроке 5-12 недель гестации определяют относительное количество CD178+ моноцитов гестации в периферической венозной крови. При его значении равном 37,7% или менее в моноцитарном гейте прогнозируют угрожающий поздний выкидыш у женщин с угрозой прерывания беременности ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе. Использование данного способа позволяет выбрать правильную тактику ведения беременности, провести комплекс лечебно-профилактических мероприятий и снизить риск развития осложнений и неблагоприятных исходов беременности в группе женщин с высоким риском невынашивания беременности. 3 пр., 1 табл.

Способ выбора тактики ведения беременных с плацентарной недостаточностью и синдромом задержки роста плода /сзрп/ // 2595884

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и касается выбора тактики ведения беременных с плацентарной недостаточностью и синдромом задержки роста плода (СЗРП). Для этого у пациенток с фетоплацентарной недостаточностью и ЗРП в сыворотке крови иммуноферментным методом определяют активность супероксиддисмутазы, содержание фактора роста плаценты, эндоглина и мелатонина. По этим показателям рассчитывают прогностический коэффициент П по формуле: П=(0,0001*COD+0,0255*Mel+0,1636*CD105+(-0,0487*PGF)-8,5389, где COD - супероксиддисмутаза, пг/мл, Mel - мелатонин, пг/мл, CD 105 - эндоглин, пг/мл, PGF - фактор роста плаценты, пг/мл. При величине П равной 0,64 и более прогнозируют высокий риск развития критического состояния плода в антенатальном периоде, что требует завершения беременности путем операции кесарево сечение в экстренном порядке в интересах плода. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования критического состояния плода антенатально, что позволяет своевременно выбрать адекватную тактику ведения пациентки. 2 пр.

Способ дифференциальной экспресс-диагностики острых вирусных и бактериальных инфекций // 2602677

Изобретение относится к области медицины, а именно к отоларингологии, и может быть использовано для дифференциальной экспресс-диагностики острых вирусных и бактериальных тонзиллитов у взрослых. Для этого проводят забор периферической крови и определяют относительное содержание субпопуляций нейтрофильных гранулоцитов, одновременно экспрессирующих CD16, CD11b на поверхностной мембране. Принимают за норму наличие субпопуляции CD16brightCD11bdimНГ% от 80 и до 99,9% с высокой плотностью экспрессии CD16 и низкой плотностью экспрессии CD11b. При условии выявления субпопуляции CD16brightCD11bbrightНГ или CD16dimCD11bbrightНГ в количестве от 40% и более определяют соответственно острую вирусную инфекцию или острую бактериальную инфекцию. Использование данного способа позволяет обеспечить точность дифференциальной диагностики острых вирусных и бактериальных тонзиллитов у взрослых. 3 пр., 1 табл.

Способ одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов и устройство иммунохроматографического анализа для его реализации // 2614689

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных. Характеризуется использованием как минимум пяти иммунохроматографических стрип-тестов, размещенных в едином корпусе. При этом в первом и втором каналах корпуса устройства находятся стрип-тесты для выявления токсинов, в третьем канале - стрип-тест для выявления вегетативных форм бактерий, в четвертом - споровых форм бактерий, а в пятом - стрип-тест для выявления питательной среды культивирования вирусов и риккетсий. Тестирование ведут путем укладки корпуса иммунохроматических стрип-тестов в теплоизолирующий цефленовый пакет, состоящий из двух слоев цефлена, с теплоизолирующей прокладкой из пористого теплоизолирующего материала между ними, а корпус иммунохроматографических стрип-тестов внутри пакета нагревают источником постоянного тепла, причем отверстие пакета закрывают механическим зажимом и считают этот момент началом тестирования. Также предложено устройство для иммунохроматографического анализа. Группа изобретений позволяет увеличить производительность иммунохроматографического анализа, расширить температурный диапазон иммунохроматографического анализа от минус 20 до плюс 50°C, сократить время получения результата до 10 мин по сравнению с анализом при комнатной температуре (20 мин), при условии достижения одинаковой чувствительности, повысить чувствительность анализа по сравнению с анализом, проводимым при комнатной температуре. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 5 ил., 4 табл., 8 пр.

Способы и средства для мониторинга нарушения тканевого гомеостаза в организме // 2635767

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для ранней диагностики и мониторинга заболевания у субъекта с использованием циркулирующих тканевых макрофагов. Способ включает этапы: a) обеспечения биологического образца для тестирования от указанного субъекта, причем указанный образец содержит циркулирующие тканевые макрофаги (СТМ); b) окрашивания указанных СТМ с использованием панели дифференциально меченых различных антител против опорных маркеров CD14, CD16, CD300e, CD36 и HLADR с целью идентификации и подсчета различных субпопуляций СТМ; c) фиксации, пермеабилизации и окрашивания СТМ с использованием одного или нескольких антител для обнаружения против одного или более эпитопов по меньшей мере одного протеазо-индуцированного фрагмента белка, полученного в результате внутриклеточной деградации не принадлежащего СТМ белка, отдельными СТМ в тканях, из которых они происходят, тем самым идентифицируя по меньшей мере одну субпопуляцию циркулирующих тканеспецифических макрофагов (CTSM). Далее проводят анализ с применением многопараметрической проточной цитометрии указанных окрашенных СТМ и CTSM путем селективного пропускания по опорным маркерам CD14, CD16, CD300e, CD36 и HLADR с целью определения количества сигналов каждого определенного меченого антитела, связанного с отдельными клетками. Определяют относительное и абсолютное количество отдельных клеток в каждой субпопуляции СТМ и каждой специфической субпопуляции CTSM, экспрессирующих каждый из измеренных внутриклеточных эпитопов. Расчет относительного и абсолютного количества клеток проводят в каждой субпопуляции СТМ и каждой специфической субпопуляции CTSM, каждое из которых происходит из различных нормальных и измененных тканей, что определяют с помощью оцениваемого набора отдельных протеазо-индуцированных фрагментов белка. Проводят определение количества связанного с антителами сигнала, ассоциированного с каждым отдельным оцениваемым внутриклеточным пептидом, с целью получения профиля окрашивания CTSM. А также сравнивают тестируемый профиль окрашивания CTSM с нормальным профилем окрашивания CTSM для каждой оцениваемой ткани, причем повышенное количество CTSM свидетельствует о наличии заболевания. Группа изобретений относится также к набору для ранней диагностики и мониторинга заболевания у субъекта с использованием циркулирующих тканевых макрофагов. Использование данной группы изобретений позволяет проводить раннюю диагностику и мониторинг заболевания у субъекта с использованием циркулирующих тканевых макрофагов по опорным маркерам CD14, CD16, CD300e, CD36 и HLADR. 2 н. и 21 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр., 7 ил.

Способ получения аналитической тест-системы на основе суспензионных микрочипов для детекции маркеров заболеваний // 2638787

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения аналитической тест-системы на основе суспензионных микрочипов для детекции маркеров заболеваний. Для этого создают суспензионные микрочипы путем оптического кодирования микросфер различного диаметра флуоресцентными красителями с их последующим конъюгированием с биологическими распознающими молекулами. Создают детектирующие компоненты путем конъюгирования биологических детектирующих молекул с флуоресцентными красителями. Для оптического кодирования микросфер различного диаметра используют полупроводниковые флуоресцентные нанокристаллы, которые наносят послойно на поверхность микросфер. При этом слой полупроводниковых флуоресцентных нанокристаллов одного цвета пространственно отделяют от соседнего слоя полупроводниковых флуоресцентных нанокристаллов другого цвета тремя и более слоями полиэлектролитов. Для формирования внешнего слоя полиэлектролита используют полимер, включающий функциональные группы для специфического и/или ориентированного конъюгирования биологических распознающих молекул. Для маркирования биологических детектирующих молекул используют флуоресцентные красители, возбуждаемые на одной длине волны с используемыми полупроводниковыми флуоресцентными нанокристаллами. Изобретение позволяет создать тест-системы, позволяющие детектировать и количественно определять множество различных белковых маркеров, например онкологических заболеваний женской репродуктивной системы, методами проточной цитометрии на стандартных проточных цитометрах. 21 з.п. ф-лы, 3 ил.

Способ определения цист лямблий и ооцист криптоспоридий в клиническом материале, смывах с объектов окружающей среды, в почве // 2638810

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и представляет собой способ определения в одной постановке цист лямблий и ооцист криптоспоридий в биологическом материале - кале, в смывах объектов окружающей среды и в почве, заключающийся в подготовке пробы, внесении в пробу иммуномагнитных частиц, иммунохимическом связывании, в результате чего образуются агрегаты цист и ооцист с магнитными частицами, улавливании агрегатов цист и ооцист в магнитном поле, отмывке зафиксированных агрегатов цист и ооцист буферным раствором, диссоциации меркаптоэтанолом или соляной кислотой, разделении цист, ооцист и магнитных частиц в магнитном поле, переносе выделенных цист и ооцист на предметное стекло для последующего иммунофлуоресцентного мечения и последующей оценки микроскопированием с применением насадки «Опти-Люм» на микроскоп, где результат учитывают исходя из того, что цисты лямблий представляют собой сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от округлых до овальных от 8 до 14 мкм в длину на 7-10 мкм в ширину, с ярко подсвеченными краями, ооцисты же криптоспоридий представляют собой сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от овальных до сферических от 3 до 5 мкм в диаметре, с ярко подсвеченными краями. Изобретение обеспечивает повышение эффективности определения в одной постановке цист лямблий и ооцист криптоспоридий в биологическом материале - кале, в смывах с овощей и объектов окружающей среды, в почве и сокращение временных затрат на исследование одной пробы исследуемого материала адаптированным до 15 минут. 7 пр., 7 табл., 1 ил.